目的 建立甘遂炮制前后(生甘遂、醋甘遂)的HPLC指纹图谱,并对大戟二烯醇进行定量分析,为甘遂质量控制及炮制提供参考.方法 采用HPLC法建立生甘遂和醋甘遂的HPLC指纹图谱.通过相似度评价对甘遂炮制前后指纹图谱进行分析,并对大戟二烯醇进行含量测定.结果 建立了甘遂炮制前后的HPLC指纹图谱,生甘遂和醋甘遂分别确定了 14个和12个共有峰,与各自对照指纹图谱的相似度均大于0.950.大戟二烯醇在生甘遂和醋甘遂中的质量分数分别为0.249％和0.222％.甘遂HPLC指纹图谱在炮制前后发生了显著变化,共有峰减少3个,新增加1个,大戟二烯醇的含量显著降低.结论 建立的HPLC指纹图谱对甘遂及其炮制品的质量控制及整体性评价具有重要意义,能够为甘遂的炮制及药理研究提供参考.

目的:研究甘遂炮制前后对生理状态大鼠肝脏代谢组学的影响,探究醋制减毒机制.方法:取24只SPF级SD大鼠,随机分为空白组、生甘遂组、醋甘遂组,每组8只.空白组灌胃0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na),生甘遂组、醋甘遂组给予相应的供试液,连续给药20 d,第20天收集肝脏.运用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)技术分析大鼠肝脏样本,通过Compound Discoverer 3.0软件进行数据前处理,检索HMDB等数据库.并对差异代谢物进行主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)、MetaboAnalyst对所得差异代谢物进行显著富集通路分析.结果:实验最终发现生甘遂组与空白组比对出具有生物学意义的28个差异代谢物,醋甘遂组与空白组比对出具有显著性差异的18个代谢物,其交集有13个代谢物.结论:通过生物学意义分析得到醋炙甘遂能够通过升高肝脏中牛磺脱氧胆酸和硬脂酰肉碱水平,降低早期脑损伤和2型糖尿病诱发的潜在风险;通过升高肝脏甘氨胆酸水平,促进调节机体免疫功能;通过升高肝脏20-羟基二十碳四烯酸水平,促进缺血性卒中后的神经血管重塑和功能恢复;通过升高肝脏3-羟基丁酸、油酰乙醇胺水平,发挥抗肿瘤、抗氧化和神经保护作用.其发挥减毒机制的相关代谢通路为花生四烯酸代谢、初级胆汁酸生物合成、酮体的合成与降解、牛磺酸和次牛磺酸代谢.

目的:研究非致死剂量醋甘遂对斑马鱼幼鱼的毒性及毒性可逆性,并验证斑马鱼模型用于中药毒性快速评价的可行性.方法:用索氏提取器以不同极性溶剂依次提取样品,制备不同提取物.将健康斑马鱼成鱼配对产卵,以正常发育受精后3d的斑马鱼幼鱼为模型,用醋甘遂不同极性提取物处理斑马鱼幼鱼,统计给药72 h死亡率,对毒性最强的提取部位观察评价其对斑马鱼心血管系统、肝脏、神经系统、胃肠道系统、肾脏及其他脏器系统的毒性特征及可逆性.结果:醋甘遂不同溶剂提取物毒性顺序依次为石油醚提取物＞二氯甲烷提取物＞乙酸乙酯提取物＞乙醇提取物,与空白组比较,石油醚提取部位处理后的幼鱼给药组肝区相对光强度随给药浓度的升高而降低,肝脏颜色变暗(P＜0.01);肝脏经苏木精-伊红染色后,在石油醚提取部位0.054 mg·L-1给药组中有轻微的肝损伤,在恢复组中肝损伤明显好转.与空白组和石油醚提取部位0.004 mg·L-1组比较,肠道尼罗红排泄实验显示残留率在石油醚提取部位0.012,0.036,0.054 mg·L-组中显著下降(P＜0.01),胃肠道被促进排空.其他系统毒性特征不明显,差异均无统计学意义.结论:醋甘遂的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和乙醇提取物中,石油醚提取物毒性最大,且主要毒性为肝毒性和胃肠道刺激性,肝毒性造成肝变性,具有可逆性.斑马鱼模型快速评价中药毒性具有较好的应用前景.

目的 建立醋制甘遂质量评价标准并进行验证.方法 采用质量评价指标(含水量、浸出物含量、总灰分以及大戟二烯醇含量、总萜含量)评价醋制甘遂质量;采用化学计量学方法:主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)对建立的醋制甘遂质量标准进行验证.结果 10批醋制甘遂药材含水量(≤12％);醇溶性浸出物(≥15％)、总灰分(≤3.0％)、大戟二烯醇含量(≥0.12％)均符合药典要求,且炮制品总萜含量均大于生品;PCA分析结果表明:生甘遂与醋甘遂样本可各自归为一类;PLS-DA模型能将待测的生品与炮制品准确预测.结论 该实验建立了一种较全面的甘遂炮制品质量评价方法;统计学模型对生甘遂与醋甘遂具有良好的分析和预测性,所建立的质量评价方法稳定、可靠.

