目的:优化常绿钩吻碱壳聚糖微乳温敏凝胶(SPV-CTMH)处方并对其进行质量评价.方法:以胶凝温度作为考察指标,结合单因素实验与星点设计-效应面法对常绿钩吻碱微乳温敏凝胶(SPV-TMH)处方进行优化;采用Franz扩散池法考察处方中加入不同浓度的壳聚糖后SPV-CTMH的黏膜渗透和细胞毒性情况,以选择合适的壳聚糖浓度,并对优化后的SPV-CTMH 的外观、pH值、黏度和黏膜渗透等状况进行考察.结果:SPV-TMH最优处方选择泊洛沙姆188含量为4.21％(W/V),泊洛沙姆407含量为16.92％(W/V);添加0.2％以上浓度的壳聚糖后可明显改善药物的黏膜渗透情况,并能显著提高体外抑制U251细胞增殖的能力,最终选择加入0.2％(W/V)浓度的壳聚糖;所制SPV-CTMH的含药量为(1.099±0.001)mg·mL-1,pH值为6.03±0.05,Zeta电位为(24.09±1.37)mV,粒径为(32.7±1.9)nm,胶凝前流动顺畅,胶凝后黏度显著增加,并显著改善了常绿钩吻碱的黏膜渗透.结论:所制备得到的SPV-CMTH质量优良,应用于鼻腔给药有望提升疗效.

目的 优化常绿钩吻碱微乳处方,并对其进行安全性评价.方法 溶解度法筛选油相、乳化剂、助乳化剂种类,绘制伪三元相图.以油相、乳化剂、助乳化剂用量为影响因素,粒径、载药量为评价指标,Box-Behnken响应面法优化处方.采用在体蟾蜍上颚模型、大鼠鼻黏膜病理切片考察微乳的鼻腔给药安全性.结果 最佳处方为油相(Labrafil M 1944 CS)、乳化剂(RH40)、助乳化剂(1,2-丙二醇)、水用量 5%、19.53%、19.25%、56.22%,平均粒径为 32.6 nm,载药量为 2.201 mg/mL,多分散系数为 0.165,室温pH值为6.27.与生理盐水组比较,常绿钩吻碱微乳组蟾蜍上颚纤毛摆动时间无明显变化(P>0.05).鼻腔给药后,大鼠鼻黏膜结构完整,纤毛整齐.结论 该方法稳定可靠,可用于制备无明显纤毛毒性、鼻黏膜刺激性的常绿钩吻碱微乳.

钩吻Gelsemium elegans,马钱科Loganiaceae钩吻属Gelsemium常绿木质藤本植物,为中国传统药用植物,其味辛、苦,性温,有剧毒,常用来祛风、攻毒、消肿和止痛.该文检索并查阅了近些年来钩吻在化学成分和药理作用方面的文献,并对其进行总结和归纳.目前的研究表明,已从钩吻中分离出生物碱、环烯醚萜、三萜类、酚酸类、甾体类、香豆素、木脂素、四甲基环己烯型单萜苷类化合物、黄酮类等多种成分,其中,钩吻生物碱多为吲哚类生物碱,是其主要的活性成分,能显著抑制中枢神经活动.现代药理学研究表明钩吻生物碱具有多种药理活性,可通过调控细胞周期来达到抗肿瘤的目的;增强巨噬细胞吞噬能力,保护白细胞,促进机体免疫调节;治疗癌性疼痛和长期疼痛;使心肌收缩力减弱,血管舒张以达到降压效果;另外还对焦虑症和皮肤病的治疗起到一定作用.在今后的研究中,仍需对钩吻的化学成分进行深入研究,开发有前景的先导化合物,并进一步明确毒理和药理临床价值,探明作用机制,使其得到更充分合理的利用,为钩吻扩大应用和安全使用奠定基础.

剧毒植物钩吻(Glsemium elegans Benth.)又名断肠草、野葛、大茶药、黄藤、火把花、猪人参等,为马钱科(Loganiaceae)胡蔓藤属常绿一年生木质藤本植物.主要分布于我国浙江、江西等长江以南省份及东南亚地区.钩吻的主要活性成分为吲哚类生物碱,包括:甲基钩吻素乙(gelsedine)类、钩吻素甲(gelsemine)类、葫蔓藤乙素(humantenine)类、钩吻素子(koumine)类、蛇根精(sarpagine)类以及育亨宾(yohimbane)类.目前,钩吻中得到了此6类共近一百种生物碱[1].其中,钩吻中含量最多的生物碱是钩吻素子(koumine),其次包括钩吻绿碱(gelsevirine)、钩吻素甲(gelsemine)、胡蔓藤碱乙(humantenine)和钩吻素己(gelsenicine)等(图1).另外,钩吻中还含有多种环烯醚萜苷、环稀醚萜和甾体等非生物碱类化合物.

