目的:筛选AS患者PBMCs中差异表达的环状RNA（circRNA），分析其表达谱以探讨circRNAs在AS发病中的作用。方法:采用circRNA微阵列芯片技术检测3例AS活动期（ASA）患者，3例AS稳定期（ASS）患者和3名健康对照者（HC）PBMCs中circRNAs的表达并通过倍数变化（FC）和 P值进行筛选，找到差异表达的circRNAs；从差异表达靠前的circRNAs中随机选择4个circRNAs，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证芯片结果；对差异表达的circRNAs进行基因本体论（GO）分析，京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析，并通过微RNA（miRNA）靶标预测软件对circRNA/miRNA相互作用关系进行预测。采用 t检验和Mann-Whitney U检验等方法对数据进行统计分析。 结果:芯片结果显示，ASA组较HC组共有800个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中466种上调，334种下调；ASS组较HC组共有1 149个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中589种上调，560种下调；ASA组较ASS组间共有233个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中145种上调，88种下调。RT-qPCR验证结果提示，4个差异表达的circRNAs表达趋势与芯片结果一致。GO分析结果提示，这些差异表达的circRNAs主要参与无义介导的mRNA衰变、Rho GTPase酶结合等过程；KEGG分析结果在辅助性T细胞（Th）17细胞分化、趋化因子信号通路等处得到富集；miRNA靶标预测软件结果提示差异表达的circRNAs可能靶向结合miR-650、let-7b-5p等miRNAs发挥作用。 结论:和HC组相比AS患者PBMCs中存在差异表达的circRNAs，推测这些circRNAs可能参与AS的发病。

目的:探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)在侵袭转移中的作用及其机制。方法:收集2016年7月至2017年9月于江南大学附属医院手术切除肺癌组织及其对应的癌旁组织180例，构建组织微阵列免疫组织化学检测组织中MACC1与β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。采用慢病毒介导的小干扰RNA(siRNA)下调MACC1在A549细胞中的表达，分为对照组、慢病毒空载体组和敲低组。构建短发卡RNA(shRNA)质粒实现MACC1-shRNA干扰质粒后慢病毒感染H1299细胞(购自美国ATCC公司)使MACC1基因的沉默，分为质粒转染组与慢病毒空载体组，采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Transwell小室实验、划痕试验分别检测细胞增殖能力、侵袭性和迁移性。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:组织芯片免疫组织化学显示肺腺癌组织中MACC1与β-catenin的表达水平呈正相关(相关系数0.397， P<0.05)；慢病毒介导A549细胞MACC1下调后引起β-catenin表达下降[对照组(0.83±0.04)比空载体组(0.91±0.09， t＝-0.241， P>0.05；空载体组(0.91±0.09)比敲低组(0.24±0.02， t＝1.940, P<0.05)；对照组(0.83±0.04)比敲低组(0.24±0.02， t＝1.699， P<0.05]；沉默MACC1后行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测H1299的β-catenin表达显著下降(0.79±0.07比0.38±0.08， t＝3.267， P<0.05)，且质粒转染组H1299细胞平均穿膜细胞数[(18.3±2.36)个]少于慢病毒空载体组[(36.2±2.1)个， t＝-13.460， P<0.05]；划痕实验显示24 h后质粒转染组[(266±27) μm]距离明显小于慢病毒空载体组[(931±36) μm， t＝2.631， P<0.01]。 结论:MACC1在肺腺癌中高表达，促进癌基因β-catenin的表达，从而促进肺腺癌的侵袭转移。

目的:应用生物信息学技术筛选出肝细胞癌组织中的低表达基因F9，通过汇合多个基因芯片数据、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及免疫组织化学分析F9基因和F9蛋白在肝细胞癌中的表达水平，探索其与肝细胞癌发生发展及与各个临床指标和预后的相关性。方法:通过分析GEO数据库中mRNA微阵列数据集,获取与肝细胞癌相关的具有明显表达差异的基因F9;收集18例肝细胞癌患者的肝癌及癌旁组织,采用RT-qPCR法检测F9基因表达水平，免疫组化用于检测F9蛋白水平;结合TCGA数据库信息,分析F9基因表达水平与预后及临床病理参数之间的相关性。通过基因本体论（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）对肝细胞癌相关的F9共表达基因进行生物功能分析。采用Graphpad Prism软件进行统计学分析。结果:Meta分析结果表明肝细胞癌组织中F9基因的表达低于非癌组织。免疫组织化学结果与RT-qPCR基本一致。从TCGA中获取的数据表明F9基因在Stage III~IV、T3~T4期以及有血管侵犯的患者中有更低的表达值。生物信息学分析共选择127个基因作为F9的共表达基因，在氧化还原过程和代谢途径中高度富集。结论:F9基因及F9蛋白在肝细胞癌中低表达；F9基因下调预示不良结局，可能为肝细胞癌提供了一个新的治疗靶点。