目的 应用UHPLC-Q-TOF-MS对醋甘遂的萜类化学成分进行定性分析.方法 采用ACQUITY UPLC C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),以0.1％甲酸(A)-乙腈(B)溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温40℃,进样量4μL.质谱为ESI离子源,正、负离子模式下进行检测.结果 通过Peak View SoftwareTM质谱分析软件,结合保留时间、质谱特征碎片和裂解途径等信息,并通过对照品及文献比对,从醋甘遂中推测鉴定出32个萜类化合物,包含15个巨大戟烷型二萜、12个假白榄烷型二萜以及5个三萜,并对其所含主要萜类化合物巨大戟烷型和假白榄烷型的裂解规律进行了归纳分析.结论 该方法可快速鉴别醋甘遂中的萜类化学成分,并根据质谱信息将其所含主要萜类化合物进行归类,从而为醋甘遂的毒-效物质基础和质量控制提供一定的参考.

目的:基于古今医案云平台(V1.4)挖掘穴位贴敷治疗过敏性鼻炎的的取穴用药规律,为临床提供参考.方法:计算机检索中国知网(CNKI)、维普网、万方数据收录的1987年1月-2018年1月穴位贴敷治疗过敏性鼻炎临床研究文献.采用Excel表格建立数据库并录入古今医案云平台(V1.4),采用系统的频次分析、核心处方等数据挖掘方法对纳入数据进行分析.结果:经筛选,共纳入穴位贴敷取穴处方171首,涉及腧穴60个,频次最高的腧穴为肺俞,为159次.穴对排名前5位的依次是大椎-肺俞、肾俞-肺俞、脾俞-肺俞、脾俞-肾俞、肾俞-大椎.主要核心处方为肺俞、大椎、肾俞、脾俞、风门、膏肓.涉及贴敷药物处方167首、中药64味,频次>100的中药依次为芥子、细辛、醋甘遂、延胡索,药对排名前五位的为细辛-芥子,醋甘遂-芥子,细辛-醋甘遂,延胡索-芥子,细辛-延胡索.核心处方为芥子、醋甘遂、延胡索、细辛、麻黄.结论:古今医案云平台(V1.4)分析得出的穴位贴敷治疗过敏性鼻炎的取穴、用药规律可指导临床应用.选用最精简、最核心的药物可节约用药,减轻患者的经济负担;精简腧穴又能减少患者治疗过程中的痛苦;且对以后临床研究穴位贴敷对AR起作用的免疫学、病理学基础及临床应用等实验研究提供统一规范的选穴、用药依据.

基于代谢组学方法,对给予醋甘遂不同成分群(B,C)前后大鼠的粪便代谢物进行比较研究,探求与醋甘遂毒性相关的差异性代谢物和代谢通路,揭示醋甘遂的毒性作用机制.采用快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UFLC-Q-TOF-MS)技术,对大鼠粪便样本进行测定,结合主成分分析(PCA)和偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)等多种方法筛选并鉴定与醋甘遂毒性相关的生物标志物,并采用￡检验进行单变量统计分析,考察给予醋甘遂成分群B,C后正常大鼠粪便这些生物标志物的含量变化,揭示醋甘遂成分群B,C对大鼠粪便代谢组的影响程度,并结合基于MetaboAnalyst数据库的代谢通路分析探求醋甘遂成分群B,C的毒性作用机制.结果 显示,与空白组相比,醋甘遂成分群B和C组大鼠粪便样本代谢组发生了明显改变,且醋B组改变程度更大,发现并鉴定了16种醋甘遂毒性潜在生物标志物及5条相关代谢通路.醋甘遂的毒性作用可能与色氨酸代谢、初级胆汁酸生物合成、氨基糖和核苷酸糖代谢、嘌呤代谢和缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸降解等代谢通路的紊乱有关.该研究为醋甘遂的临床安全应用提供了科学依据.

