目的:探讨外源性给予脑源性神经营养因子前体(brain-derived neurotrophic factor precursor，proBDNF)后脑卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)大鼠额前皮质凋亡信号通路蛋白的表达变化。方法:在55只健康成年雌性SD大鼠中，随机选取25只作为PSD组，其余30只随机分为正常组、抑郁组、卒中组，每组10只。卒中组采用线栓法建立大脑中动脉栓塞模型；抑郁组采用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)结合孤养法制备大鼠慢性应激抑郁模型；PSD组采用线栓法建立MCAO模型，术后1周加以CUMS及孤养法制备PSD模型；PSD组大鼠造模后2周，随机选取15只进行侧脑室埋管，并随机分为proBDNF组、组织型纤溶酶原激活剂组(tPA组)和NS组，埋管后1周进行侧脑室注射tPA、ProBDNF，连续给药1周。于造模后第4周及第8周末采用Western blot检测各组大鼠额前皮质c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)、p-JNK、p53、p-p53、Bax蛋白表达。采用SPSS 17.0进行数据分析，组间比较采用单因素方差分析，采用SNK- q进行两两比较。 结果:大鼠MCAO造模第4周末和第8周末，正常组、抑郁组、卒中组和PSD组大鼠额前皮质p-p53、p53、p-JNK、JNK和Bax表达均差异有统计学意义( F＝3.426~90.355，均 P<0.05)。事后两两比较结果显示，相比正常组，在第4周末，PSD大鼠额前皮质p-JNK(0.378±0.042)、Bax(0.478±0.054)蛋白的表达均升高(均 P<0.05)；在第8周末，PSD组大鼠额前皮质中p-JNK(0.411±0.056)、p-p53(0.286±0.083)、Bax(0.471±0.008)蛋白表达均升高(均 P<0.05)。予侧脑室注射proBDNF后，proBDNF组、tPA组和NS组p-p53、p53、p-JNK、JNK和Bax表达差异有统计学意义( F＝16.915~287.039，均 P<0.01)。事后两两比较结果显示，相比NS组，proBDNF组大鼠额前皮质p-JNK(0.35±0.01)、p-p53(0.31±0.01)的表达显著增加(均 P<0.05)。予侧脑室注射proBDNF后，proBDNF组、tPA组和NS组大鼠体质量、蔗糖偏好率、水平运动距离和垂直运动距离均差异有统计学意义( F＝18.741~76.305，均 P<0.01)，与NS组和tPA组相比，proBDNF组行为学指标[体质量(224.36±3.23)g、蔗糖偏好率(69.83±1.72)%、水平运动距离(57.93±2.09)格、垂直运动距离(19.79±1.81)次]均显著下降(均 P<0.05)。 结论:proBDNF促进了PSD大鼠凋亡信号通路的激活。

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)-维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)-白细胞介素17(IL-17)信号通路在中性粒细胞哮喘小鼠气道炎症中的作用机制。方法:本研究为实验研究。按随机数字表法将36只雌性BALB/C小鼠分为3组：正常对照组、嗜酸粒细胞哮喘组、中性粒细胞哮喘组，每组12只。腹腔注射卵清蛋白(OVA)致敏、雾化OVA激发制备嗜酸粒细胞哮喘模型；OVA腹腔注射联合脂多糖经鼻滴入、OVA雾化激发制备中性粒细胞哮喘模型；正常对照组以生理盐水代替OVA致敏及激发。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计算细胞总数及HE染色行分类计数。肺组织HE染色观察病理改变，免疫组织化学法检测STAT3、RORγt蛋白表达，流式细胞术检测肺组织Th17细胞比例。酶联免疫吸附试验法检测血清及BALF中IL-17、IL-6水平。结果:与正常对照组比较，嗜酸粒细胞哮喘组气道炎性细胞浸润显著，BALF细胞总数及中性粒细胞比例增高( P值均<0.01)，血清和BALF中IL-17、IL-6含量增加( P值均<0.05)，肺组织Th17细胞比例增多( P<0.01)；与嗜酸粒细胞哮喘组比较，中性粒细胞哮喘组气道炎性细胞增多，BALF细胞总数及中性粒细胞比例增高，嗜酸粒细胞比例减低( P值均<0.05)，血清和BALF中IL-17、IL-6含量及肺组织Th17细胞比例增多( P值均<0.05)，与正常对照组和嗜酸粒细胞哮喘组比较，中性粒细胞哮喘组肺组织STAT3、RORγt蛋白表达均增强( P值均<0.05)。 结论:STAT3-RORγt-IL-17信号通路参与哮喘不同炎症表型发病机制，但在中性粒细胞型哮喘的气道炎症中发挥更为重要的作用。

