目的:制备鞣花酸纳米微囊并观察其对乳腺癌MCF-7细胞株行为学特征的影响，以分析其抗肿瘤效果有无改进。方法:采用层层自组装法制备鞣花酸壳聚糖纳米微囊，观察其体外抗氧化活性与游离鞣花酸的差异性。同时体外培养MCF-7细胞，设立MCF-7组、游离鞣花酸组和纳米微囊组(均 n＝3)，MCF-7组正常培养，游离鞣花酸组和纳米微囊组分别加入游离鞣花酸和鞣花酸纳米微囊共培养48 h，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验与流式细胞实验检测细胞增殖与凋亡活力。计量资料先行正态分布和方差齐性检验，计数资料以率和构成比表示，两组间比较采用卡方检验。 结果:抗氧化测试结果显示，鞣花酸纳米微囊的吸光度( A734)值为0.652±0.134，明显低于游离鞣花酸的0.855±0.121( P<0.05)。体外细胞学实验结果显示，MCF-7组、游离鞣花酸组、纳米微囊组的 A450值依次为0.854±0.102、0.595±0.077、0.452±0.046，组间差异有统计学意义( F＝20.265， P<0.01)，且纳米微囊组高于游离鞣花酸组( F＝12.258， P<0.05)，游离鞣花酸组高于MCF-7组( F＝31.024， P<0.05)；MCF-7组、游离鞣花酸组、纳米微囊组的细胞凋亡率依次为(6.25±0.87)%、(15.63±2.22)%、(21.52±2.54)%，组间差异有统计学意义( F＝43.985， P<0.01)，纳米微囊组低于游离鞣花酸组( F＝26.071， P<0.05)，且游离鞣花酸组低于MCF-7组( F＝14.356， P<0.01)。 结论:成功制备了鞣花酸纳米微囊，并证实其体外抗氧化活性和抗乳腺癌活性优于游离的鞣花酸。

目的:观察羟基磷灰石(HA)修饰的3D打印左旋聚乳酸(PLLA)多孔螺钉用于兔前交叉韧带(ACL)重建术后肌腱-骨愈合情况。方法:通过3D打印机制备具有良好正交孔隙结构的PLLA多孔螺钉。通过静电层层自组装技术将HA附着在多孔螺钉上。将30只12周龄新西兰雄性大白兔(由郑州大学动物实验中心提供)，根据简单随机分组法分为PLLA组和PLLA-HA组，PLLA组仅使用多孔螺钉固定移植肌腱，PLLA-HA组使用HA修饰的多孔螺钉固定移植肌腱。分别于术后6周和12周将每组动物随机各处死5只，进行组织学检测。每组中余下5只进行Micro-CT和生物力学检测。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:组织学显示，术后6周肌腱-骨界面处有胶原蛋白及网状纤维生成，两组间无明显骨整合，但PLLA-HA组有软骨细胞形成。术后12周，两组肌腱-骨界面胶原纤维增多。PLLA组在肌腱-骨界面处可见骨小梁生成，PLLA-HA组可见较成熟的骨小梁，且与移植肌腱出现骨整合。术后12周Micro-CT示，在PLLA-HA组中，反映骨性结构的骨体积分数[BV/TV＝(36.46±3.45)%]，骨小梁分离率[Tb.Sp＝(0.35±0.04) mm]等指标均优于PLLA组[BV/TV＝(25.59±3.22)%， t＝－5.147， P<0.05)；Tb.Sp＝(0.64±0.19) mm， t＝3.304， P<0.05]，组间比较差异均有统计学意义( P<0.05)。术后12周测得PLLA-HA组极限抗拉负荷[(83.74±12.43) N]，刚度[(14.16±3.53) N/mm]，较PLLA组差异有统计学意义[极限抗拉负荷为(54.70±12.58) N， t＝－3.671， P<0.05；刚度为(10.42±0.71) N/mm， t＝－2.230， P<0.05]。 结论:HA修饰的3D打印PLLA多孔螺钉可以通过增加骨的诱导性促进骨的生长，加快肌腱在骨隧道内的骨整合。

目的 利用聚鸟氨酸和岩藻聚糖通过层层自组装技术对PLGA纳米粒进行表面修饰.方法 首先采用超声乳化溶剂挥发法制备负载阿霉素的PLGA纳米粒,其中PLGA的二氯甲烷溶液为油相,阿霉素和牛血清白蛋白的水溶液为水相.其次利用静电作用在纳米粒表面层层自组装聚鸟氨酸和岩藻聚糖.最后通过共价键连接核酸适配体AS1411,赋予其靶向功能.结果 石英微晶天平电压信号的降低以及Zeta电位正负的翻转均证实聚电解质被成功组装.经透射电子显微镜、核磁共振氢谱、红外光谱、琼脂糖凝胶电泳等检测手段证实AS1411被成功修饰.修饰后的PLGA纳米粒的表面,其载药量为(2.32±0.04)％,包封率为(15.89±0.31)％,28 d的累积释放率约为55％.结论 聚鸟氨酸和岩藻聚糖通过层层自组装技术实现了对PLGA纳米粒的表面修饰,改变了其理化性质,且可有效地缓释药物释放.

