目的:采用网络药理学方法寻找黄连阿胶汤的有效成分、治疗靶标。方法:根据药代动力学参数筛选药物成分，通过网络药理学方法挖掘药物和疾病靶标并构建药物-靶点网络，研究黄连阿胶汤成分的作用机制。结果:发现黄连阿胶汤中的氢化小檗碱、β-谷甾醇、山姜素、山柰酚、小檗浸碱、荠苎黄酮等19个成分可能通过调控5-羟色胺、多巴胺、γ氨基丁酸、阿片受体、乙酰胆碱等25个靶点作用于失眠症治疗。结论:黄连阿胶汤可能主要通过多个靶点调控多种神经递质发挥对失眠症的治疗作用。

目的 研究山姜素对高糖诱导的结肠细胞NCM460异常增殖的影响及对Nrf2通路的调节作用.方法 结肠细胞NCM460分为正常对照组、高糖模型组、山姜素低、中、高剂量组及阳性对照组,高糖模型组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖,山姜素各剂量组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖,同时分别加入终浓度为25、50、100μmol/L的山姜素,阳性对照组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖的同时加入4 μmol/L的富马酸二甲酯,培养72 h,CCK-8试剂盒测定NCM460细胞增殖率,使用试剂盒测定NCM460细胞活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平及NCM460细胞上清液白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,原位末端标记法(TUNEL)染色法测定NCM460细胞凋亡率,碘化丙啶(PI)染色法测定NCM460细胞周期分布,实时定量聚合酶链式反应(RTq-PCR)NCM460细胞Nrf2、HO-1 mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定NCM460细胞Nrf2、HO-1蛋白水平.结果 与正常对照组比较,高糖模型组NCM460细胞增殖率,ROS、MDA水平,NCM460细胞上清液 IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-12 水平,NCM460 细胞 S 及 G2 期比例显著升高(P＜0.05),NCM460 细胞 SOD、CAT水平,NCM460细胞凋亡率及G1期比例,NCM460细胞Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白水平显著降低(P＜0.05);与高糖模型组比较,山姜素各剂量组及阳性对照组NCM460细胞增殖率,ROS、MDA水平,NCM460细胞上清液IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,NCM460细胞S及G2期比例显著降低(P＜0.05),NCM460细胞SOD、CAT水平,NCM460细胞凋亡率及G1期比例,NCM460细胞Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白水平显著升高(P＜0.05),且随着山姜素剂量的增加,各项指标变化更优(P＜0.05).结论 山姜素能够显著抑制高糖诱导的NCM460细胞炎症水平,修复NCM460细胞氧化应激损伤,抑制高糖诱导的NCM460细胞的异常增殖并促进其凋亡,其机制可能与调节Nrf2/HO-1通路有关.

通过网络药理学和分子对接技术探究中药黄芩治疗酒精性肝病的作用机制,并通过体外细胞实验验证黄芩有效成分对酒精性肝病的治疗效果.在TCMSP、Swiss ADME和Swiss Target Prediction数据库中检索获得黄芩有效成分及其作用靶点;在GeneCards、OMIM、DisGeNET、TTD和PharmGKB数据库中检索获得酒精性肝病相关的疾病靶点;利用String数据库构建靶点相互作用网络;通过Metascape数据库对关键靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、基因本体(GO)富集分析.采用Cytoscape 3.8.0软件构建黄芩治疗酒精性肝病的"有效成分-靶点-通路"互作网络,并筛选出黄芩有效成分和关键靶点进行分子对接.基于网络药理学和分子对接结果,采用体外细胞实验初步验证预测结果.将黄芩有效成分进行ADME筛选后共获得27个,且这27个有效成分可以通过257个基因靶点对酒精性肝病起到治疗作用,其中关键核心靶点有SRC、AKT1、PIK3R1、STAT3、PIK3CA等.KEGG信号通路富集分析结果显示,黄芩治疗酒精性肝病的主要信号通路包括癌症的途径、PI3K-Akt信号通路、脂质与动脉粥样硬化、化学致癌-活性氧物种、前列腺癌等;分子对接结果提示山姜素或将是黄芩治疗酒精性肝病的关键有效成分之一;体外细胞实验证实山姜素可显著改善大鼠肝细胞BRL 3A的酒精性损伤状态.通过网络药理学、分子对接技术和细胞实验的结果可以分析并推断中药黄芩可通过多成分、多靶点的方式对酒精性肝病起到预防和治疗的作用.其中山姜素作为关键有效成分之一,可为进一步利用黄芩开发治疗酒精性肝损伤相关药物提供依据及参考.