目的 基于TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路观察芦荟多糖对小鼠自身免疫性甲状腺炎的保护作用.方法 选用2月龄雌性小鼠30只,随机分为正常组、模型组和芦荟多糖组,每组10只.通过皮下多点注射猪甲状腺球蛋白(PTg)+高碘水法建立小鼠自身免疫性甲状腺炎模型,其中芦荟多糖组灌胃给药300 mg/(kg·d),其余两组灌胃给予等量生理盐水.药物干预4周后分别HE染色观察各组小鼠甲状腺组织病理形态学变化;ELISA法检测各组小鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxine,FT4)、促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素10(interleukin 10,IL-10)、白介素17(interleukin 17,IL-17)和甲状腺信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoic acid-related orphan receptorγt,RORγt)、叉头状转录因子P3(forkhead box P3,FOXP3)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)、IL-10和IL-17水平;免疫荧光法检测FOXP3和IL-17A水平;Western blot法检测TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路关键蛋白表达水平.结果 与模型组比较,芦荟多糖明显改善甲状腺组织病理学变化,降低血清TSH、TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和IL-17的水平(P<0.05),升高血清FT3、FT4和IL-10的水平(P<0.01),下调甲状腺组织STAT3、RORγt和IL-17水平(P<0.01),上调甲状腺FOXP3、TGF-β和IL-10水平(P<0.01).结论 芦荟多糖可能通过TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路对小鼠自身免疫性甲状腺炎具有较好的保护作用.

目的 探讨丙烯酰胺对小鼠卵母细胞成熟及发育潜能的影响. 方法 选择成年雌性小鼠分别给予生理盐水及丙烯酰胺5 mg/kg(低剂量组)、10 mg/kg(中剂量组)、20mg/kg(高剂量组),连续给药7d,统计卵母细胞成熟率、孤雌激活率;观察卵母细胞纺锤体和染色体形态;分析卵母细胞外卵丘颗粒细胞的凋亡. 结果 (1)丙烯酰胺低、中、高剂量组卵母细胞的体外成熟率分别为(88.5士1.5)％、(79.5±1.7)％、(76.5±1.8)％,均低于对照组的(92.5±1.2)％,但只有中、高剂量组与对照组有统计学差异(P＜0.05);(2)低剂量组卵母细胞的孤雌激活率[(78.5±2.6)％]与对照组[(81.5±1.2)％]相仿(P＞0.05),而中、高剂量组卵母细胞的孤雌激活率[分别是(61.6土3.2)％、(40.3±5.6)％]均显著低于对照组(P＜0.01);(3)丙烯酰胺处理组卵母细胞纺锤体形态不正常,呈现筒形和染色体排列不规则,散乱;(4)丙烯酰胺促进了颗粒细胞的凋亡.结论 小鼠卵母细胞在丙烯酰胺处理后细胞成熟延迟,发育潜能降低.

