目的:探讨微小RNA(miR)-432与异柠檬酸脱氢酶( IDH)野生型胶质瘤的细胞增殖迁移、患者总生存期及三基序蛋白质38( TRIM38)基因表达的关系。 方法:(1)下载中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中198例胶质瘤患者(81例 IDH突变型、106例 IDH野生型、11例未知型)的临床资料、miRNA表达芯片数据及5例非肿瘤对照脑组织样本的miRNA表达芯片数据，比较miR-432在不同 IDH突变状态的胶质瘤亚型间及与非肿瘤对照样本间的表达差异。依据 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432表达水平的中位值，将患者分为miR-432高表达组( n=51)与miR-432低表达组( n=53)，采用Kaplan-Meier生存分析比较2组间总生存期的差异。采用单因素Cox回归分析和多因素Cox回归分析筛选 IDH野生型胶质瘤患者总生存期的影响因素。应用Pearson相关性分析检验 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与 TRIM38基因表达水平的关系。(2)体外培养人胶质瘤细胞系U251，并分为miR-432无义序列对照组和miR-432类似物组。采用细胞计数试剂(CCK)-8法检测2组细胞培养第1~5天时的活性，采用Transwell小室实验检测2组细胞的迁移能力，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组细胞中 TRIM38 mRNA的表达水平。(3)分别将野生型及突变型含TRIM38 3'-末端非翻译区(3'-UTR)的pGL3荧光报告载体结合miR-432无义序列、miR-432类似物转染U251细胞，分为miR-432无义序列+野生型TRIM38 3'-UTR组、miR-432类似物+野生型TRIM38 3'-UTR组、miR-432无义序列+突变型TRIM38 3'-UTR组及miR-432类似物+突变型TRIM38 3'-UTR组，并应用酶标仪检测各组细胞的荧光素酶活性。 结果:(1)与 IDH突变型胶质瘤样本相比， IDH野生型胶质瘤样本中miR-432的表达水平明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)。miR-432低表达组的总生存期较miR-432高表达组明显缩短，差异有统计学意义( P<0.05)。患者的年龄、肿瘤级别及miR-432表达分组与 IDH野生型胶质瘤患者的总生存期相关( P<0.05)，但miR-432表达分组并不是患者总生存期的独立影响因素( P>0.05)。 IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与 TRIM38 mRNA的表达水平呈负相关关系( r=-0.255， P=0.018)。(2)与无义序列对照组比较，miR-432类似物组培养第2~5天时的细胞活性明显降低，迁移细胞数目明显减少， TRIM38 mRNA表达水平明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)miR-432类似物+野生型TRIM38 3'-UTR组的荧光素酶活性明显低于miR-432无义序列+野生型TRIM38 3'-UTR组细胞，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:miR-432在 IDH野生型胶质瘤组织中表达降低，且与患者的预后不良有关；过表达miR-432能够抑制胶质瘤细胞的增殖迁移能力，这或许与其能特异性结合 TRIM38基因并干扰该基因表达有关。

目的:观察肝细胞癌患者血清中微小RNA(miRNA，miR)-432、微小RNA-432(miR-30b)及微小RNA-432(miR-764)水平。方法:选取安徽医科大学第三附属医院2015年1月30日至2018年1月30日收治的150例肝细胞癌患者，同时选取150例年龄匹配的体检结果健康者作为对照组，采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测研究对象外周血中miR-432、miR-30b及miR-764表达水平。观察miR-432、miR-30b及miR-764与肝细胞癌患者临床病理因素的相关性，并对肝细胞癌患者进行随访，观察miR-432、miR-30b及miR-764与患者总生存期(OS)的相关性。采用独立样本 t检验及Log-rank检验。 结果:肝细胞癌患者外周血中miR-432(2.11±0.71)、miR-30b(1.88±0.68)及miR-764(1.90±0.65)水平均较对照组高(1.12±0.40、1.01±0.38、0.99±0.35， t＝4.879、13.679、15.097， P<0.01)。miR-432、miR-764表达量与肝细胞癌TNM分期有相关( P<0.05)，miR-30b与肝细胞癌TNM分期及分化程度有相关( P<0.05)。Kaplan-Meier法及Log-rank检验显示，miR-432、miR-30b及miR-764表达量升高组OS短于降低组(Log-rank χ2＝16.433、10.575、7.998， P<0.05)。Cox多因素分析均显示，TNM分期、miR-432、miR-30b、miR-764、肿瘤分化程度是肝细胞癌OS的独立影响因素[比值比( OR)＝2.904、2.135、1.651、1.496、1.205， P<0.05]。 结论:肝细胞癌患者循环中miR-432、miR-30b及miR-764表达上调，且与患者总生存率降低密切相关。