目的:明确1例生长发育迟缓、智力障碍患儿的遗传学病因。方法:应用常规G、C和N显带分析患儿外周血染色体，然后用单核苷酸微阵列芯片(single nucleotide polymorphisms array, SNP array)技术进行识别和定位，并应用荧光定量PCR技术验证。结果:患儿染色体核型为46, XX, r(22)(p12q13)；SNP array拷贝数变异分析结果提示患儿染色体22q13.33区存在约1.4 Mb片段的拷贝数缺失：arr 22q13.33 (49 802 963～51 197 766)×1，缺失片段中包含已知致病性明确、影响神经系统发育的 SHANK3等基因。荧光定量PCR结果提示患儿 SHANK3基因第7、19和22外显子的拷贝数约为正常对照的1/2，提示患儿携带该片段的杂合性缺失。 结论:22号染色体q13.33区域的微缺失与患儿生长发育迟缓、智障等临床特征相关，遗传学分析为临床诊断提供了依据。

目的:产前诊断1例孕中期胎儿颈部皮肤皱褶(nuchal fold，NF)增厚且孕妇无创产前检测提示X染色体异常的胎儿。方法:采集羊水细胞，联合使用染色体核型分析、单核苷酸多态性微阵列、荧光原位杂交和多重荧光定量PCR等技术对胎儿进行产前诊断，并行父母验证。结果:胎儿羊水细胞核型为46，X，r(X)[42]/45，X[56]/47，X，r(X)，+dic r(X；X)[2]，微阵列芯片提示Xp21.31-p22.33和Xq21.2-q28区分别缺失约28.3 M和70.2 M，父母外周血核型分析未见异常。结论:细胞遗传技术和分子诊断技术相结合可为环状染色体提供更精准的产前诊断，遗传咨询需全方面评估胎儿的疾病严重程度，综合相关指南和环状X染色体自身特殊性，本例变异评估为致病性变异，且预后不良。