雌激素相关受体α (estrogen-related receptorα,ERRα)属核受体家族成员,是一类非配体依赖性激活的孤儿核受体,ERRα受到转录共活化因子过氧化物酶体增殖物受体γ共活化因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α)的活性调节,参与了细胞增殖、分化发育、癌变、胞内信号传导等过程.近年来多项研究表明ERRα/PGC-1α与肿瘤细胞的能量代谢、血管形成、侵袭转移等过程密切相关,但其在妇科恶性肿瘤中的具体作用机制尚不明确.本文就ERRα/PGC-1α信号参与妇科恶性肿瘤发生机制的研究进展进行综述.旨在为临床后续的抗肿瘤治疗提供理论依据.

卵母细胞的低温保存为辅助生殖技术和胚胎工程技术提供了更大的发展空间,而低温保存需要添加高浓度保护剂,会对细胞造成渗透损伤及毒性损伤.与分步法添加固定浓度的保护剂不同,微流控法能够实现保护剂浓度的连续性变化,关于微流控法连续性添加保护剂时卵母细胞的损伤评估还未见报道.本文首先采用数值模拟的方法,模拟细胞在不同加载时间、不同加载线型(线性、S型、凹型)、不同凹型加载(低凹型、高凹型)中细胞的渗透行为,计算各方案中细胞的传统的损伤评估参数:体积变化极值(△V)、积累性渗透损伤值(AOD)及毒性损伤值(J).在此基础上,藉由信息熵理论首次提出了综合损伤评估参数s,并通过猪卵母细胞微流控加载后孤雌激活实验的结果验证评估效果.结果表明,对于不同的加载方案,传统的损伤评估参数结果之间出现分歧,无法得到统一的结论.通过分析囊胚率同综合损伤评估参数s值的关系,发现二者呈负相关关系,且相关系数很高,说明综合损伤评估参数s能够较好地对细胞损伤进行评估,为细胞损伤评估开辟了新思路.

目的 探讨人参皂甙Rd对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠调节性T细胞(Tregs)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响. 方法 将54只6～8周龄雌性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为人参皂甙Rd组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、空白对照组,每组18只.前2组采用经典的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(Mog35-55)肽段免疫诱导方法制备成EAE模型,并在接种免疫后第13天起将人参皂甙Rd 40 mg/(kg-d)溶解于PBS中腹腔注射人人参皂甙Rd组(1次/d),PBS组和空白对照组予同等剂量PBS腹腔注射.各组小鼠于接种免疫后第1～20天每天进行临床症状评分,并于评分结束当天取小鼠腰髓进行组织病理学评估(炎症评分及脱髓鞘评分).在接种免疫后第20天,取各组小鼠脾脏,行体外脾细胞培养48 h后取上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素-10(IL-10)、白介素-17(IL-17)水平;采用流式细胞仪检测脾组织中Tregs细胞、Th17细胞的比例;取各组小鼠腰髓,采用实时荧光定量PCR检测腰髓中Janus激酶1(JAK1)、Janus激酶2(JAK2)、信号转导与转录激活因子3 (STAT3)、维甲酸相关孤核受体γt (ROR-γt)、叉头型基因p3 (Foxp3)mRNA的表达水平. 结果 (1)人参皂甙Rd组的临床症状评分、炎症评分均明显低于PBS组,差异均有统计学意义(P＜0.05).PBS组腰髓中有大量炎性细胞浸润及大片髓鞘脱失,而人参皂甙Rd组的髓鞘脱失较PBS组明显减少,2组间脱髓鞘评分比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2)与PBS组相比,人参皂甙Rd组脾细胞培养上清液中IL-10水平明显升高,IL-17水平明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)与PBS组相比,人参皂甙Rd组脾组织中CD4+IL-17+细胞比例明显降低,CD4+CD25+Foxp3+细胞比例明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)与PBS组相比,人参皂甙Rd组腰髓中JAK1、JAK2、STA T3、R OR-γt mRNA的表达水平明显降低,Foxp3mRNA的表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 人参皂甙Rd可通过改变与Tregs/Th 17细胞分化相关的Foxp3/RORγt/STAT3信号通路分子的表达,升高IL-10水平和Tregs细胞比例,降低IL-17水平和Th17细胞比例,从而改善EAE模型小鼠的临床症状.