目的:探讨山姜素调控微小RNA(miR)146a-5p表达对内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响.方法:采用1 μg/mL的脂多糖处理人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)构建细胞损伤模型.将HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+山姜素低、中、高剂量组、LPS+anti-miR阴性对照组、LPS+anti-miR-146a-5p组、LPS+山姜素+miR-NC阴性对照组、LPS+山姜素+miR-146a-5p组.采用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)水平.采用流式细胞术检测HUVEC的凋亡率.采用实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达.结果:与Con组比较,LPS组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低.与LPS组比较,LPS+山姜素低、中、高剂量组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著降低,而SOD和GSH-Px活性显著升高(P均＜0.05).与LPS+anti-miR-阴性对照组比较,LPS+anti-miR-146a-5p组细胞凋亡率、MDA水平显著降低,而SOD和GSH-Px活性显著升高(P均＜0.05).与LPS+山姜素+miR-阴性对照组比较,LPS+山姜素+miR-146a-5p组细胞凋亡率、MDA水平显著升高,而SOD和GSH-Px活性显著降低(P均＜0.05).结论:山姜素通过下调miR-146a-5p表达减轻内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤.

目的:山姜素或豆蔻明为药食同源植物草豆蔻中的两种主要活性组分,鉴定分析这两种活性组分与人血浆相互作用后的差异显示蛋白.方法:在模拟生理条件下,应用双向电泳技术进行蛋白分离,通过基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱分析及Mascot Distiller软件进行蛋白搜库.结果:获得山姜素或豆蔻明与人血样相互作用后的10个差异显示蛋白,经质谱鉴定为8种蛋白,分别是补体B因子、1-抗胰蛋白酶、载脂蛋白E、间α胰蛋白酶抑制剂家族重链相关蛋白、人类补体成分补体3(C3c)、阿尔法1-抗蛋白酶、类型Ⅱ角质亚单位蛋白、游离型人类载脂蛋白A-Ⅰ.结论:这些差异蛋白与机体防御、增强免疫效应、蛋白代谢、抑制吞噬细胞活性、增加白细胞数目、保持载脂蛋白游离构象等生理过程密切相关,也从一定程度上说明了山姜素或豆蔻明的抗菌抗炎机理及可能的靶蛋白.

目的 通过筛选小鼠RAW246.7巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激活后的核定位结合特异性甲基转移酶,初步验证山姜素可通过激活PPAR引起表观遗传修饰效应.方法 RAW246.7细胞按照不同处理分为对照组、(100、200、500、1000) μg/mL山姜素处理组、1000 μg/mL山姜素联合0.1 mmol/mL GW9662处理组.孵育完成后,首先在String生物信息数据库检索与PPAR作用的甲基转移酶类,再利用免疫共沉淀技术筛选与RAW246.7核内PPAR作用的特异甲基转移酶,荧光定量PCR法验证山姜素对上述甲基转移酶合成的作用.结果 免疫共沉淀结果显示山姜素呈剂量依赖性促进胞核内甲基转移酶Zeste基因增强子同源物2(EZH2)、DNA甲基转移酶3α(DNMT3α)以及胸腺嘧啶DNA糖基化酶(TDG)与PPAR结合,与String数据库预测的互相作用蛋白情况基本吻合,且GW9662组中无甲基转移酶与PPAR作用;荧光定量PCR显示仅1000 μg/mL高剂量山姜素可促进TDG mRNA合成,而对DNMT3A以及EZH2 mRNA含量无显著影响.结论 PPAR激动剂山姜素可易化相关甲基转移酶与PPAR结合或诱导酶合成,提示山姜素具有潜在的甲基化修饰效应.

