目的 基于Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR小鼠心肌纤维化及炎症因子的影响.方法 以8周龄雄性MKR小鼠为实验对象,采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)40 mg/kg构建糖尿病心肌病模型,随机分为中药高剂量组[33.67 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、中药低剂量组[16.84 g/(kg·d)左归降糖舒心方 2 g/mL]、西药联合组[0.23 g/(kg·d)二甲双胍联合 1.5 mg/(kg·d)依那普利]和模型组(等容量蒸馏水);另设FVB小鼠为空白对照组(等容量蒸馏水).每组 10只,连续给药 8周后取材.收集尾静脉血液检测空腹血糖水平;采用HE、Masson染色观察心肌病理改变,电镜观察心肌组织超微结构变化;采用ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达情况;RT-qPCR及Western blot检测小鼠心肌组织Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,Collagen Ⅲ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平.结果 与空白对照组比较,模型组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量增高(P<0.01);心肌细胞结构紊乱,胶原含量增加,心肌细胞重度退行性变;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56 蛋白表达上调(P<0.01),Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),中药高剂量组小鼠心肌组织Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白表达增加(P<0.01).与模型组比较,中药高、低剂量组和西药联合组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均降低(P<0.01);心肌结构改善,胶原沉积减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56 蛋白表达下调(P<0.01),Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA蛋白及mRNA表达下调(P<0.01).与西药联合组比较,中药低剂量组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均升高(P<0.01),心肌结构无明显改善,胶原沉积无显著减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA蛋白及mRNA表达上调(P<0.01).结论 左归降糖舒心方能抑制心肌炎性反应、改善心肌细胞结构,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、下调细胞炎症因子表达、抑制心肌纤维化有关.

目的 探讨左归降糖清肝方对高脂饮食 2 型糖尿病转基因MKR鼠脂肪肝发生中过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferation-activated receptor-γ-coactivator 1α,PGC-1α)和DNA甲基转移酶 3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)表达的影响.方法 24只MKR鼠随机分为对照组、高脂模型组和左归降糖清肝方(中药方)组;高脂模型组和中药方组均以高脂饲料喂养 8 周,对照组以基础饲料喂养;中药方组高脂饲料喂养 4 周后,以中药汤剂灌胃干预治疗 4 周,其他组灌胃等量的蒸馏水.采用电化学法检测空腹血糖;试剂盒测定肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量;HE染色观察肝组织形态结构及病理变化;qRT-PCR检测小鼠肝组织PGC-1α、线粒体转录因子A(mitochondrial transcriptionfactor A,TFAM)、核呼吸因子-1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)和DNMT3A mRNA表达;Western blot和免疫组织化学检测PGC-1α和DNMT3A蛋白表达.结果 高脂饮食诱发 MKR 鼠形成糖尿病性脂肪肝,肝细胞有大小不一的脂滴,呈脂肪性变;与对照组比较,高脂模型组小鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量显著上升(P<0.01),肝脏PGC-1α、NRF1 和TFAM的mRNA及PGC-1α蛋白表达显著下降(P<0.01),而DNMT3A mRNA和蛋白表达均显著上升(P<0.01).与高脂模型组比较,左归降糖清肝方降低了高脂饮食MKR鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量(P<0.01),上调了肝脏PGC-1α、NRF1 和TFAM 的mRNA表达,以及PGC-1α蛋白表达(P<0.01),下调了DNMT3A的mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论 左归降糖清肝方通过调节肝脏PGC-1α及其通路相关基因表达,缓解糖尿病性脂肪肝小鼠肝脏脂肪性变,其机制可能通过抑制DNA甲基转移酶 3A表达,减少PGC-1α DNA的甲基化相关.