目的 探讨微小RNA(miR)-432-5p对胃癌细胞增殖、转移和放疗敏感性的作用及在此过程中与DEAD-盒解旋酶41(DDX41)的靶向调控关系.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,将HGC-27细胞进行转染并分为NC组(未转染质粒)、miR-NC组(转染miR-432-5p mimics阴性对照)、miR-432-5p组(转染miR-432-5p mimics)、miR-432-5p+pcDNA-NC组(转染miR-432-5p和pcDNA-DDX41阴性对照)、miR-432-5p+pcDNA-DDX41组(转染 miR-432-5p mimics和pcDNA-DDX41).48 h后采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-432-5p、DDX41的表达,MTT检测各组细胞增殖活性,Transwell实验检测各组细胞的迁移能力,克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞的放疗敏感性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-432-5p和DDX41的靶向关系,建立裸鼠移植瘤模型并检测肿瘤生长情况,蛋白质印迹法检测裸鼠肿瘤组织中DDX41蛋白的表达.结果 与正常细胞比较,胃癌细胞中 miR-432-5p水平降低(P<0.05),DDX41 mRNA水平升高(P<0.05);与NC组和miR-NC组比较,miR-432-5p组细胞的存活率、DDX41 mRNA水平均降低,迁移细胞数减少(P<0.05),miR-432-5p水平升高、放疗敏感性增强(P<0.05);DDX41过表达逆转了miR-432-5p对胃癌细胞增殖、迁移及放疗敏感性的作用(P<0.05);裸鼠移植瘤实验发现结果显示,与NC组和miR-NC组比较,miR-432-5p组小鼠肿瘤组织体积、重量及DDX41蛋白表达均降低(P<0.05).结论 miR-432-5p通过靶向下调DDX41来抑制胃癌细胞的增殖和转移,增强细胞的放疗敏感性.

目的 探讨微小RNA-432(miR-432)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 采用qRT-PCR技术检测人骨肉瘤细胞MG-63、人成骨细胞hFOB1.19中miR-432表达.将对数生长期MG-63细胞随机分为三组,分别转染miRNA对照质粒(miR-NC组)、miR-432抑制质粒(miR-432 inhibitor组)及miR-432过表达质粒(miR-432组),转染48 h时进行接种培养,分别检测细胞增殖(吸光度值)、迁移和侵袭情况.利用miRWalk和miRanda生物信息学软件预测miR-432靶基因可能为致癌基因CX3CL1,分别构建含有miR-432结合位点的CX3CL1基因3'-UTR区野生型(CX3CL1-wt)和突变型(CX3CL1-mut)荧光素酶报告载体.将MG-63细胞分别共转染CX3CL1-wt或CX3CL1-mut报告载体和miR-432载体(观察组),并设置共转染miR-NC载体作为对照组.转染48 h时,采用双荧光素酶试剂盒检测相对荧光素酶活性.结果 MG-63细胞中miR-432相对表达量低于hFOB1.19细胞(P＜0.01).miR-NC组、miR-432 inhibitor组、miR-432组细胞中miR-432相对表达量分别为1.00±0.01、0.47±0.03、3.62±0.03,组间比较P均＜0.01.miR-432组培养24、36、48 h的细胞吸光度值均明显低于miR-NC组、miR-432 inhibitor组,miR-432 inhibitor组均明显高于miR-NC组.miR-432 inhibitor组及miR-432组细胞相对迁移率分别为(122±7)％、(65±4)％,相对侵袭率分别为(189±25)％、(49±11)％;上述指标组间比较P均＜0.05.CX3 CL1-wt和miR-432共转染MG-63细胞后,观察组相对荧光素酶活性低于对照组(P＜0.05);CX3CL1-mut和miR-432共转染细胞后,对照组和观察组相对荧光素酶活性分别为1.00±0.11、0.93 ±0.13,两组比较P＞0.05.结论 miR-432过表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,靶向调控致癌基因CX3CL1可能是其作用机制.

