目的:改良人主动脉平滑肌细胞的原代提取培养方法。方法:采用改良过的组织块贴壁法提取人主动脉平滑肌原代细胞，无多聚左旋赖氨酸(Poly-L-Lysine，PLL)包被为阴性对照组，PLL包被为实验组。采用免疫荧光技术鉴定细胞纯度；蛋白印迹法判断细胞表型变化；细胞计数仪计算传代后细胞的贴壁率；CCK8法鉴定两组细胞生长活力的差别。结果:实验组细胞爬出率及成活率明显高于阴性对照组( P<0.05)；倒置显微镜及免疫荧光显示两组细胞形态与标志蛋白表达差异无统计学意义；蛋白印迹法显示两组细胞表型改变差异无统计学意义；细胞贴壁率比较，实验组细胞明显高于阴性对照组( P<0.05)；CCK8法显示实验组细胞于48、60、72 h时活性明显高于阴性对照组( P<0.05)。 结论:预包被PLL能够提高人主动脉平滑肌细胞的提取效率、贴壁效率和生长活力，同时不会改变细胞表型。

目的 制备载氧化铁(IO)/PLGA 微粒(PLGA/IO M Ps),探讨其标记大鼠肌腱干细胞(TSCs)以及体外超声(US)/光声(PA)/磁共振(MRI)多模态成像的可行性.方法 使用双乳化法制备PLGA/IO MPs,并进行理化性质检测及US/PA/MRI成像.应用PLGA/IO MPs标记 TSCs,并用透射电镜(TEM)及普鲁士蓝染色观察标记效果,然后对标记后 TSCs进行体外 US/PA/MRI成像.结果 制备的PLGA/IO MPs粒径约(801.5 ± 165.6)nm,Zeta电位约(-6.36 ± 3.36)mV[含多聚左旋赖氨酸约(3.16 ± 3.69)mV].PLGA/IO MPs具有体外US/PA/MRI多模态显像的能力,标记TSCs后,PLGA/IO MPs位于TSCs细胞质内,且标记的 TSCs能同时进行 US、PA和MRI成像显示出相应的影像学信号.结论 PLGA/IO MP能够对TSCs进行有效标记,并成功行体外 US/PA/MRI多模态成像,为活体内移植后TSCs的无创、多模态示踪奠定了基础.

背景:近年来原代神经元细胞模型在颅脑疾病中扮演着重要的角色,此类细胞模型特性更加贴近于疾病细胞,可用于模拟研究各类神经系统疾病.目的:建立一种便捷实用的可同时提取皮质及海马原代神经元的培养方法.方法:取新生24 h内的SD大鼠,麻醉后断脊法处死,采用体积分数为75％乙醇消毒,用镊子分离出颅骨及脑膜,解剖出完整大脑,剥离脑血管膜,游离出大脑皮质及海马组织,采用木瓜蛋白酶及适量DNA酶顺序消化方案,吹打、离心、过滤,然后接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板和爬片内,以含体积分数10％胎牛血清的DMEM-F12培养基为种植液,6 h后换用含有B27的Neurobasal无血清专用培养基,持续培养7 d后,显微镜下观察细胞形态及生长状态.分别采用β-Tubulin免疫荧光法、Neun抗体免疫组化法鉴定皮质神经元与海马神经元,以及采用MAP2免疫荧光法鉴定其纯度.结果 与结论:①接种24 h后细胞体积变清晰,呈不规则圆形、周围环绕光晕,少数细胞已有细小突起,均已贴壁生长;持续培养3 d后,胞体逐步增大,部分呈聚团性生长,突触延长,细胞间出现交联;持续培养7 d后,胞体成熟饱满,细胞质显著增多,光晕增强,形成更为密集的神经元网络;②经Neun抗体免疫组化法、β-Tubulin免疫荧光法鉴定为神经元,神经元标志物MAP2免疫荧光法鉴定皮质神经元和海马神经元纯度分别为(94.00±0.34)％和(91.00±0.26)％,可用于后期实验;③结果 表明,采用同一批24 h内新生SD大鼠分离大脑皮质和海马组织,经木瓜蛋白酶与DNA酶顺序消化后,可提取到优质的海马神经元及皮质神经元.该方案得到的神经元纯度高,操作简化,可作为研究各类神经系统疾病细胞模型的基础.

分子量15万-30万的多聚左旋赖氨酸(Poly-L-Lysine,PLL)常被用于盖玻片的包被,以促进培养细胞贴壁或切片组织黏附.然而,用市场上劣质的PLL将使组织或细胞不能牢固黏附在包被玻片上,进而导致实验失败.因而,建立实用直观的PLL质量检测方法,对于PLL包被玻片的质量控制至关重要.然而,目前世界上未见相关方法报道.因此,作者本着实用原则建立了一种实验室可视化检测盖玻片表面PLL的方法,这种方法利用化学反应将异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)添加到PLL的侧链氨基(-NH2)上,再利用荧光成像检测附着在玻片表面的FITC-PLL,同时荧光照片也可以通过Fiji软件进行分析,获得定量的检测结果.利用此方法,研究发现利用不同浓度的PLL包被盖玻片后,PLL偶联的FITC荧光强度和PLL浓度成正相关.通过检测市面上的两种商品化PLL,与对照相比,两种商品化PLL附着密度极低,推断利用这两种不合格的PLL包被玻片,将导致切片样本从玻片上脱落.此方法适用于实验室自制或商品化PLL黏附盖玻片质量的可视化检测,也为附着在玻璃或塑料表面的带有-NH2基团物质的定量检测方法的建立提供参考.