旨在探讨左归降糖清肝方对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)糖脂代谢的影响及作用机制.以MKR小鼠(T2DM小鼠)为研究对象,采用高脂饮食诱导NAFLD,建立T2DM合并NAFLD模型,随机将40只小鼠分为模型组,二甲双胍组(0.067 g·kg-1),左归降糖清肝方高、低剂量组(29.64、14.82 g·kg-1),每组10只,以同龄FVB小鼠作为正常组.除正常组和模型组外,其他各组连续灌胃给药4周后采集血清和肝组织标本,检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting lisulin,FINS)水平;采用GPO-PAP单试剂微板法检测总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)水平;酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测极低密度脂蛋白(very low-density lipoprotein,VLDL)水平;赖式微板法检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和油红O染色观察肝脏病理学形态变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏中叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)、微粒体甘油三酯转移蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTP)和载脂蛋白B(apolipoproteins B,APOB)的基因和蛋白表达情况.结果显示,高剂量左归降糖清肝方能显著降低T2DM合并NAFLD小鼠的FBG、FINS水平(P<0.05,P<0.01),改善葡萄糖耐受和胰岛素抵抗(P<0.05,P<0.01);并能缓解高脂饮食导致的肝脏损伤,表现在改善T2DM合并NAFLD小鼠肝脏脂肪变性程度,显著降低血清中TC、TG、LDL、VLDL、ALT及AST水平(P<0.05,P<0.01);同时研究发现,高剂量左归降糖清肝方干预后肝脏中FoxO1、MTP和APOB的基因和蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01).上述研究表明,左归降糖清肝方能有效改善T2DM合并NAFLD的糖脂代谢,其机制可能与调控FoxO1/MTP/APOB信号通路密切相关.

目的:探讨铁皮石斛(DC)对MKR小鼠和MIN6细胞中胰岛素抵抗的作用,并阐明其作用机制.方法:9周龄MKR小鼠随机分为4组,分别灌胃给予10、20、40 g·kg-1·d-1 DC和生理盐水(空白对照组),连续给药6周,每2周检测小鼠的血糖,以确定DC降糖作用最佳浓度.8周龄MKR雄鼠随机分为对照组、DC组、二甲双胍(Met)组和联合用药(Met+DC)组,灌胃给予生理盐水和相应药物8周,同时检测小鼠血糖,给药结束后对小鼠进行葡萄糖耐量实验(GTT)和胰岛素耐量实验(ITT),采用qPCR法检测小鼠肝脏和皮下脂肪组织中糖脂代谢相关基因表达水平.体外培养MIN6细胞,分为对照组、高浓度棕榈酸(H-PA)组、高浓度葡萄糖(H-Glu)组、H-PA+H-Glu组、H-PA+DC组、H-Glu+DC组和H-Glu+H-PA+DC组,进行葡萄糖刺激下胰岛素分泌能力实验(GSIS),采用MTT法和ELISA法检测各组细胞增殖活性和胰岛素分泌水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中PI3K/AKT通路蛋白表达水平.结果:在小鼠体内,DC降糖作用最佳浓度为20 g·kg-1·d-1.与对照组比较,DC组、Met组和联合用药组小鼠血糖水平降低(P<0.05);与DC组和Met组比较,联合用药组小鼠血糖水平进一步降低(P<0.05).GTT和ITT实验,与DC组和Met组比较,联合用药组小鼠糖耐量和胰岛素敏感性明显提高,胰岛素抵抗情况明显改善.与对照组比较,联合用药组小鼠肝组织中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Pepck)mRNA表达水平明显降低(P<0.05),葡萄糖激酶(Gck)mRNA表达水平明显升高(P<0.05),Met组和联合用药组小鼠皮下脂肪组织中氧化物酶增殖物激活受体γ(Ppar-γ)mRNA表达水平明显升高(P<0.05).在MIN6细胞中,经筛选,选择160μmol·L-1 H-PA和30 mmol·L-1 H-Glu诱导MIN6细胞胰岛素抵抗,以1.44 g·L-1 DC处理各组细胞.GSIS,分别与H-PA组、H-Glu组和H-PA+H-Glu组比较,加入DC后,H-PA+DC组、H-Glu+DC组和H-PA+H-Glu+DC组MIN6细胞胰岛素分泌水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率降低,磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS-1)、磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平明显升高(P<0.05);H-PA+H-Glu+DC组MIN6细胞磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:DC可以改善MKR小鼠的胰岛素抵抗,与Met联合用药后效果更加明显;在体外,DC可以通过PI3K/AKT信号通路改善H-PA和H-Glu诱导的MIN6细胞的胰岛素抵抗,并可增加胰岛素分泌水平,降低细胞凋亡率.

