目的:探讨卵巢癌组织和细胞中乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）的表达情况，及其对卵巢癌细胞迁移和脂质合成影响的相关机制。方法:收集2019年1月至2021年12月于临沂市肿瘤医院手术切除并经病理诊断的1例正常卵巢组织、1例卵巢癌原发灶组织及1例卵巢癌网膜转移灶组织，采用免疫组织化学法检测各组织中ACC1和阴阳蛋白1（YY1）的水平。通过PROMO数据库预测YY1可能具有与ACC1启动子区域的结合位点。通过组装的病毒载体，使人卵巢癌HEY细胞过表达ACC1或YY1[阴性对照（NC）为未经处理的细胞]，或者敲低ACC1或YY1（转入目的基因的干扰序列sh1、sh2、sh3，对照为转入干扰序列的阴性对照序列shNC）。采用双荧光素酶报告基因实验验证YY1与ACC1启动子的结合位点及转录调控活性。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法分别检测经相应处理的HEY细胞ACC1、YY1 mRNA和蛋白表达水平；采用Transwell实验检测HEY细胞迁移能力；采用油红O染色和尼罗红染色检测HEY细胞中脂滴形成情况。结果:正常卵巢组织、卵巢癌原发灶和网膜转移灶中ACC1的免疫组织化学评分分别为0、2、8分，YY1评分分别为0、4、6分。Transwell实验显示，ACC1过表达组侵袭的HEY细胞数较NC组多[（87.7±7.4）个比（52.2±4.2）个， t＝5.19， P＝0.003]；ACC1敲低的ACC1-sh1组和ACC1-sh2组侵袭的HEY细胞数均少于shNC组[（21.2±1.5）个、（29.7±2.3）个比（56.2±5.3）个， t值分别为6.41、3.77， P值分别为<0.001、0.005]。ACC1过表达组HEY细胞中脂滴数较NC组多[油红O染色：（301±25）个比（215±21）个，尼罗红染色：（287±15）个比（207±10）个；均 P<0.05]，ACC1敲低的ACC1-sh1、ACC1-sh2组HEY细胞脂滴数均较ACC1-shNC组少[油红O染色：（113±8）个、（119±12）个比（195±18）个，尼罗红染色：（82±8）个、（117±11）个比（165±17）个；均 P<0.05]。双荧光素酶报告基因实验显示，YY1过表达促进野生型ACC1启动子区域报告基因的荧光素酶活性（ P＝0.003），而ACC1启动子区域YY1结合位点突变后，报告基因的荧光素酶活性较野生型低（ P＝0.008）。蛋白质印迹法检测显示，YY1过表达HEY细胞YY1、ACC1蛋白表达水平均高于NC组，二者有协同增高趋势；YY1敲低的YY1-sh1组、YY1-sh2组、YY1-sh3组细胞YY1、ACC1蛋白表达水平均低于对照YY1-shNC组，二者亦有协同降低趋势。 结论:ACC1和YY1在卵巢癌转移灶中高表达且呈现正相关趋势。体外ACC1表达水平对卵巢癌细胞迁移和脂质合成有影响，其可能是通过YY1对ACC1转录调控而实现的。

目的:探究长链非编码RNA-重编程调控因子(Linc-ROR)对胰腺癌细胞侵袭、迁移及脂肪酸合成的调节及其机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Linc-ROR在4种细胞中的表达水平。在PANC-1细胞系中单独转染pCDH-Linc-ROR过表达质粒或联合转染该质粒和脂肪酸合酶(FASN)的小干扰RNA(siRNA)后，尼罗红染色法观察脂肪酸合成；划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移、侵袭；蛋白免疫印迹法检测脂肪酸合成相关蛋白的变化。结果:Linc-ROR表达水平在3种胰腺癌细胞系中明显高于正常胰腺导管上皮细胞(1.56±0.10、45.53±3.74、147.80±7.21比1.00， F＝869.1， P<0.01)。与对照组比较，转染pCDH-Linc-ROR质粒后侵袭能力增强(272.70±25.70比101.00±16.52， P<0.01)，Transwell迁移实验显示该组迁移能力增强(691.30±34.67比274.70±12.06， P<0.01)，划痕实验同样证明该结果(35.01±2.22比22.47±2.09， P<0.01)，染色后荧光显示脂肪酸合成增强，脂肪酸合成相关蛋白增加(3.11±0.17、1.77±0.08、1.22±0.08、1.15±0.06、1.2±0.09、1.88±0.10、1.13±0.08比1.00， P<0.05)。进行联合转染Linc-ROR过表达质粒及siRNA后，pCDH-Linc-ROR+si-FASN相较于pCDH-Linc-ROR+si-NC组划痕实验证明显示迁移能力下降(34.38±1.12比52.88±2.19， P<0.01)，Transwell迁移实验提示相同的结果(382.00±19.08比771.70±13.58， P<0.01)，并且该组侵袭能力减弱(309.00±22.34比601.70±20.03， P<0.01)，FASN蛋白水平明显下降(1.004±0.05比3.122±0.17， P<0.01)，且染色后荧光示细胞脂肪酸的合成降低。 结论:Linc-ROR可能通过影响FASN来蛋白的调控脂肪酸合成进而促进PANC-1细胞的侵袭和迁移。

