目的 基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘(NA)的分子机制.方法 (1)利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献检索及Swiss ADME、Swiss Target Prediction数据库检索、筛选射麻止喘液的活性成分及其作用靶点.利用OMIM、GeneCards、DisGeNET及DrugBank数据库检索、筛选NA疾病相关靶点.通过微生信平台对射麻止喘液活性成分作用靶点与NA疾病相关靶点取交集,得到射麻止喘液治疗NA的潜在作用靶点(共有靶点).采用Cytoscape 3.8 软件构建"中药-活性成分-潜在作用靶点"网络.通过STRING数据库建立潜在作用靶点蛋白互作(PPI)网络,使用内置Mcode插件分析获得核心靶点.使用Metascape平台对潜在作用靶点进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.(2)将BALB/C小鼠适应性喂养 1 周后,随机分为空白组、NA模型组、射麻止喘液低剂量组(2.5 g·kg-1)、射麻止喘液高剂量组(10 g·kg-1)、地塞米松对照组(1 mg·kg-1);通过腹腔注射致敏剂[鸡卵清白蛋白(OVA)+弗氏完全佐剂(CFA)]并通过雾化吸入激发的方法复制NA小鼠模型,第 0、7、14 天分别腹腔注射OVA+CFA(20 μg OVA+75 μg CFA,0.3 mL)致敏,第 21～30 天采用 5%OVA混悬液雾化激发(每次 8 mL,每次雾化时间40 min,每天 1 次);雾化激发前 1h各组灌胃给药,地塞米松对照组腹腔注射给药,每天 1 次.采用HE染色法观察小鼠肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-8 含量;RT-qPCR法检测肺组织中NLRP3、CXCR2 mRNA表达水平;免疫组化法检测肺组织中p-mTOR蛋白表达水平.结果 (1)共筛选得到射麻止喘液活性成分作用靶点 826 个,NA疾病相关靶点 154 个,取交集后得到射麻止喘液治疗NA的 51 个潜在作用靶点(共有靶点).通过"中药-活性成分-潜在作用靶点"网络分析得到槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、柚皮素等关键活性成分.通过对潜在作用靶点的PPI网络分析得到 29 个核心靶点,包括AKT1、IL6、TNF、EGFR、NLRP3、RELA、MIF、CXCR2、VEGFA等.GO功能富集分析得到 882 个生物学过程条目、33 个细胞组分条目、61 个分子功能条目;KEGG通路富集分析得到 142 条信号通路,主要涉及TNF信号通路、甲型流感信号通路、Toll样受体通路、MAPK信号通路、mTOR信号通路等.(2)动物实验结果:与空白组比较,NA模型组小鼠的气道黏膜损伤明显,结构紊乱,有大量炎性细胞浸润,黏膜充血、水肿,肺泡壁明显增厚,肺泡腔缩小;肺泡灌洗液中的炎症因子IL-8 水平明显升高(P＜0.05);小鼠肺组织NLRP3、CXCR2 mRNA表达显著上调(P＜0.01),p-mTOR蛋白表达水平明显升高.与NA模型组比较,射麻止喘液低、高剂量组小鼠肺组织支气管上皮细胞结构排列可见少许紊乱,气管及血管周围有少量的炎性细胞浸润,支气管黏膜充血水肿明显减轻;小鼠肺组织CXCR2 mRNA表达显著下调(P＜0.01),p-mTOR蛋白表达水平明显降低.射麻止喘液高剂量组小鼠肺泡灌洗液中的 IL-8 水平明显降低(P＜0.05);射麻止喘液低剂量组小鼠肺组织 NLRP3 mRNA表达明显下调(P＜0.05).结论 射麻止喘液对NA的治疗作用可能是通过槲皮素、木犀草素、山柰酚等关键活性成分,作用于NLRP3、CXCR2 等核心靶点,调控TNF信号通路、MAPK信号通路、Toll样信号通路、mTOR等关键信号通路来实现的.