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病(DN)骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体缺失转基因鼠(MKR鼠)肾组织miRNA-181a及GRP78表达的影响.方法:8周龄MKR鼠,按性别、空腹血糖、体质量随机分为空白组,模型组(高脂喂养联合单侧肾切除),左归降糖益肾方组,阳性药物组(格列喹酮片0.0039g/kg+盐酸贝那普利片0.0013g/kg),4-苯基丁酸组(1.44g/kg),每组15只;同龄C57鼠10只作为正常组.造模后8周灌胃给药,左归降糖益肾方28.8g/kg灌胃治疗8周.留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠.电化学法检测空腹血糖,酶联免疫吸附法(EHSA)检测尿微量白蛋白含量;荧光PCR检测肾组织miRNA-181a表达水平,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)和Western blot法分别检测肾组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平;电镜观察肾组织病理变化.结果:与模型组比较,左归降糖益肾方能降低DN小鼠空腹血糖及尿微量白蛋白含量(P＜0.01),并能调控miRNA-181a及GRP78的表达水平(P＜0.01);疗效等同于阳性药物组;并能改善肾组织病理损伤.结论:左归降糖益肾方可通过调控miRNA-181a、GRP78表达水平,从而抑制肾组织损伤.

目的 通过薯蓣丸联合龙血竭胶囊对MKR转基因2型糖尿病小鼠创面进行干预,探讨薯蓣丸联合龙血竭胶囊对糖尿病创面愈合的影响.方法 选取8周龄MKR小鼠80只,雌雄各半,按照小鼠的空腹血糖情况及体重随机分为5组:模型组、薯蓣丸+龙血竭组[薯蓣丸提取液(37.2 g/kg·d)]、薯蓣丸组、龙血竭组、二甲双胍组,每组16只小鼠.另设16只C57/BL6小鼠作为正常组.制造全层皮肤缺损的创面模型后分别给药14天,观察空腹血糖、创面愈合率、病理形态结构、晚期糖基化终末产物(AGE)及T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)含量.结果 与模型组比较,给药14天时薯蓣丸+龙血竭组、薯蓣丸组、二甲双胍组空腹血糖降低(P＜0.01);给药3、7、10、14天时各给药组创面愈合率升高(P＜0.01).与二甲双胍组比较,给药3、7、10、14天时薯蓣丸+龙血竭组创面愈合率升高(P＜0.01).给药7天后,薯蓣丸+龙血竭组、薯蓣丸组、二甲双胍组、龙血竭组HE染色可见成纤维细胞,与模型组比较炎性细胞浸润减少;给药14天后,薯蓣丸+龙血竭组、薯蓣丸组、二甲双胍组、龙血竭组无明显炎性增生,炎症细胞较用药7天时明显减少.与模型组比较,给药7天时二甲双胍组、薯蓣丸+龙血竭组、龙血竭组、薯蓣丸组CD3+、CD4+百分比及CD4+/CD8+比值升高(P ＜0.05,P＜0.01),CD8+百分比降低(P＜0.01);给药14天时,薯蓣丸+龙血竭组、龙血竭组及二甲双胍组CD4+/CD8+比值升高,薯蓣丸+龙血竭组、龙血竭组、薯蓣丸组、二甲双胍组CD3+、CD4+、CD8+百分比降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 薯蓣丸联合龙血竭胶囊能促进糖尿病创面愈合,其机制可能与降低血糖、AGE,提高机体细胞免疫以及改善炎症反应有关.

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病(DN) MKR鼠肾组织VDR、CYP27B1表达的影响.方法:8周龄MKR鼠随机分为假手术组、模型组(高脂喂养联合单侧肾切除)、中药(左归降糖益肾方)组、阳性药物组(格列喹酮片与盐酸贝那普利片),每组15只;正常组选取同龄C57鼠10只.造模8周后灌胃给药,治疗8周.留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠.电化学法检测空腹血糖,常规生化法检测尿蛋白含量;取新鲜肾组织,实时荧光定量PCR检测肾组织VDR、CYP27Bl mRNA的表达水平;Western blot法检测肾组织VDR、CYP27B1蛋白的表达水平;HE及电镜观察肾组织病理变化.结果:与模型组比较,中药组能升高DN小鼠体质量(P＜0.05),降低肾质量、肾肥大指数、空腹血糖、尿蛋白含量、血清肌酐、尿素氮含量(P＜0.01);上调VDR、CYP27B1的mRNA及蛋白的表达水平(P＜0.01);改善肾组织病理损伤结构.结论:左归降糖益肾方可以通过调控VDR、CYP27B1的表达水平,改善肾组织病理结构损伤.