目的 建立棕榈酸诱导的斑马鱼脂毒性损伤骨形成抑制模型.方法 将AB品系斑马鱼胚胎分为对照组、棕榈酸组(PA组)和辛伐他汀组(SIM组).从 3 dpf(days post fertilization,dpf)开始,PA组、SIM组给予PA造模.从 5 dpf开始,SIM组给予SIM连续给药4 d.9 dpf通过钙黄绿素染色法、尼罗红染色法、甘油三酯及总胆固醇含量测定、q-PCR判断模型是否成功建立.结果 PA显著减少斑马鱼椎骨骨节数目、促进脂质堆积、增加甘油三酯及总胆固醇含量、促进成脂相关基因PPARγ、c/EBPα的表达并抑制成骨相关基因ALP、RUNX2 的表达.SIM可以改善PA对斑马鱼的骨形成抑制效应.结论 采用PA给药的方法可成功造成与骨质疏松症(osteoporosis,OP)病理过程相似的脂毒性损伤骨形成抑制模型,该方法简便、灵敏、可控,可用于OP及相关疾病的药物筛选.

目的:利用血清药理学,探究用于肝细胞脂肪变性药效观察的肝龙胶囊(GLC)含药血清的最佳取血时间和含药血清体积分数.方法:C57BL/6J小鼠60只,灌胃GLC(90 mg/kg),每日两次,连续7 d,分别在末次给药0.5、1、2和4 h心脏采血,收集血清.对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水.LC-MS/MS技术检测空白血清及不同采血时间含药血清肌苷含量,确定最佳采血时间.应用0%、1%、3%和10%GLC血清处理棕榈酸(PA)刺激的小鼠肝细胞NCTC1469,尼罗红染色检测细胞脂滴生成,RT-qPCR检测细胞内脂肪酸生成基因Fabp1和Scd1,及脂肪酸β-氧化基因Pparα的表达.结果:(1)LC-MS/MS检测发现在末次给药2 h后血清中肌苷浓度最高.(2)尼罗红染色显示GLC血清对PA诱导的肝细胞脂质积累具有剂量依赖性的减少趋势.(3)1%和3%和10%GLC血清处理均能显著下调PA刺激的肝细胞内Fabp1和Scd1的表达,且具有剂量依赖性的减少趋势;1%、3%和10%GLC血清处理均能显著上调PA刺激的肝细胞内Pparα的表达,且具有剂量依赖性的增加趋势.结论:小鼠给药后2 h的10%GLC血清是用于肝细胞脂肪变性药效观察的最佳血清干预浓度.

