目的 探讨肺超声特征及血清微小RNA-132(miR-132)、微小RNA-432(miR-432)与耐药肺结核(DR-PTB)抗结核疗效的关系.方法 选取2020年1月至2023年4月黑龙江省传染病防治院收治的85例DR-PTB患者作为研究对象.所有患者入院后均进行规范化抗结核治疗,治疗前进行肺超声检查,分析肺超声特征,比较不同肺超声特征患者血清miR-132、miR-432水平.统计治疗6个月后抗结核疗效,根据结核分枝杆菌培养结果,将患者分为疗效良好组和疗效不良组,比较疗效良好组和疗效不良组临床资料.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-132、miR-432对DR-PTB患者抗结核疗效不良的预测价值.结果 85例DR-PTB患者中,胸膜下实变:单个29例(34.12％),多个56例(65.88％);胸膜下结节64例(75.29％);胸膜增厚68例(80.00％);空洞38例(44.71％);胸腔积液20例(23.53％);肺尖实变46例(54.12％).多个胸膜下实变、有胸膜下结节、有胸膜增厚、有空洞、有胸腔积液、有肺尖实变患者患者血清miR-132、miR-432水平高于单个胸膜下实变、无胸膜下结节、无胸膜增厚、无空洞、无胸腔积液、无肺尖实变患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).结核菌培养结果显示,疗效不良组有37例患者,疗效良好组有48例患者.疗效不良组复治、耐多药、有空洞患者比例及血清miR-132、miR-432水平高于疗效良好组,差异均有统计学意义(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-132、miR-432单独预测DR-PTB患者抗结核疗效不良的曲线下面积(AUC)分别为0.768、0.744;血清miR-132、miR-432联合预测DR-PTB患者抗结核疗效不良的AUC为0.921;联合预测的AUC 大于血清 miR-132、miR-432 单独预测的AUC(Z 联合-miR-132=2.368,P=0.018;Z联合-miR-432=2.7 2 3,P=0.007).结论 血清miR-132联合miR-432对DR-PTB患者抗结核疗效不良的预测价值较高,且高于单项指标的预测价值.

目的:探讨微小RNA(miR)-432与异柠檬酸脱氢酶( IDH)野生型胶质瘤的细胞增殖迁移、患者总生存期及三基序蛋白质38( TRIM38)基因表达的关系。 方法:(1)下载中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中198例胶质瘤患者(81例 IDH突变型、106例 IDH野生型、11例未知型)的临床资料、miRNA表达芯片数据及5例非肿瘤对照脑组织样本的miRNA表达芯片数据，比较miR-432在不同 IDH突变状态的胶质瘤亚型间及与非肿瘤对照样本间的表达差异。依据 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432表达水平的中位值，将患者分为miR-432高表达组( n=51)与miR-432低表达组( n=53)，采用Kaplan-Meier生存分析比较2组间总生存期的差异。采用单因素Cox回归分析和多因素Cox回归分析筛选 IDH野生型胶质瘤患者总生存期的影响因素。应用Pearson相关性分析检验 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与 TRIM38基因表达水平的关系。(2)体外培养人胶质瘤细胞系U251，并分为miR-432无义序列对照组和miR-432类似物组。采用细胞计数试剂(CCK)-8法检测2组细胞培养第1~5天时的活性，采用Transwell小室实验检测2组细胞的迁移能力，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组细胞中 TRIM38 mRNA的表达水平。(3)分别将野生型及突变型含TRIM38 3'-末端非翻译区(3'-UTR)的pGL3荧光报告载体结合miR-432无义序列、miR-432类似物转染U251细胞，分为miR-432无义序列+野生型TRIM38 3'-UTR组、miR-432类似物+野生型TRIM38 3'-UTR组、miR-432无义序列+突变型TRIM38 3'-UTR组及miR-432类似物+突变型TRIM38 3'-UTR组，并应用酶标仪检测各组细胞的荧光素酶活性。 结果:(1)与 IDH突变型胶质瘤样本相比， IDH野生型胶质瘤样本中miR-432的表达水平明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)。miR-432低表达组的总生存期较miR-432高表达组明显缩短，差异有统计学意义( P<0.05)。患者的年龄、肿瘤级别及miR-432表达分组与 IDH野生型胶质瘤患者的总生存期相关( P<0.05)，但miR-432表达分组并不是患者总生存期的独立影响因素( P>0.05)。 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与 TRIM38 mRNA的表达水平呈负相关关系( r=-0.255， P=0.018)。(2)与无义序列对照组比较，miR-432类似物组培养第2~5天时的细胞活性明显降低，迁移细胞数目明显减少， TRIM38 mRNA表达水平明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)miR-432类似物+野生型TRIM38 3'-UTR组的荧光素酶活性明显低于miR-432无义序列+野生型TRIM38 3'-UTR组细胞，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:miR-432在 IDH野生型胶质瘤组织中表达降低，且与患者的预后不良有关；过表达miR-432能够抑制胶质瘤细胞的增殖迁移能力，这或许与其能特异性结合 TRIM38基因并干扰该基因表达有关。