目的 探讨山姜素对人卵巢癌OVCAR-8细胞的增殖、迁移的抑制作用及其可能机制.方法 以DMSO为溶剂对照,使用不同浓度山姜素(25、50、100、200和400 μmol/L)处理OVCAR-8不同时间(24、48和72 h)后,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活力;采用3D肿瘤微球形成实验检测50 μmol/L山姜素处理7d后肿瘤微球形成能力;使用划痕实验检测100 μmol/L山姜素处理24 h后对迁移能力;采用Western blot法检测不同浓度山姜素(50、100和200 μmol/L,以DMSO为对照)作用48 h后OVCAR-8细胞STAT3信号通路及凋亡相关蛋白表达变化.结果 25～400 μmol/L山姜素对OVCAR-8细胞增殖均有抑制作用,且呈剂量-时间依赖效应关系(均P＜0.05);50μmol/L山姜素处理组肿瘤微球直径较DMSO组明显减小(P＜0.05),而100 μmol/L山姜素组划痕宽度明显宽于DMSO对照组(p＜0.05);此外,50、100和200 μmol/L山姜素处理组Bax、cleaved-caspase-3和-9的表达明显增加,Bcl-2、p-STAT3、c-myc、survivin蛋白表达明显减少,均呈一定的剂量依赖效应关系(均P＜0.05).而STAT3蛋白水平无明显变化(P＞0.05).结论 山姜素对卵巢癌OVCAR-8细胞增殖和迁移具有抑制作用,且可能与STAT3信号通路抑制以及线粒体凋亡通路激活相关.

目的 探讨山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及其作用机制.方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和25、50、100 mg/kg山姜素组.模型组和治疗组每天给予3％葡聚糖硫酸钠溶液,连续7 d.治疗组每日ip生理盐水0.5 mL+25、50、100 mg/kg山姜素,对照组和模型组每天ip生理盐水0.5 mL,连续7 d.观察小鼠体质量变化、结肠长度、疾病活动指数(DAI)评分、组织学损伤评分等炎症反应;透射电镜观察肠上皮细胞间连接;免疫组织化学法、Western blotting法检测肠道紧密连接蛋白claudin-2、occludin、ZO-1、STAT3、pSTAT3、IL-6的表达和STAT3/IL-6信号通路的表达情况.结果 与模型组比较,山姜素能够显著缓解小鼠体质量减轻和肠管缩短,降低DAI和组织学评分.山姜素可增强小鼠肠黏膜occludin、ZO-1表达,减弱claudin-2表达,并能够抑制STAT3/IL-6信号通路.结论 山姜素能够上调葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织occludin、ZO-1的表达,下调claudin-2的表达,通过调节紧密连接蛋白的表达,保护肠上皮细胞屏障的完整性和通透性.通过抑制IL-6/STAT3通路,减轻结肠炎症反应.

目的 建立健胃止痛片(草豆蔻、乌药和干姜等)的质量标准.方法 采用TLC法对乌药和干姜进行定性鉴别,用HPLC法对山姜素含量进行定量测定.结果 薄层色谱斑点清晰,阴性无干扰.山姜素质量浓度在1.055～211.0 μg·mL-1范围内线性关系良好,回归方程为y=8 658.2x+698.6,r=1.000 0;平均回收率为101.7％,RSD值为0.83％.结论 该方法重复性良好、操作简便,可为健胃止痛片的质量控制提供参考.

目的 建立基于液质联用的复方龙胆酊中龙胆、草豆蔻、陈皮的定性定量研究的方法.方法 采用Inertsil ODS-3色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温40℃,流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液;采用HPLC分离龙胆苦苷、山姜素、小豆蔻明和橙皮苷.分别采用电喷雾离子源正、负离子模式扫描,选择多反应离子监测方式(MRM)进行定性监测原料药的投料情况及有效成分的定量分析.结果 通过分析供试品与混合对照药材、对照品的一级质谱图的特征峰,判断该中成药是按处方工艺投料.方法学验证结果表明,龙胆苦苷、小豆蔻明、山姜素和橙皮苷依次分别在103.26～619.56 μg (r=0.999 0)、109.50～657.00 μg (r=0.999 5)、105.50～633.00 μg(r=0.996 9)、105.02～630.12 μg (r=0.999 5)范围内线性关系良好;龙胆苦苷、山姜素、小豆蔻明和橙皮苷精密度依次分别为0.81％、0.48％、0.61％、1.55％,平均回收率依次分别为95.08％、93.28％、94.78％、95.04％.结论 该法快速简便、准确可靠、灵敏度高;适用于全面监测和控制复方龙胆酊中龙胆、草豆蔻、陈皮的投料情况及质量.