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)"脾为本虚"的理论机制及左归复方对T2DM肠道炎症及黏膜屏障的影响及作用机制.方法:采用2型糖尿病MKR模型鼠,连续给予左归复方4周,ELISA法检测胰岛素、炎症相关因子及内毒素浓度,HE染色观察肠道病理形态,RT-qPCR和Western blot检测肠道TLR4/NF-κB通路和紧密连接蛋白的基因和蛋白表达.结果:左归复方可明显降低MKR鼠血糖水平,改善胰岛素抵抗;左归复方可明显抑制炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)分泌,降低血液中内毒素浓度;左归复方还能上调肠道紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达,下调TLR4/NF-κB信号通路的mRNA和蛋白表达.结论:左归复方可通过减轻肠道慢性低度炎症和恢复肠道屏障功能从而改善MKR鼠胰岛素抵抗.

目的 探讨白虎加人参汤对转基因2型糖尿病MKR小鼠肠道屏障及Toll样受4(TLR4)/核转录因子-κB (NF-κB)炎症通路的影响.方法 32只MKR小鼠高脂饮食喂养4周,随机分为模型组,白虎加人参汤低、高剂量(13.5、54.0 g/kg)组,二甲双胍(200 mg/kg)组,8只同龄FVB/N野生小鼠作为对照组.各组ig给药4周后,测定小鼠空腹血糖(FBG)、口服糖耐量(OGTT)、血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和脂多糖(LPS)水平的变化,苏木精-伊红(HE)染色对结肠组织形态进行观察,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测结肠组织TLR4、NF-κB、ZO-1、Claudin-1、Occludin mRNA表达变化,Western blotting检测结肠组织ZO-1、Claudin-1、Occludin蛋白表达变化.结果 与模型组比较,给药组小鼠FBG水平显著降低(P＜0.01),白虎加人参汤高剂量组和二甲双胍组小鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α、LPS水平明显降低(P＜0.05、0.01),TLR4、NF-κB mRNA表达明显下调,结肠上皮黏膜完整性明显改善;白虎加人参汤高剂量组和二甲双胍组小鼠ZO-1、Claudin-1、Occludin mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05、0.01);白虎加人参汤低剂量组小鼠ZO-1、Claudin-1、Occludin mRNA表达升高(P＜0.05),但蛋白表达水平无明显差异.结论 白虎加人参汤能降低MKR小鼠血清LPS含量及炎症相关因子水平,并调控TLR4/NF-κB信号通路,通过改善内毒素血症、肠道屏障功能,减轻肠道炎症反应,从而改善胰岛素抵抗,降低血糖水平.

目的 观察白虎加人参汤对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)MKR小鼠肠道解偶联蛋白2(uncoupling pro-tein 2,UCP2)、AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)表达及胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)分泌的影响,探讨其降糖机制.方法 将MKR小鼠随机分为模型组和白虎加人参汤低、高剂量组,以FVB小鼠为空白组,中药干预4周后,观察小鼠糖代谢变化;ELISA法检测小鼠血清中胰岛素(insulin,INS)、GLP-1水平;RT-qPCR检测小鼠结肠AMPK、UCP2 mRNA水平;Western blot法检测小鼠结肠P-AMPKα、UCP2蛋白表达水平;组织形态学观察小鼠结肠组织病理形态及黏液量的变化.结果 白虎加人参汤低、高剂量组与模型组比较,均能显著降低MKR小鼠的空腹血糖和INS水平(P<0.01);并能提高血清GLP-1浓度(P<0.01,P<0.05);上调小鼠结肠AMPK mRNA和P-AMPKα水平(P<0.01),下调UCP2 mRNA和蛋白水平(P<0.01).白虎加人参汤低、高剂量组均能明显改善MKR小鼠结肠组织病理形态.结论 白虎加人参汤可能通过抑制UCP2表达、激活AMPK的表达,促进肠道GLP-1的分泌,发挥治疗T2DM的作用.