目的 探讨微小RNA-432(miR-432)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 采用qRT-PCR技术检测人骨肉瘤细胞MG-63、人成骨细胞hFOB1.19中miR-432表达.将对数生长期MG-63细胞随机分为三组,分别转染miRNA对照质粒(miR-NC组)、miR-432抑制质粒(miR-432 inhibitor组)及miR-432过表达质粒(miR-432组),转染48 h时进行接种培养,分别检测细胞增殖(吸光度值)、迁移和侵袭情况.利用miRWalk和miRanda生物信息学软件预测miR-432靶基因可能为致癌基因CX3CL1,分别构建含有miR-432结合位点的CX3CL1基因3'-UTR区野生型(CX3CL1-wt)和突变型(CX3CL1-mut)荧光素酶报告载体.将MG-63细胞分别共转染CX3CL1-wt或CX3CL1-mut报告载体和miR-432载体(观察组),并设置共转染miR-NC载体作为对照组.转染48 h时,采用双荧光素酶试剂盒检测相对荧光素酶活性.结果 MG-63细胞中miR-432相对表达量低于hFOB1.19细胞(P＜0.01).miR-NC组、miR-432 inhibitor组、miR-432组细胞中miR-432相对表达量分别为1.00±0.01、0.47±0.03、3.62±0.03,组间比较P均＜0.01.miR-432组培养24、36、48 h的细胞吸光度值均明显低于miR-NC组、miR-432 inhibitor组,miR-432 inhibitor组均明显高于miR-NC组.miR-432 inhibitor组及miR-432组细胞相对迁移率分别为(122±7)％、(65±4)％,相对侵袭率分别为(189±25)％、(49±11)％;上述指标组间比较P均＜0.05.CX3 CL1-wt和miR-432共转染MG-63细胞后,观察组相对荧光素酶活性低于对照组(P＜0.05);CX3CL1-mut和miR-432共转染细胞后,对照组和观察组相对荧光素酶活性分别为1.00±0.11、0.93 ±0.13,两组比较P＞0.05.结论 miR-432过表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,靶向调控致癌基因CX3CL1可能是其作用机制.

目的:探索血浆及外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA (miRNA)在精神分裂症(SZ)诊断中的价值. 方法:根据文献报道筛选出与SZ相关的7种miRNA(has-miR-449a,has-miR-34a-5p,has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p,has-miR-548d-5p和has-miR-572);提取35例初诊的SZ患者(患者组)及15名健康体检者(对照组)的抗凝全血的血浆及PBMC中的RNA,采用实时逆转录聚合酶链式扩增反应技术测定血浆及PBMC中这7种miRNA水平,计算其相对表达量. 结果:患者组血浆及PBMC中4种miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量较对照组明显增加(P均＜0.05);患者组7种miRNA的相对表达量血浆明显高于PBMC(P均＜0.05);多变量ROC曲线显示,患者组血浆miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-548 d-5p)ROC曲线下面积为98％,灵敏度为90.9％,特异度为95.4％;PBMC miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p以及has-miR-548 d-5p) ROC曲线下面积为86％;灵敏度为88.2％,特异度为78.3％. 结论:SZ患者血浆及PB-MC中的miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量明显增高;血浆miRNA更有潜力成为SZ的分子诊断标志物.

目的:探讨芒果苷减轻缺氧复氧所致人心肌细胞损伤的效应及机制.方法:将人心肌AC16细胞分为正常对照组、缺氧复氧组及芒果苷(50、100和200μmol/L)+缺氧复氧组.分别采用RT-qPCR及Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap-1)、Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9和超氧化物歧化酶2(SOD2)的mRNA及蛋白表达;Western blot法检测细胞核中核因子E2相关因子2(Nrf-2)的表达水平;RT-qPCR法检测miR-432-3p的表达;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡.结果:相对于正常对照组,缺氧复氧处理AC16细胞后,miR-432-3p和Keap-1的mRNA及蛋白表达无明显变化,Nrf-2核转位和ROS生成增多(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9的mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD2和Bcl-2的mRNA及蛋白水平以及细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡显著增多(P<0.05);相对于缺氧复氧组,芒果苷处理组miR-432-3p表达显著上调(P<0.05),ROS生成减少(P<0.05),Keap-1、Bax、caspase-3和caspase-9的mRNA及蛋白水平显著下降(P<0.05),Nrf-2核转位进一步增多(P<0.05),SOD2和Bcl-2的mRNA及蛋白水平以及细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡显著减少(P<0.05),中、高剂量组的效应明显优于低剂量组,中、高剂量组间的差异无统计学显著性.结论:芒果苷可抑制缺氧复氧损伤所造成的心肌细胞活力下降及细胞凋亡,其机制可能与其促进miR-432-3p表达,进而上调Nrf-2抗氧化应激效应有关.

