基于 INSR/AMPK/SREBP-2 信号通路,观察左归降糖清肝方对 db/db 小鼠 2 型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)脂质代谢的影响,探讨其治疗T2DM合并NAFLD的作用机制.随机将 24 只db/db小鼠分为 4 组:模型组,阳性药物组,左归降糖清肝方低、高剂量组.采用 6 只C57 小鼠作为空白组.左归降糖清肝方高、低剂量组分别予左归降糖清肝方 15、7.5 g·kg-1 灌胃,阳性药物组予二甲双胍 0.067 g·kg-1 灌胃,空白组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续 6 周.灌胃结束后,检测小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),进行口服葡萄糖耐量实验以及血脂、肝功能水平,肝组织病理学分析脂质蓄积情况.Western blot检测胰岛素受体(insulin receptor,INSR)、AMP依赖的蛋白激酶[adenosine 5′-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]、p-AMPK、甾醇调节元件结合蛋白 2(sterol-regulatory element-binding protein 2,SREBP-2)蛋白表达.结果显示,与模型组相比,经左归降糖清肝方治疗的小鼠体质量、肝重系数、空腹血糖、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白(low-density lipopro-tein,LDL)以及肝功能水平降低.肝组织病理学显示,与模型组相比,经左归降糖清肝方治疗的小鼠肝组织脂滴空泡明显减少、紫红色糖原颗粒明显增加.Western blot检测结果表明,与空白组比较,模型组INSR、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平均显著下调,SREBP-2蛋白表达水平均显著上调.与模型组比较,左归降糖清肝方高剂量组INSR、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平均显著上调,SREBP-2蛋白表达水平显著下调;左归降糖清肝方低剂量组 INSR、p-AMPK/AMPK 蛋白表达水平有上调趋势,SREBP-2蛋白表达水平有下调趋势,但差异无统计学意义.上述研究表明,左归降糖清肝方可能通过激活 INSR/AMPK/SREBP-2信号通路,改善db/db小鼠胰岛素抵抗和脂质代谢.

目的 探讨左归降糖清肝方对高脂饮食 2 型糖尿病转基因MKR鼠脂肪肝发生中过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferation-activated receptor-γ-coactivator 1α,PGC-1α)和DNA甲基转移酶 3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)表达的影响.方法 24只MKR鼠随机分为对照组、高脂模型组和左归降糖清肝方(中药方)组;高脂模型组和中药方组均以高脂饲料喂养 8 周,对照组以基础饲料喂养;中药方组高脂饲料喂养 4 周后,以中药汤剂灌胃干预治疗 4 周,其他组灌胃等量的蒸馏水.采用电化学法检测空腹血糖;试剂盒测定肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量;HE染色观察肝组织形态结构及病理变化;qRT-PCR检测小鼠肝组织PGC-1α、线粒体转录因子A(mitochondrial transcriptionfactor A,TFAM)、核呼吸因子-1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)和DNMT3A mRNA表达;Western blot和免疫组织化学检测PGC-1α和DNMT3A蛋白表达.结果 高脂饮食诱发 MKR 鼠形成糖尿病性脂肪肝,肝细胞有大小不一的脂滴,呈脂肪性变;与对照组比较,高脂模型组小鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量显著上升(P<0.01),肝脏PGC-1α、NRF1 和TFAM的mRNA及PGC-1α蛋白表达显著下降(P<0.01),而DNMT3A mRNA和蛋白表达均显著上升(P<0.01).与高脂模型组比较,左归降糖清肝方降低了高脂饮食MKR鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量(P<0.01),上调了肝脏PGC-1α、NRF1 和TFAM 的mRNA表达,以及PGC-1α蛋白表达(P<0.01),下调了DNMT3A的mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论 左归降糖清肝方通过调节肝脏PGC-1α及其通路相关基因表达,缓解糖尿病性脂肪肝小鼠肝脏脂肪性变,其机制可能通过抑制DNA甲基转移酶 3A表达,减少PGC-1α DNA的甲基化相关.