目的 探讨Notch抑制剂(DAPT)体外对脂肪变肝细胞细胞炎症因子及脂质相关基因水平的影响.方法 采用棕榈酸(PA)干预体外构建肝细胞脂肪变模型,采用不同浓度的DAPT干预.采用CCK-8 检测细胞存活率,采用尼罗红染色了解细胞脂滴量,采用RT-qPCR法检测TNF-α、IL-1β和IL-6 和脂肪相关因子[固醇调节元件结合蛋白 1c(SREBP1c)、FASN和ACACA]mRNA水平,采用Western blot法检测细胞p65 和SREBP1c蛋白表达.结果 在无PA干预的L02 细胞,经1μM、2μM、5μM和10 μM DAPT处理细胞 24 h,细胞存活率均较对照组显著下降(分别为 85.2±5.3%、84.6±2.9%、84.4±6.0%和84.5±3.2%对100.0%,P均<0.05);经2μM和5μM浓度的DAPT干预,细胞TNF-α mRNA水平分别为(0.6±0.01)和(0.5±0.1),显著低于对照组[(1.0±0.0),P<0.01],IL-1β水平分别为(0.7±0.2)和(0.4±0.0),显著低于对照组[(1.1±0.1),P<0.01],IL-6 水平分别为(0.8±0.1)和(0.6±0.1),显著低于对照组[(1.0±0.0),P<0.05],细胞p65 蛋白表达量也显著降低(P<0.05);2 μM、5 μM和10 μM DAPT处理细胞脂滴荧光强度较对照组显著减弱[分别为(0.2±0.1)、(0.3±0.0)和(0.1±0.0)对(0.7±0.0),P均<0.001],2 μM 和 5 μM DAPT处理细胞 FASN mRNA水平分别为(0.7±0.0)和(0.4±0.1),显著低于对照组[(1.0±0.0),P<0.001]、ACACA mRNA水平分别为(0.6±0.1)和(0.3±0.0),显著低于对照组[(1.0±0.0),P<0.001];5 μM DAPT处理细胞SREBP1c蛋白表达量显著低于对照组(P<0.01).结论 DAPT能有效降低体外脂肪变细胞炎症因子表达量,缓解细胞内脂滴形成,其机制可能与调控脂肪相关因子的表达有关,提示抑制Notch信号通路有改善细胞脂肪变发生和进展的潜力.

目的:初步建立并评价肝郁气滞、肝胆湿热证型的胆囊胆固醇沉着症小鼠模型,为深入研究该病的发病机制、病理变化,探索临床治疗方案提供模型支持.方法:48 只 C57 BL/6J 雄性小鼠,随机分为空白对照组(WT)、造模 3 周组(LD-3)、造模 6 周组(LD-6)、造模 9 周组(LD-9),每组 12 只.WT组给予普通饲料+正常饮用水喂养,造模组分别给予 3、6、9 周高脂高胆固醇饲料+正常饮用水喂养.在造模期间,每日观察小鼠一般情况,分别在 3、6、9 周麻醉后处死动物,眼眶取血,检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量,取组织标本,采用尼罗红染色观察胆囊脂质沉积情况,红外光谱分析胆汁成分;胆固醇代谢指标:免疫组化法检测肝脏三磷酸腺苷结合盒转运体 A组 1(ABCA1)蛋白表达,进行模型评价.结果:与 WT组相比,各组造模小鼠体重显著增加(P<0.05);血清 TC水平显著升高(P<0.05),血清TG水平明显降低(P<0.05);胆囊脂质沉积显著,胆汁混浊度增加;肝脏 ABCA1 蛋白表达明显增加.结论:本研究成功建立小鼠胆囊胆固醇沉着症模型构建方法,符合临床特征.并成功建立肝郁气滞、肝胆湿热证型的疾病证候类型,可为后续针对胆囊胆固醇沉着症发病机制及治疗方法研究提供稳定的动物模型.

目的 观察雌马酚(Eq)对高脂诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型中氧化应激的保护效应,并探讨其作用机制.方法 采用CCK-8法探索合适的油酸钠(NaOL)和Eq的干预浓度.通过NaOL作用于BRL3A细胞,建立NAFLD体外细胞模型,设立对照组(Con组)、模型组(Mod组)、低剂量组(Eq-L组)、中剂量组(Eq-M组)和高剂量组(Eq-H组).干预24 h后,采用尼罗红荧光染色观察细胞内脂滴累积情况,检测细胞内甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)的水平,采用蛋白免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞内Nrf2、HO-1、NQO1蛋白和mRNA的表达水平.结果 与Con组比较,Mod组细胞内脂质累积增多,TG、TC、ROS、MDA水平升高,SOD、CAT水平降低,Nrf2、HO-1、NQO1蛋白和mRNA表达下调,差异均有统计学意义(P＜0.05).与Mod组比较,Eq-L组、Eq-M组和Eq-H组细胞内脂质累积逐渐减少,TG、TC、ROS、MDA水平降低,SOD、CAT水平增多,Nrf2、HO-1、NQO1蛋白和mRNA表达上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Eq通过抑制氧化应激反应改善NAFLD病情,其部分机制可能与Eq调控Nrf2信号通路相关.