目的:探讨DNA损伤激活的非编码RNA (NORAD)诱导细胞自噬对食管胃结合部腺癌(AEG)奥沙利铂耐药的影响及分子机制。方法:收集2023年1月至6月安阳市肿瘤医院诊治的进展期AEG患者AEG及其癌旁正常组织手术标本4对，应用长链非编码RNA微阵列芯片分析AEG及其癌旁组织中NORAD的表达情况。使用新鲜AEG组织标本制备肿瘤组织来源的AEG细胞系(PDC) ，构建PDC和AEG细胞系OE19的奥沙利铂耐药细胞系(PDC-R、OE19-R)，并通过转染shNORAD制备敲减NORAD的PDC-R和OE19细胞系(shNORAD PDC-R、shNORAD OE19-R)。应用生物信息学工具Starbase v3.0和DIANA-lncBase v3.0预测NORAD潜在靶点及其与微RNA-433-3p(miR-433-3p)的相互作用。PDC、PDC-R，OE19、OE19-R细胞分别共转染miR-144-3p和野生型NORAD(NORAD-WT)或突变型NORAD(NORAD-Mut)质粒，应用双萤光素酶报告实验验证NORAD与miR-433-3p的相关性。通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃正常黏膜细胞系GES-1及AEG细胞系PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R、shNORAD OE19-R中NORAD和miR-433-3p表达水平，蛋白质印迹法检测上述细胞p62和微管相关蛋白1轻链3 B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定奥沙利铂对PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R和shNORAD OE19-R细胞的细胞半数抑制浓度(IC 50)。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:微阵列芯片分析发现与癌旁正常组织相比，AEG中NORAD表达显著上调(差异表达倍数≥2.0, P<0.05)。生物信息学研究发现miR-433-3p是NORAD的潜在靶点。双萤光素酶报告实验结果显示，在PDC和PDC-R细胞中，NORAD-WT组的相对萤光素酶活性低于NORAD-Mut组(0.441±0.104比0.928±0.204、0.449±0.112比0.947±0.201)，差异均有统计学意义( t＝－14.74、－14.94,均 P<0.001)；OE19和OE19-R细胞中双萤光素酶报告实验结果与PDC细胞系相同。qRT-PCR检测结果显示，NORAD在GES-1细胞中的相对表达量(1.016±0.213)低于PDC细胞(2.194±0.322)和PDC-R细胞(4.040±0.336)，且在PDC细胞中相对表过量低于PDC-R细胞，差异均有统计学意义( t＝－14.94、－37.21、－19.43，均 P<0.001)；在shNORAD PDC-R细胞中的相对表达量(0.290±0.165)则低于PDC-R细胞，差异有统计学意义( t＝－49.05, P<0.001)。miR-433-3p在GES-1细胞中的相对表达量(1.017±0.248)高于PDC细胞(0.470±0.156)和PDC-R细胞(0.203±0.045)，且PDC细胞中的相对表达量高于PDC-R细胞，差异均有统计学意义( t＝9.15、15.85、8.11,均 P<0.001)，在shNORAD PDC-R细胞中的相对表达量(0.699±0.256)也高于PDC-R细胞，差异有统计学意义( t＝9.37, P<0.001)。蛋白质印迹法检测结果显示，PDC-R中LC3B-Ⅱ相对表达量高于PDC细胞(0.426±0.060比0.212±0.041)，shNORAD PDC-R细胞中LC3B-Ⅱ的相对表达量(0.155±0.029)低于PDC细胞，差异均有统计学意义( t＝8.70、－79.45，均 P<0.001)；而p62在各细胞系中表现呈相反趋势，在PDC-R中相对表达量低于PDC(0.205±0.031比0.311±0.040)，在shNORAD PDC-R中的相对表达量(0.504±0.084)高于PDC，差异均有统计学意义( t＝－31.19、62.80，均 P<0.001)。在OE19细胞系的原始细胞、耐药细胞和NORAD敲减细胞中NORAD和miR-433-3p，以及LC3B-Ⅱ和p62表达变化规律与PDC细胞系相似。CCK-8评估靶细胞活力发现，奥沙利铂对PDC、PDC-R和shNORAD PDC-R细胞的IC 50值分别为14.28、22.27和2.51 μg/mL，对OE19、OE19-R和shNORAD OE19-R细胞的IC 50值分别为3.95、8.12和1.89 μg/mL。 结论:NORAD在AEG组织及细胞中呈高表达；在奥沙利铂耐药的细胞呈过表达，而且增加了细胞的自噬活性。敲减NORAD后AEG细胞自噬活性受到抑制，而且AEG细胞对奥沙利铂的敏感性增加。

目的:识别鉴定α粒子辐射致人支气管上皮BEP2D细胞癌变中的差异表达核仁小分子RNA(snoRNA)，预测其靶标基因及RNA共表达网络。方法:通过全基因组转录组微阵列芯片对人支气管上皮细胞BEP2D及由其衍生的α粒子诱发癌变的BERP35T-4细胞的RNA差异表达谱分析，从中筛选出差异表达的snoRNA，qRT-PCR验证包括其衍生sdRNA在内的表达变化，通过生物信息学分析snoRNA的功能区，预测靶标和共表达网络。结果:qRT-PCR验证结果与芯片结果一致，sno116家族在BERP35T-4中表达下降，是BEP2D的0.105%，差异有统计学意义( t＝26.60， P<0.01)；筛选的sno116-14等在癌变细胞BERP35T-4及人肺癌细胞A549和H1299等中表达量普遍下调，并且还发现sno116-14衍生的sdRNA的表达量在同一细胞中差异显著，建立了sno116家族的mRNA-lncRNA共表达网络，预测靶标有ZNF280D、TFDP1、CCDC28B、RPS6KA3、CANX、RUNX1、KALRN等，功能上与细胞增殖、细胞骨架结构等相关。 结论:识别鉴定了α粒子辐射致细胞癌变相关差异表达snoRNA，预测sno116-14的靶标基因参与细胞增殖、细胞骨架结构等生物学过程和功能调控信号通路，为C/D box snoRNA发挥功能的作用方式及电离辐射致癌机制提供了新的信息。