旨在探讨左归降糖清肝方对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)糖脂代谢的影响及作用机制.以MKR小鼠(T2DM小鼠)为研究对象,采用高脂饮食诱导NAFLD,建立T2DM合并NAFLD模型,随机将40只小鼠分为模型组,二甲双胍组(0.067 g·kg-1),左归降糖清肝方高、低剂量组(29.64、14.82 g·kg-1),每组10只,以同龄FVB小鼠作为正常组.除正常组和模型组外,其他各组连续灌胃给药4周后采集血清和肝组织标本,检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting lisulin,FINS)水平;采用GPO-PAP单试剂微板法检测总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)水平;酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测极低密度脂蛋白(very low-density lipoprotein,VLDL)水平;赖式微板法检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和油红O染色观察肝脏病理学形态变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏中叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)、微粒体甘油三酯转移蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTP)和载脂蛋白B(apolipoproteins B,APOB)的基因和蛋白表达情况.结果显示,高剂量左归降糖清肝方能显著降低T2DM合并NAFLD小鼠的FBG、FINS水平(P<0.05,P<0.01),改善葡萄糖耐受和胰岛素抵抗(P<0.05,P<0.01);并能缓解高脂饮食导致的肝脏损伤,表现在改善T2DM合并NAFLD小鼠肝脏脂肪变性程度,显著降低血清中TC、TG、LDL、VLDL、ALT及AST水平(P<0.05,P<0.01);同时研究发现,高剂量左归降糖清肝方干预后肝脏中FoxO1、MTP和APOB的基因和蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01).上述研究表明,左归降糖清肝方能有效改善T2DM合并NAFLD的糖脂代谢,其机制可能与调控FoxO1/MTP/APOB信号通路密切相关.

研究左归降糖清肝方对高脂饮食诱导的2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的肠道菌群稳态调节及肠黏膜屏障的修复作用.以MKR转基因小鼠(T2DM小鼠)为研究对象,使用高脂饮食(HFD)来诱导NAFLD,然后用左归降糖清肝方(7.5、15 g·kg-1)、二甲双胍(0.067 g·kg-1)对小鼠进行8周的治疗.取血清进行肝功能、甘油三酯的检测分析;肝脏组织行HE、Masson染色,肠组织进行HE、AB-PAS染色;利用16S rRNA测序观察各组小鼠肠道菌群的变化;采用免疫荧光、PCR法检测小鼠肠道黏膜屏障关键蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1及其基因(mRNA)的表达水平.结果显示,左归降糖清肝方可改善T2DM合并NAFLD小鼠体质量,降低肝脏指数,下调肝功能及血脂异常的血清生物标志物ALT、AST、TG,增加胰岛素敏感性,并改善葡萄糖耐受的情况.16S rRNA测序结果表明,左归降糖清肝方的治疗改变了肠道微生物群的组成和丰度,增加了Muribaculaceae、Lactobacillaceae、Lactobacillus、Akkermansia、Bacteroidota的相对丰度,降低了Lach-nospiraceae、Firmicutes、Desulfobacterota、Proteobacteria、Desulfovibrionaceae的相对丰度.肠黏膜病理分析显示左归降糖清肝方可增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的表达水平,并促进肠道黏膜的修复,保护肠道绒毛,增加肠黏膜绒毛的高度及杯状细胞的数量.左归降糖清肝方可通过调节肠道微生物群稳态、促进肠道黏膜屏障的修复改善T2DM合并NAFLD诱导的肠黏膜损伤.

目的:探讨左归降糖清肝方改善2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体功能缺失(MKR)小鼠糖脂代谢的作用机制.方法:以MKR小鼠为研究对象,高脂饲料喂养8周诱导形成NAFLD,随机分为模型组、二甲双胍组(0.067g·kg-1)、左归降糖清肝方高、低剂量组(14.8、7.4g·kg-1),同龄FVB小鼠10只作为正常组.分别药物治疗8周后,予以糖耐量测试(OGTT),取血清检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),称取小鼠肝脏湿重,取肝组织进行苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色观察组织病理形态变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织叉头框蛋白O1(FoxO1)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)、载脂蛋白C3(ApoC-Ⅲ)的mRNA表达及其蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、肝脏指数、血清TG、血清TC、OGTT水平显著上升(P＜0.01);与模型组比较,二甲双胍组及左归降糖清肝方组小鼠空腹血糖、肝脏指数显著下降(P＜0.01),左归降糖清肝方高剂量组血清的TG、TC水平均明显下降(P＜0.05,P＜0.01),二甲双胍组及左归降糖清肝方高剂量组可以降低OGTT水平(P＜0.05);在组织病理上,与正常组比较,模型组小鼠可见肝组织脂滴及肝细胞内空泡减少,体积变大;与模型组比较,左归降糖清肝方组和二甲双胍组可见肝组织脂滴减少,肝细胞内空泡减少,体积变小;在分子层面,与正常组比较,模型组小鼠肝组织 FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的mRNA水平显著上调(P＜0.01),FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的蛋白表达显著上调(P＜0.01);与模型组比较,左归降糖清肝方组FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的mRNA水平显著下调(P＜0.01),FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ的蛋白表达显著下调(P＜0.01).结论:左归降糖清肝方能改善T2DM合并NAFLD糖脂代谢并能修复肝脏病理损伤,可能是通过调控肝组织FoxO1、PEPCK、G6Pase、ApoC-Ⅲ相关蛋白的表达,达到调脂、降糖及延缓肝脏脂肪病变的作用.