目的:运用网络药理学探讨射麻止喘液治疗哮喘的潜在机制.方法:利用中药分子机制的生物信息学分析工具、中药系统药理数据库和分析平台查找射麻止喘液的成分及其靶点,从比较毒理基因组学数据库(CTD)获取与哮喘相关的基因;将射麻止喘液-基因和哮喘-基因的数据集导入Draw Venn Diagram进行交集分析,得出射麻止喘液-哮喘-基因数据集;使用String 11.0进行射麻止喘液-哮喘-基因数据集的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析,运用Cytoscape 3.6.1进行可视化,用其插件MCODE分析重要模块;采用DAVID 6.8分析射麻止喘液-哮喘-基因的通路富集和生物学过程.结果:获得射麻止喘液399个化合物与2 099个潜在的靶点;同时检索出98个与哮喘相关靶点;应用交集和PPI分析筛选出45个共同基因和关键基因16个,包括转化生长因子-β1,血红素氧合酶-1,白细胞介素-4等;富集分析显示射麻止喘液和哮喘的共同生物学过程与炎症反应、气道的收缩与重塑、细胞增殖与凋亡等相关,共同生物学通路包括肿瘤坏死因子信号通路、免疫球蛋白E(IgE)的高亲和力受体信号通路、核转录因子-κB信号通路、核苷酸结合寡聚化结构域样受体信号通路等.结论:射麻止喘液是通过多靶点、多通路治疗哮喘,可为其深入研究和临床应用提供参考.

目的 建立测定止喘灵注射液中盐酸麻黄碱、丁溴东莨菪碱和苦杏仁苷成分含量的高效液相色谱法.方法 色谱柱为Waters Sunfire C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为28℃,流速为1.0 mL/min,流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B,含0.05％三乙胺和0.02％十二烷基苯磺酸钠,磷酸调节pH至6.0),梯度洗脱,洗脱程序为0～7 min时3％A,7～26 min时3％A～58％A,26～29 min时58％A～3％A,29～34 min时3％A,检测波长为210 nm,进样量为20μL.结果 盐酸麻黄碱、丁溴东莨菪碱和苦杏仁苷质量浓度均在0.3～10.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为100.66％,99.19％,98.71％,RSD分别为2.58％,2.11％,2.25％(n=6).结论 该方法操作简单、准确可靠、重复性好,可用于止喘灵注射液中盐酸麻黄碱、东莨菪碱和苦杏仁苷的含量测定.

[目的]观察射麻止喘液联合常规西医治疗寒饮伏肺型慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者的临床疗效.[方法]将36例寒饮伏肺型AECOPD患者随机分为试验组和对照组,每组各18例.对照组给予常规西医治疗,试验组给予射麻止喘液联合常规西医治疗,疗程均为10 d.观察2组患者治疗前后中医证候积分和6 min步行距离(6MWD)的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和安全性.[结果](1)经治疗10 d后,试验组的总有效率为94.44％(17/18),对照组为83.33％(15/18);组间比较(秩和检验),试验组的疗效明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).(2)治疗后,2组患者的中医证候总积分和各项中医证候积分(包括咳嗽、咯痰、喘息、胸闷、气短、喉中痰鸣和肺部啰音等)均较治疗前明显降低(P<0.05或P<0.01),且试验组对中医证候总积分和咳嗽、咳痰、喉中痰鸣等3项中医证候积分的降低作用均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).(3)治疗后,2组患者的6MWD均较治疗前明显提高(P<0.01),且试验组的提高作用明显优于对照组,组间治疗前后差值比较,差异有统计学意义(P<0.05).(4)治疗期间,2组患者均未发生明显不良反应,且2组患者的血常规及肝肾功能等安全性指标均未见明显异常.[结论]射麻止喘液联合常规西医治疗能更有效地缓解寒饮伏肺型AECOPD患者的临床症状,并提高运动耐力,临床疗效和安全性均较好.