目的 观察输卵管上皮细胞共培养对小鼠孤雌胚体外发育的影响.方法 用胰蛋白酶消化的方法收集兔输卵管上皮细胞(ROEC),置于37℃、5％ CO2培养箱中行常规原代及传代培养.将6～8周龄昆明白雌性小鼠超促排卵后,收集成熟卵母细胞,转移至含有7％乙醇和5 mg/L细胞松弛素B的培养液中激活处理,将孤雌激活的卵随机分组,分别置入对照组(单纯培养液)和实验组(ROEC原代P0及传代P1、P2、P3、P4共培养体系)培养,在培养后的1～5d,分别观察小鼠孤雌激活卵发育至2-细胞、4-细胞、8-细胞及囊胚的情况.结果 与对照组比较,小鼠孤雌激活卵与原代P0及传代P1、P2、P3 ROEC共培养,2-细胞及4-细胞形成率差异无统计学意义(P＞0.05);8-细胞形成率显著升高(57.5％比80.2％、85.0％、81.8％、76.8％,x2=14.389、23.803、17.319、10.078,P＜0.01);囊胚形成率显著升高(34.5％比57.9％、62.9％、58.3％、50.4％,x2=13.126、20.094、13.857、6.116,P＜0.05).结论 输卵管上皮细胞共培养能明显提高小鼠孤雌胚的体外发育潜能.

在马(Equus caballus)的繁殖和非繁殖季节,本研究探讨马扩展型(Ex)和紧凑型(Cp)卵丘-卵母细胞复合体(COCs)卵母细胞的孤雌激活效率.在繁殖季节,探讨马驹和成年马成纤维细胞核移植(SCNT)的成功率.孤雌激活实验结果显示,在繁殖季节,发育到2-细胞、4-细胞和桑椹胚的比例,扩展型(Ex)卵丘-卵母细胞复合体分别是52.8％ (19/36)、38.9％ (14/36)和5.6％ (2/36),紧凑型(Cp)卵丘-卵母细胞复合体分别是47.9％ (23/48)、33.3％ (16/48)和6.2％ (3/48).在非繁殖季节,发育到2-细胞、4-细胞的比例,扩展型(Ex)分别是37.2％ (16/43)和16.3％ (7/43),紧凑型(Cp)的比例分别是35.1％ (27/77)和11.7％ (9/77),都没有获得桑椹胚.同一季节,扩展型(Ex)与紧凑型(Cp)胚胎发育的比率差异不显著(P＞0.05),不同季节,两者差异显著(P＜0.05).体细胞核移植实验结果显示,以马驹成纤维细胞作为核供体细胞,胚胎发育到2-细胞、4～8细胞和桑椹胚的比例分别是41.5％(22/53)、33.9％ (18/53)和15.1％ (8/53),以成年马成纤维细胞作为核供体细胞,比例分别是38.9％(7/18)、22.2％ (4/18),没有获得桑椹胚.综上所述,季节和卵丘巧卵母细胞复合体(COCs)类型影响马卵母细胞孤雌激活的效率,不同核供体细胞影响克隆胚胎构建的成功率.

目的 探讨维生素D对体外成熟小鼠卵母细胞发育潜能的影响.方法 采集小鼠生发泡(GV)期卵母细胞进行体外成熟培养,根据培养液的不同分为对照组(采用IVM培养基,取卵数188个)和实验组(在对照组基础上添加固体维生素D,取卵数123个).所有细胞体外进行培养,记录并分析不同条件下处理下两组卵母细胞成熟率、孤雌激活率、囊胚形成率以及表观遗传相关基因表达水平情况.结果 两组MII卵母细胞率、孤雌激活率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).实验组囊胚形成率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,实验组所选13个基因(Mat2a、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Dn-mt3L、Mbd1、MeCP2、Mbd3、Ezh2、Suz12、Phc2、Rnf2和YY1)表达明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 维生素D可促进卵母细胞在体外成熟,可以提高卵母细胞的发育潜能.