为提高生物医学设备表面涂层的抑菌稳定性,本研究使用层层自组装技术将呋喃结构的咪唑盐聚离子液体作为聚阳离子电解质层和抗菌剂,与作为聚阴离子电解质层的聚丙烯酸接枝糠胺沉积在不锈钢表面,并通过Diels-Alder环化反应,使用双马来酰亚胺聚乙二醇交联剂将聚合物层交联起来,以提高涂层的稳定性.该多层涂层性能稳定、具有自愈性,还对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有持久的抗菌活性.此外,涂层成骨细胞(MC3T3-E1)具有较低的细胞毒性.该方法可对生物医疗器械表面抗感染防护提供有效策略.

目的 利用LBL技术在碱热处理后的钛种植体表面构建海藻酸钠-壳聚糖聚电解质多层膜结构,并以此结构复合成骨细胞特异性识别多肽,探究其缓释效应.方法 光滑钛表面经氢氧化钠碱热处理后通过层层自组装技术将海藻酸钠、壳聚糖进行交替吸附沉积,形成聚电解质多层膜结构,利用此多层膜装载成骨细胞特异性识别多肽,构建其缓释系统,并评价缓释效应.结果 通过接触角测量仪、场发射扫描电子显微镜、荧光显微镜、X射线光电子能谱仪、傅里叶红外光谱以及紫外分光光度计对样品表面进行检测,证实在钛片表面成功构建海藻酸钠—壳聚糖多层膜结构,且成功装载成骨细胞特异性识别多肽,缓释实验显示,该多层膜结构缓释效果明显优于对照组,表明该多层膜结构对特异性多肽具备显著的缓释效应.结论 钛种植体表面通过层层自组装形成多层膜结构并成功装载成骨细胞特异性多肽,构建该多肽的缓释系统,缓释效果显著,有望能够促进钛种植体表面骨结合.

目的 建立镶囊包封率的测定方法,以包封率为指标,对积雪草苷脂质体镶囊的处方和工艺进行考察.方法 建立HPLC法测定积雪草苷,用薄膜分散法制备脂质体,采用层层自组装法制备镶囊.采用低速离心法测定积雪草苷镶囊的包封率,并对方法进行验证.通过单因素实验,考察一系列处方及制备工艺对镶囊包封率的影响,选择影响较大的3个因素进一步采用星点设计-效应面法优化处方工艺.结果 低速离心法测定镶囊包封率准确、可靠.通过单因素实验,确定十八胺用量为磷脂量的4％,海藻酸钠(ALG)和壳聚糖(CS)溶液的质量浓度为1 mg/mL,脂质体混悬液的pH值为7.9,前体层为2层,包埋层为1层.星点设计-效应面法优化得到的最优处方为ALG和CS溶液pH值7.00,反应转速450 r/min,反应时间0.30 h,通过拟合方程计算得到的最优处方的包封率为81.21％.激光共聚焦显微镜显示脂质体成功地包埋在聚电解质微囊的囊壁中.结论 所得积雪草苷镶囊的包封率较高,粒径均匀,激光共聚焦显微镜下形态良好.