目的 探究甘遂醋制前后抗腹水、泻下作用及组成变化.方法 将甘遂用二氯甲烷和95％乙醇依次提取,获得二氯甲烷部位及非二氯甲烷部位.采用癌性腹水小鼠模型,以腹水量、粪便含水量、尿量及肠道水通道蛋白(AQP)1、AQP3的蛋白表达水平为指标,筛选甘遂效应部位,考察甘遂醋制前后效应部位二氯甲烷提取部位的抗腹水及泻下作用变化.同时对二氯甲烷部位及非二氯甲烷部位,以及醋制前后二氯甲烷部位各成分的相对含量变化进行质谱分析.结果 与模型组相比,生甘遂总提物组、二氯甲烷提取部位高剂量组小鼠腹水量和十二指肠、空肠、回肠及结肠AQP1、AQP3蛋白的表达量均显著降低,粪便含水量显著增加,对尿量无影响;非二氯甲烷部位组无明显降低腹水及增加粪便含水量的作用,表明甘遂二氯甲烷部位是其主要效应部位;与模型组相比,醋品二氯甲烷部位高剂量组仍可显著降低癌性腹水小鼠的腹水量,增加粪便含水量,显著降低十二指肠、空肠、回肠中AQP1、AQP3蛋白表达,但对结肠AQP1和AQP3蛋白表达量无显著影响.与生品二氯甲烷部位组相比,醋制后甘遂二氯甲烷部位组小鼠腹水量显著升高,粪便含水量显著降低.此外,甘遂对腹水中癌细胞存活率没有影响,不能促使其凋亡.质谱分析发现,甘遂中萜类成分主要富集于二氯甲烷部位中,且醋制后二氯甲烷部位16个萜类成分中12个成分相对含量减少,4个成分含量增加.结论 甘遂醋制后仍保留"泻水逐饮"功效,但泻下作用缓和,效应的变化可能与所含萜类成分的组成变化有关.

目的:通过分析穴位贴敷疗法防治小儿支气管哮喘的文献,探讨其用药规律及影响临床疗效的相关因素.方法:使用中国生物医学服务系统检索中国期刊全文数据库、中国生物医学数据库、万方期刊数据库、维普数据库、中国医学科普文献数据库.使用Excel表对频数、穴位选取、组方、调和物质及时节选择等数据进行统计分析,采用中国中医科学院中医传承辅助系统软件进行处方用药模式分析.结果:检索到文献164篇,纳入103篇.药物频数排名前5的依次是:芥子(102)、细辛(93)、甘遂(78)、延胡索(77)、麝香(23).对芥子、细辛、甘遂、延胡索的比例分析,2∶1∶1∶2的药物配比频率最高.调和药物的物质使用前3位分别是姜汁(61)、醋(12)、麻油(10).选用频数前10的腧穴分别为肺俞、膏肓、定喘、膈俞、心俞、膻中、肾俞、脾俞、大椎、百劳.时节的选择频数最高的是三伏,为89篇.基于Apriori算法进行关联分析,处方中出现频率及支持度较高的药物配伍模式为"芥子、延胡索、细辛、甘遂"配伍模式.当支持度为30％时,形成以"芥子-延胡索-细辛-甘遂"的最核心的本质药物组方模式.结论:从多个角度分析了可能影响穴位贴敷防治小儿支气管哮喘疗效的因素,为穴位贴敷防治小儿支气管哮喘规范化研究提供了部分参考依据.

目的 通过检测癌性腹水模型大鼠肝功能指标、血清生物标志物含量及肝细胞色素P450酶(cytochrome P450) CYP2D6-1、CYP3A1、CYP2E1的基因、蛋白表达,探讨醋甘遂与炙甘草配伍对癌性腹水大鼠CYP450酶的调节作用,从而揭示二者配伍的作用实质.方法 将雄性Wistar大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、炙甘草组(免煎颗粒剂)、醋甘遂组(研末)、炙甘草-醋甘遂组(草遂组)、甘遂半夏汤组.除正常组外,其余各组腹腔注射Walker-256肿瘤细胞株复制癌性腹水模型,连续给药14 d.实验结束后取材,用生化法检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)活性以及总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)含量,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测谷氨酸脱氢酶(GLDH)、苹果酸脱氢酶(MDH1)、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、对氧磷酶(PON1)含量,HE染色观察肝组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测细胞色素氧化酶CYP3A1、CYP2E1蛋白表达,采用RT-qPCR技术检测CYP2D6-1、CYP3A1、CYP2E1的基因表达.结果 与正常组比较,模型组AST、ALT、TBIL、DBIL、AKP、GLDH、MDH1、PNP水平明显升高(P＜0.05),PON1水平明显下降(P＜0.05);与模型组比较,炙甘草组、草遂组、甘遂半夏汤组PON1含量明显升高(P＜0.05).RT-qPCR及免疫组织化学结果显示CYP2D6-1、CYP3A1、CYP2E1基因及蛋白表达与正常组比较明显升高(P＜0.05);与模型组比较,各给药组均能下调CYP2D6-1、CYP3A1、CYP2E1的基因或蛋白表达(P＜0.05).HE染色结果显示,与模型组比较,炙甘草组、草遂组及甘遂半夏汤组肝索紊乱减少,肝血窦扩张减少.结论 本实验提示醋甘遂与炙甘草只有在特定条件下,运用中医的辨证论治思维配伍应用才能起到减毒的作用.醋甘遂与炙甘草配伍可能通过抑制细胞色素氧化酶的基因、蛋白表达,提高PON1含量,降低氧化应激,起到对肝脏的保护作用.