目的 研究宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及微小核糖核酸(miR)-let-7d-5p、miR-3607-3p、蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(CIP2A)的诊断效能.方法 选取2021年1月-2022年12月十堰市人民医院收治的124例宫颈病变患者作为研究对象,其中宫颈癌患者36例、宫颈鳞状上皮内病变(SIL)患者41例和宫颈炎患者47例,分别纳入A组、B组和C组,比较三组HPV表达情况,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-let-7d-5p、miR-3607-3p、CIP2A对宫颈癌的诊断效能.结果 A组HPV阳性表达率、HPVE6/E7信使核糖核酸(mRNA)高载量率及宫颈组织CIP2A表达水平均高于B组、C组,且B组高于C组(P＜0.05),A组宫颈组织miR-let-7d-5p、miR-3607-3p表达水平均低于B组、C组,且B组低于C组(P＜0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-let-7d-5p、miR-3607-3p、CIP2A联合检测诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)、敏感度和特异度分别0.937、94.44％和85.23％.结论 宫颈癌患者HPV阳性表达率、HPV E6/E7 mRNA高载量率较高,宫颈组织miR-let-7d-5p、miR-3607-3p、CIP2A表达异常,三者联合检测诊断宫颈癌的诊断效能较高.

目的 筛选卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者卵泡液外泌体差异表达微小核糖核酸(micro RNA,miRNA),探索其与DOR相关的潜在分子机制.方法 收集 2021 年 12 月～2022 年 3 月于柳州市人民医院生殖医学科辅助生殖助孕 18 例患者的卵泡液为研究样本,根据卵巢功能评估结果分为卵巢功能正常(Normal)组和卵巢功能减退(DOR)组.miRNA PCR阵列芯片法检测两组卵泡液外泌体miRNA的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证芯片结果,最后通过生物信息学分析差异表达miRNA的靶基因及其富集的相关生物学功能和分子通路.结果 DOR组筛选出 5 条差异表达miRNA:let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达下调,miR-483-3p表达上调;qRT-PCR验证结果显示与Normal组比较,DOR组let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达降低,miR-483-3p的表达升高,差异具有统计学意义(t=3.147,4.405,3.95,3.147,-3.198,均P＜0.05);差异表达miRNA的靶基因主要富集于p53 信号通路和FoxO信号通路,靶基因CDKN1A,RRM2,CCND1,SESN3,MDM4,BCL2L11,SMAD4,IGF1 及IGF1R参与p53 信号通路和FoxO信号通路,靶基因METTL3,METTL6 及METTL8 参与RNA m6A甲基化.结论 DOR患者卵泡液外泌体中的差异表达miRNA参与p53 和FoxO信号通路及RNA m6A甲基化的调控,是DOR发生机制和诊疗的潜在标靶.

目的 观察原因不明复发性自然流产 (URSA) 患者外周血白细胞介素6 (IL-6) 、微小核糖核酸 (miRNA) let-7d-5p水平变化, 探讨二者在URSA发病中的关系.方法 选取正常早孕妇女 (正常妊娠组) 和URSA患者 (URSA组) 各30例, 空腹抽取其外周静脉血, ELISA法检测血清IL-6蛋白, q PCR法检测单个核细胞 (PBMC) 中的let-7d-5p.采用Target Scan生物信息软件, 以Target Scan 7. 1程序预测let-7d-5p与IL-6 mRNA的3'非翻译区 (3'UTR) 是否存在潜在结合位点;将293T细胞分为干预组和对照组, 分别同时转染let-7d-5p (空白对照NC) 与野生型或突变型IL-6 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因pmir GLO载体, 采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶报告基因活性.将293T细胞分为3组, 过表达组、抑表达组利用Lipofectamine 2000转染let-7d-5p mimics及inhibitor, 空白对照组转染阴性对照引物;转染24 h后收集细胞, q PCR检测各组细胞中的IL-6 mRNA, ELISA检测各组培养上清液中的IL-6.结果 与正常妊娠组比较, URSA组外周血IL-6蛋白水平升高, 而PBMC中let-7d-5p表达降低 (P均<0. 05) .Target Scan 7. 1程序预测显示, let-7d-5p与IL-6 mRNA的3'UTR之间具有潜在的碱基互补结合位点;双荧光素酶报告基因系统检测显示, 与对照组比较, 干预组能降低野生型IL-6 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性 (P <0. 05) , 但对突变型IL-6 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性无明显影响 (P> 0. 05) .与空白对照组比较, 过表达组细胞中IL-6 mRNA表达及细胞上清液中IL-6水平降低 (P均<0. 05) , 抑表达组细胞中IL-6 mRNA表达及细胞上清液中IL-6水平升高 (P均<0. 05) .结论 URSA患者血清IL-6蛋白水平升高, 而PBMC中let-7d-5p表达降低; let-7d-5p与IL-6 mRNA 3'UTR结合并抑制IL-6表达, 靶向let-7d-5p调控IL-6表达可能成为URSA治疗的有效途径.

目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者血清细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)中let?7d?3p水平的变化,评估其作为NSCLC患者辅助筛查液体活检分子标志物的临床应用价值.方法 选取2020年9月至2021年5月于东部战区总医院确诊的NSCLC患者102例及同期年龄、性别匹配的体检健康者70例,收集患者组及健康人对照组血清标本并分离EVs,采用实时荧光定量PCR(quantitative real?time PCR,qRT?PCR)技术检测各组血清EVs中let?7d?3p表达水平变化,ROC曲线分析血清EVs let?7d?3p测定对于NSCLC患者的辅助筛查价值.结果 与健康人对照组相比,NSCLC患者血清EVs中let?7d?3p水平显著降低[69.75(25.64,154.70)fmol/L vs 26.09(13.74,45.56)fmol/L],差异有统计学意义(U=1830,P<0.001);同时,NSCLCⅠ期患者[26.07(11.15,45.30)fmol/L]血清EVs let?7d?3p水平亦显著降低(U=1201,P<0.001).ROC曲线分析结果显示,血清EVs let?7d?3p水平用于筛查NSCLC患者及Ⅰ期患者的ROC曲线下面积(the area under the ROC curve,AUCROC)分别为0.744(95％CI:0.667～0.821)和0.736(95％CI:0.653～0.819);当cut?off值为45.07 fmol/L时,血清EVs let?7d?3p筛查NSCLC及NSCLCⅠ期患者的敏感性和特异性分别为74.5％和60％,75.4％和60％.此外,NSCLC患者血清EVs let?7d?3p水平不受年龄、性别、吸烟史及病理类型的影响,差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 NSCLC患者尤其是早期患者血清EVs中let?7d?3p水平与健康人对照相比显著降低,具备作为NSCLC辅助筛查液体活检分子标志物的潜能.