目的 在膨体聚四氟乙烯表面构建肝素/胶原蛋白-REDV选择性活性界面,体外观察ePTFE表面早期内皮细胞(ECs)粘附情况和后期内皮细胞增殖及内皮化程度.方法 通过层层自组装技术,在0.1 mm ePTFE膜片表面制备5层肝素和胶原蛋白复合涂层[(HEP/COL)5],随后接枝特异性吸附内皮细胞和内皮祖细胞的REDV多肽和无活性的REVD多肽.将未修饰的ePTFE(ePTFE组)、(HEP/COL)5修饰的ePTFE[(HEP/COL)5组]、(HEP/COL)5-REDV修饰的ePTFE(R EDV组)和(HEP/COL) 5-REVD修饰的ePTFE(REVD组)与脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养1～6 h,荧光显微镜下观察4组ePTFE表面早期内皮细胞粘附情况.6h后将ePTFE膜片转移至新的培养皿,培养24～72 h,进一步评估ePTFE表面细胞增殖情况和内皮化程度.并用CKK-8法检测不同时间点4组ePTFE表面覆盖的内皮细胞活性.结果 细胞贴壁时期,共培养1h和6h时,REDV组ePTFE表面覆盖的内皮细胞较其他组多;共培养6h时REDV组细胞活性最高(OD=0.358),组间比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).细胞增殖时期,修饰过的3组ePTFE表面覆盖的内皮细胞数量均较未修饰的ePTFE表面细胞明显增多,组间比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).修饰过的3组ePTFE的细胞活性较未修饰的ePTFE组明显增高,组间比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05);且与其他3组比较,REDV组表面的内皮细胞数量和内皮细胞活性最高,组间比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).从细胞分布来看,(HEP/COL)5-REDV分布最均匀,培养72 h时,该组表面内皮细胞覆盖率高达95％.结论 在0.1mm ePTFE表面构建(HEP/COL) s-REDV选择性活性界面方法可行,可以促进内皮细胞粘附及细胞增殖,有望在植入体内的ePTFE表面建立内皮细胞屏障,克服血栓形成、内膜增生、材料衰败等缺点.

人工种植牙已经成为牙列缺损和缺失的主流修复技术,但骨质疏松症、糖尿病等全身系统性疾病及口腔颌面部缺损、炎症等局部因素影响了其临床成功率.传统的全身辅助给药方法存在用药量大、有不良反应、局部效果不佳等诸多缺点,如何通过人工种植牙自身载药并局部释放来提高种植成功率成为国内外学者研究的热点.到目前为止,人工种植牙的载药方式主要分为种植体表面载药和种植体内部载药两种.种植体表面载药是通过不同载体将药物加载于种植体表面,并通过不同的方法使之与种植体相结合.种植体表面载药的载体主要有二氧化钛纳米管、多孔钽、钙磷涂层、壳聚糖和聚乳酸-羟基乙酸共聚物,其药物加载方法主要有物理吸附法、共价键结合法、仿生共沉积法、层层自组装技术和复合涂层法.而种植体内部载药是将药物加载于中空的种植体内部、基台或附属装置内,从而达到药物持续释放的效果.本文结合本课题组的研究及相关文献就近年来人工种植牙载药方式及材料等做一论述.

目的:构建一种能够控释血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)和辛伐他汀(simv-astatin,SMV)的生物支架材料,检测两种因子的缓释特征.方法:以静电纺丝技术制备SMV/胶原/聚己内酯膜状支架,进行接触角检测;然后以层层自组装技术在膜状支架表面构建PDGF缓释层,形成PDGF表层-SMV芯层的双因子负载支架材料.进行体外释放实验,分别采用ELISA法和紫外分光光度计检测支架材料释放的PDGF和SMV浓度,分析PDGF和SMV释放特征.结果:胶原能够显著改善SMV/聚己内酯膜状支架的亲水性.体外释放实验结果显示,PDGF释放较早,在3~13 d达到稳定释放期;SMV释放较晚,在6~21 d为稳定释放期.结论:构建PDGF表层-SMV芯层结构的双因子支架材料,实现PDGF和SMV的序贯缓释,有望作为一种用于牙周组织再生的双因子控释系统.

[目的]以天然聚电解质为囊材,以积雪草苷为模型药物,制备以阳离子脂质体为模板的新型脂质体镶囊,探讨处方工艺对新型脂质体镶囊包封率的影响,优化处方工艺.[方法]利用薄膜分散法制备模板脂质体和吸附脂质体,采用层层自组装法(layer-by-layer self-assembly,LbL)制备积雪草苷镶囊.以包封率为指标,对脂质体镶囊的制备工艺进行单因素考察,应用星点设计-效应面法优化处方工艺,考察海藻酸钠和壳聚糖溶液的pH(X1),反应转速(X2,kr/min),反应时间(X3,h)对包封率的影响.多元非线性模型拟合预测最优处方的包封率.[结果]经多元非线性模型拟合得到最优处方为:X1=7.50、X=0.65 kr/min、X3=0.30h,拟合方程计算得到的最优处方的包封率为89.47％.验证实验所得积雪草苷脂质体镶囊的包封率为(88.70±0.25)％(n=3),与预测值的偏差为-0.77％.[结论]所得镶囊的包封率较高,重现性良好.