目的:探讨环状RNA（circRNA）在RA PBMCs表达谱的差异及临床意义。方法:收集4例RA患者（T组）及4名健康体检者（C组）静脉血，运用Arraystar circRNA微阵列芯片检测2组PBMCs中circRNA表达谱，应用相关数据库进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证表达失调circRNA的表达情况，并对目标circRNA构建circRNA-微小RNA（miRNA）-信使RNA（mRNA）调控网络（即ceRNA网络）。建立受试者工作特征曲线（ROC曲线），对潜在诊断价值进行分析。采用SPSS Statistics 23.0和Graphpad Prism 8.0分析数据，采用两独立样本 t检验分析2组间差异。 结果:①微阵列芯片结果显示，与C组比较，T组PBMCs中异常表达的circRNA共有399个，其中149个上调，250个下调。②生物信息学分析：circRNA与miRNA结合位点预测提示RA中差异表达的circRNA可能通过靶向结合miR-140-5p、miR-338-5p和miR-9-5p等分子影响炎症反应；基因本体论分析发现差异表达的circRNA主要在细胞质、蛋白质结合等方面；京都基因与基因组百科全书通路分析发现涉及的通路多与人体免疫调节相关。③多样本RT-qPCR验证结果显示T组中hsa_circRNA_009012的相对表达量显著高于C组（ t=-4.417， P<0.01），hsa_circRNA_101328的表达水平显著低于C组（ t=-1.042， P<0.01），hsa_cir-cRNA_058230的表达无明显改变（ t=4.691， P>0.05）。④ ROC曲线分析提示hsa_circRNA_009012具有诊断RA的潜在价值（ROC曲线下面积=0.96）。 结论:circRNA在RA患者PBMCs中表达失调，可能参与RA发生发展的调控，其中hsa_circRNA_009012有望成为RA诊疗的新型生物学标志物。

探讨CNVPLUS ?微阵列芯片（CNVPLUS ?-array）在 DMD基因诊断中的应用价值。选取2014年1月至2023年3月在上海交通大学医学院附属新华医院儿内分泌遗传科就诊、临床诊断Duchenne/Becker肌营养不良（DMD/BMD）的96例儿童纳入回顾性分析，分别采用CNVPLUS ?-array技术和多重连接探针扩增（MLPA）—二代测序（NGS）—Sanger测序序贯法检测患儿外周血 DMD基因。序贯法中，MLPA检出的单外显子缺失运用聚合酶链式反应（PCR）验证，PCR结果正常的样本再行Sanger测序；MLPA阴性的样本行NGS检测并用Sanger测序验证。结果显示，96例样本中，CNVPLUS ?-array检出 DMD基因致病性变异91例，其中大片段缺失/重复即拷贝数变异（CNV）76例、微小变异即单核苷酸变异/小插入缺失（SNV/Indel）15例，5 d完成所有样本的实验和诊断；序贯法则检出致病性CNV 76例、SNV/Indel 20例，48 d完成全部实验和诊断。5例CNVPLUS ?-array漏诊的SNV/Indel样本优化运算模式后致病位点可以正确聚类。综上，CNVPLUS ?-array由于集CNV和SNV探针为一体，能同步检测 DMD基因的CNV和SNV/Indel，但对CNV的诊断性能优于SNV/Indel，有待优化运算模式必要时需补充其他检测以减少漏诊风险。

目的:探讨血清miR-143水平结合MRI在预测宫颈癌同步放化疗(CCRT)早期反应的价值。方法:收集85例经病理证实的宫颈癌患者，在CCRT前均行常规MRI、腔内非相干运动扩散加权成像(IVIM-DWI)和动态增强MRI (DCE-MRI)，并收集患者的活检组织和血清样品。应用微阵列芯片分析活检组织中miRNA差异性表达。采用qRT-PCR分析血清样品中miR-143水平。根据术后MRI表现，将患者分为非残留肿瘤组和残留肿瘤组。对两组患者术前临床因素、MRI参数和miR-143进行单因素和多因素分析，绘制受试者工作曲线(ROC)曲线，估计治疗后残留肿瘤发生的最佳阈值和预测性能。结果:CCRT完成后1个月，无残留组52例，残留组33例。残留组肿瘤的国际妇产科联合会分期、表观扩散系数、D和V e明显高于非残留组( P<0.05)，K trans明显低于非残留组( P<0.001)。miRNA阵列分析显示两组间有16个miRNAs表达差异( P<0.05)，其中miR-143的升高在残留组患者中最为显著。与残留组相比，非残留组的血清miR-143表达显著下调( P＝0.002)。与Siha细胞相比，SiHa-R细胞的miR-143表达明显上调( P<0.05)。多因素分析显示只有miR-143、D、K trans和V e是独立的预后因素。ROC曲线分析显示MRI-miR-143组合参数的曲线下面积最高(AUC＝0.975)，敏感性为84.8%，特异性为96.2%。 结论:治疗前MRI参数与血清miR-143的结合进一步提高了CCRT后残留肿瘤的预测性能，有助于宫颈癌的个性化治疗。