常绿钩吻碱(sempervirine,SPV)是从钩吻中分离得到的一种育亨宾型生物碱,本研究探讨了常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤细胞体内外增殖的作用特征.以0～16 μmol·L-1不同浓度常绿钩吻碱处理人神经胶质瘤U251细胞24、48和72 h,分别用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst细胞核染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色法检测细胞凋亡,Western blot法检测PI3K、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2、caspase-3和cleaved caspase-3蛋白.采用体内裸鼠移植神经胶质瘤模型,观察常绿钩吻碱抗神经胶质瘤的体内作用,所有动物实验操作均严格遵守福建医科大学生物医学伦理委员会相关规定.结果 显示,常绿钩吻碱在1～8 μmol·L-1能显著抑制U251细胞的增殖和集落形成,引起细胞核固缩,促进细胞凋亡,蛋白检测表明,其促进caspase-3的切割活化,下调Bcl-2/Bax值和PI3K蛋白的表达,抑制AKT的磷酸化;裸鼠移植瘤实验结果表明,剂量4和8 mg·kg-1·day-1常绿钩吻碱干预能抑制体内神经胶质瘤的生长,肿瘤重量分别减少了44.76％和61.26％.本研究在体内外水平表明,常绿钩吻碱能明显抑制神经胶质瘤的增殖,为其抗神经胶质瘤的研究开发奠定基础.

目的 研究在口服5 mg/kg和舌下静脉注射0.1 mg/kg2种不同给药方式下,钩吻绿碱和常绿钩吻碱在大鼠体内的药代动力学差异.方法 色谱柱为UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),柱温设为40℃.以甲醇-水(含0.1％甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速设为0.4 ml/min,洗脱时间为5 min.电喷雾(ESI)正离子模式检测,多反应监测(MRM)模式对钩吻绿碱m/z 353.1→322.1,常绿钩吻碱m/z 273.2→257.0和内标m/z 335.2→184.2进行定量分析.结果 经口服给药后,钩吻绿碱的t1/2 为(13.8±13.7)h,AUC(0-t)为(215.8±96.2)ng/(ml·h),CL2 为(21.2±10.0)L/(h·kg);舌下静脉注射给药后,钩吻绿碱的 t1/2为(11.7±13.9)h,AUC(0-t)为(70.5±10.9)ng/(ml·h),CLz为(1.2±0.5)L/(h·kg).经口服给药后,常绿钩吻碱的t1/2为(5.5±4.8)h,AUC(0-t)为(44.9±18.7)ng/(ml·h),CLz为(113.4±64.3)L/(h·kg);舌下静脉注射给药后,常绿钩吻碱的t1/2为(7.6±4.1)h,AUC(0-t)为(23.6±6.5)ng/(ml·h),CLz为(4.0±1.2)L/(h·kg).结论 建立UPLC-MS/MS技术测定大鼠血浆中钩吻绿碱和常绿钩吻碱的方法并成功应用于药动学研究,生物利用度低,分别为6.1％、3.8％.

目的 探讨钩吻总生物碱(TA)和常绿钩吻碱(SPV)的体外抗肿瘤作用及机制.方法 观察低、中、高浓度TA(50、100、200 μg/mL)和SPV(10、30、50 μmol/L)对人肝癌细胞(HepG2、Bel-7402)、人肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT-8)形态的影响并实时监测TA和SPV对4种肿瘤细胞的毒性;检测TA和SPV对HCT-8细胞上清液中胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9含量和细胞中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)(Thr308、Ser473)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、生存素、C/EBP-同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达的影响.结果 TA和SPV干预后的4种肿瘤细胞形态均出现体积缩小、细胞核皱缩的现象,细胞活性均出现不同程度的降低,其中TA和SPV对HCT-8细胞的抑制效果最好.TA和SPV干预后的HCT-8细胞上清液中caspase-3、caspase-9含量和细胞中Bax、CHOP、Bip、LC3Ⅱ蛋白表达水平均不同程度升高,p-Akt(Thr308、Ser473)、Bcl-2、生存素蛋白表达水平均不同程度降低.结论 TA和SPV对上述4种肿瘤细胞均具有抑制作用,其对HCT-8细胞的抑制效果最好;二者对HCT-8细胞的作用机制可能与促进细胞凋亡、激活内质网应激和细胞自噬有关.