目的 探讨石榴皮总多酚(pomegranate peel polyphenols,PPPs)对亚油酸(linoleic acid,LA)诱导的永生化人皮脂腺SZ95细胞脂质合成的影响及其作用机制.方法 体外培养SZ95细胞,运用LA诱导构建脂质过度合成模型,采用CCK-8法检测不同质量浓度PPPs对SZ95细胞活力的影响;尼罗红染色检测细胞脂质合成情况;qRT-PCR检测瞬时受体电位香草酸亚型 1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)mRNA 表达;Western blotting 检测 TRPV1、AMPK、磷酸化 AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)蛋白表达.采用siRNA进行细胞转染,观察沉默TRPV1后PPPs对LA诱导的SZ95细胞脂质合成及TRPV1/AMPK通路的影响.结果 1.25、2.5、5μg/mL的PPPs对SZ95细胞活性无明显影响,且均可显著抑制LA诱导的脂质过度合成(P＜0.01),其中5μg/mLPPPs的抑制效应最为明显.与对照组比较,模型组细胞脂质合成明显增加(P＜0.01),TRPV1、AMPKmRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平均明显降低(P＜0.01);PPPs对无LA诱导的SZ95细胞基础脂质合成无明显影响,TRPV1、AMPK mRNA表达水平升高(P＜0.01),但TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平差异无统计学意义.与模型组比较,PPPs明显减少LA诱导下的SZ95细胞脂质合成(P＜0.01),明显提高TRPV1、AMPKmRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).沉默TRPV1显著增加了 LA诱导下的SZ95细胞脂质合成(P＜0.01),并显著减弱了 PPPs对SZ95细胞脂质过度合成的抑制(P＜0.01),显著降低其TRPV1、AMPK的mRNA及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).结论 PPPs可有效抑制LA诱导的SZ95细胞脂质合成,其作用机制可能与TRPV1/AMPK通路有关.

以生长快、可除污的埃氏小球藻株系SXND-25为试材,研究不同氮浓度培养条件对其生物量和油脂产量的影响,以期建立优化培养体系利用该株小球藻生产优质生物燃油.以硝酸钠为氮源、BG11培养基中的氮浓度为基准(1.5 g/L),设置氮浓度梯度对小球藻进行培养.通过光密度测定、尼罗红染色、转酯化法抽提油脂和GC分析,对小球藻生物量、油脂含量及脂肪酸组分进行分析.结果显示,培养8d时,在氮浓度为1.5 g/L时,生物量达到最大,干重为3.4 g/L,而油脂含量仅为28.24％,油脂产量为0.96 g/L;在氮浓度为0g/L时生物量最小,干重为0.49 g/L,而油脂含量最高,为44.57％,油脂产量为0.22 g/L;在氮浓度为0.75 g/L时,干重为3.2 g/L,油脂含量为40.36％,油脂产量最高为1.3 g/L,是标准氮浓度下油脂产量的1.4倍.0.75 g/L氮浓度下连续培养8d,藻油脂肪酸组成更适于制取优质生物柴油.综合生物量、油脂含量及脂肪酸组成等指标,确定0.75 g/L氮浓度为该埃氏小球藻株系规模化培养以生产优质生物燃油的优化参数.

目的:研究非致死剂量醋甘遂对斑马鱼幼鱼的毒性及毒性可逆性,并验证斑马鱼模型用于中药毒性快速评价的可行性.方法:用索氏提取器以不同极性溶剂依次提取样品,制备不同提取物.将健康斑马鱼成鱼配对产卵,以正常发育受精后3d的斑马鱼幼鱼为模型,用醋甘遂不同极性提取物处理斑马鱼幼鱼,统计给药72 h死亡率,对毒性最强的提取部位观察评价其对斑马鱼心血管系统、肝脏、神经系统、胃肠道系统、肾脏及其他脏器系统的毒性特征及可逆性.结果:醋甘遂不同溶剂提取物毒性顺序依次为石油醚提取物＞二氯甲烷提取物＞乙酸乙酯提取物＞乙醇提取物,与空白组比较,石油醚提取部位处理后的幼鱼给药组肝区相对光强度随给药浓度的升高而降低,肝脏颜色变暗(P＜0.01);肝脏经苏木精-伊红染色后,在石油醚提取部位0.054 mg·L-1给药组中有轻微的肝损伤,在恢复组中肝损伤明显好转.与空白组和石油醚提取部位0.004 mg·L-1组比较,肠道尼罗红排泄实验显示残留率在石油醚提取部位0.012,0.036,0.054 mg·L-组中显著下降(P＜0.01),胃肠道被促进排空.其他系统毒性特征不明显,差异均无统计学意义.结论:醋甘遂的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和乙醇提取物中,石油醚提取物毒性最大,且主要毒性为肝毒性和胃肠道刺激性,肝毒性造成肝变性,具有可逆性.斑马鱼模型快速评价中药毒性具有较好的应用前景.