目的 探究脊柱结核患者血清特异性循环miRNA表达水平及其临床意义.方法 选择2016年6月至2018年9月深圳市第三人民医院收治的50例脊柱结核患者作为观察组,选择同期在上述医院进行体检的50例健康志愿者作为对照组.分别提取其外周血血清中RNA,经miRNA基因芯片检测筛选出差异表达的miRNA,采用实时荧光定量PCR进行验证.比较两组受检者及观察组患者手术前后的miRNA表达水平.结果 经miRNA基因芯片初步筛选出17个差异表达的miRNA,其中16个表达下调,1个表达上调;经实时荧光定量PCR验证,hsa-miR-30c-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p的表达量显著下调,hsa-miR-210-3p的表达量显著上调;观察组患者术前的hsa-miR-30c-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p表达水平分别为1.48±0.45、1.67±0.32、1.84±0.43、1.49±0.35,明显低于对照组的11.35±3.08、4.72±1.13、5.29±1.49、4.11±1.28,hsa-miR-210-3p表达水平为3.92±1.34,明显高于对照组的1.28±0.31,组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);观察组患者术后1年的hsa-miR-30c-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p表达水平分别为10.31±2.29、4.01±1.22、4.69±1.17、3.52±0.87,明显高于术前的1.48±0.45、1.67±0.32、1.84±0.43、1.49±0.35,hsa-miR-210-3p表达水平为1.86±0.47,明显低于术前的3.92±1.34,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);hsa-miR-30c-5p在诊断脊柱结核上的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00％、96.00％、98.00％、96.15％和100.00％,明显高于hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p和hsa-miR-210-3p,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 脊柱结核患者的血清中存在特异性表达的循环miRNAs,其检测对于脊柱结核的临床诊断具有一定的临床参考价值.

目的 分析胆道闭锁患者肝组织中has-circ-0009096和has-circ-00083234的表达差异及其作用机制.方法 通过RT-qPCR检测了15例BA组及其对照组肝组织中has-circ-0009096和has-circ-00083234的表达水平;通过生物信息技术预测了能够与它们结合的miRNA及其下游靶基因,并进行KEGG信号通路富集分析以阐明BA的潜在发病机制.结果 has-circ-0009096在BA组中的相对表达水平高于CC组(P＜0.0001);has-circ-00083234在BA组中的表达水平下调(P=0.0037).通过circRNA预测的靶miRNA与BA相关的miRNA集相交,我们获得了4个miRNA(hsa-miR-145-5p,hsa-miR-222-3p,hsa-miR-221-3p和hsa-miR-432-5p).基于这2个circRNA和4个miRNA,建立了circRNA-miRNA调控网络.根据miRNA下游基因进行KEGG信号通路富集分析,发现了Hippo,TGF-β,Adherens junction,Focal adhesion,ECM-receptor interaction以及多能干细胞调节等多条信号通路可能与BA的发病机制相关.结论 has-circ-0009096和has—circ-00083234在BA肝组织中表达失调,并可能参与BA的疾病进展.因此,has-circ-0009096和has-circ-00083234可作为BA诊断的候选指标,而circRNA-miR通路的研究可能为探索BA的发病机制提供新的思路.

目的 探讨微小RNA-432(miR-432)在肺结核患者血清中的表达水平及对该病的诊断价值.方法 纳入2021年1-6月中国人民解放军总医院第八医学中心收治的55例活动性肺结核(ATB)患者和45例结核潜伏感染(LTBI)患者分别为ATB组和LTBI组,另选取同期体检健康者50例为对照组.采用荧光定量聚合酶链反应技术检测结核病患者(LTBI+ATB)和健康对照人群血清miR-432表达水平.采用简单线性回归分析方法分析血清miR-432表达水平与炎症因子水平的相关性.通过绘制受试者工作特征曲线分析miR-432对肺结核的诊断价值.结果 结核病患者(LTBI+ATB)的miR-432表达水平明显高于对照组[(0.005 5±0.001 2)比(0.003 0±0.001 6)],差异有统计学意义(P＜0.001).ATB 组患者的 miR-432 表达水平明显高于LTBI组[(0.006 2±0.000 9)比(0.004 8±0.001 3)],差异有统计学意义(P＜0.001).结核病患者(LTBI+ATB)中,血清miR-432表达水平与肿瘤坏死因子a和白细胞介素1β水平均呈正相关(r=0.629,P＜0.001;r=0.616,P＜0.001).血清 miR-432 区分 LTBI 与健康人群的截断值为 0.003 6,曲线下面积(AUC)为0.821,敏感度为84.4％,特异度为72.0％;区分ATB和健康人群的截断值为0.004 7,AUC为0.942,敏感度为94.6％,特异度为84.0％;区分LTBI和ATB患者的截断值为0.005 5,AUC为0.771,敏感度为70.9％,特异度为71.1％.结论 miR-432在肺结核患者血清中高表达,可以作为肺结核诊断的候选生物标志物.