目的:探索血浆及外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA (miRNA)在精神分裂症(SZ)诊断中的价值. 方法:根据文献报道筛选出与SZ相关的7种miRNA(has-miR-449a,has-miR-34a-5p,has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p,has-miR-548d-5p和has-miR-572);提取35例初诊的SZ患者(患者组)及15名健康体检者(对照组)的抗凝全血的血浆及PBMC中的RNA,采用实时逆转录聚合酶链式扩增反应技术测定血浆及PBMC中这7种miRNA水平,计算其相对表达量. 结果:患者组血浆及PBMC中4种miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量较对照组明显增加(P均＜0.05);患者组7种miRNA的相对表达量血浆明显高于PBMC(P均＜0.05);多变量ROC曲线显示,患者组血浆miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-548 d-5p)ROC曲线下面积为98％,灵敏度为90.9％,特异度为95.4％;PBMC miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p以及has-miR-548 d-5p) ROC曲线下面积为86％;灵敏度为88.2％,特异度为78.3％. 结论:SZ患者血浆及PB-MC中的miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量明显增高;血浆miRNA更有潜力成为SZ的分子诊断标志物.

目的:探讨冠状动脉(冠脉)血管内超声钙化特征联合血清miRNA-1、miRNA-208b水平对非ST段抬高型急性冠脉综合征(NSTE-ACS)患者经皮冠脉介入(PCI)术后冠脉再狭窄的预测价值.方法:纳入2015-07-2018-03于我院行PCI术的NSTE-ACS患者470例为研究对象,所有患者均进行血管内超声检查,观察斑块钙化特征,并于术后1个月测定血清miRNA-1与miRNA-208b水平.术后随访1年,按照PCI术后1年内是否发生冠脉再狭窄分为对照组(432例)和狭窄组(38例).收集对照组和狭窄组患者的临床一般资料、实验检查资料,采用单因素和多因素Logistic回归分析术后再狭窄的危险因素,采用ROC曲线评估各因素预测价值.结果:共有38例(8.1％)发生术后再狭窄.对照组和狭窄组性别、平均年龄、合并基础疾病、吸烟史、BMI、血管狭窄数目、支架长度、支架数量、支架直径等一般资料均差异无统计学意义.对照组与狭窄组钙化病变比例、钙化长度、钙化弧度、钙化斑块类型、钙化特征评分及术后1个月miRNA-1、miRNA-208b水平均差异有统计学意义(均P＜0.05).Logistic回归分析结果显示,钙化特征评分(OR=3.827,95％CI:1.775～8.251)、术后1个月miRNA-1(OR=1.605,95％ CI:1.070～2.408)、miRNA-208b(OR=1.719,95％ CI:1.058～2.796)、病变长度(OR=3.550,95％CI:1.666～7.565)、钙化病变(OR=1.876,95％CI:1.058～3.325)、钙化长度(OR=1.697,95％CI:1.236～2.332)、钙化弧度(OR=2.815,95％ CI.1.290～6.142)、浅表型钙化(OR=3.323,95％CI:1.661～6.651)均为PCI术预后再狭窄的危险因素(均P＜0.05).钙化特征评分以5.4为截断值时,诊断再狭窄的灵敏度为78.9％,特异度为75.5％,曲线下面积为0.811 (95％ CI:0.756～0.866);miRNA-1以0.32为截断值时,灵敏度为73.7％,特异度为78.9％,曲线下面积为0.785(95％CI:0.725～0.844);miRNA-208b以0.75为截断值时,诊断灵敏度为68.4％,特异度为80.4％,曲线下面积为0.715(95％CI:0.642～0.789);三者联合诊断再狭窄的灵敏度为89.5％,特异度为72.0％,曲线下面积为0.872(95％CI:0.835～0.909,P=0.000).结论:冠脉血管钙化以及术后早期血清miRNA-1、miR-208b水平与术后再狭窄密切相关,均为PCI术后再狭窄的独立危险因素,三者联合检测对术后再狭窄评估具有重要意义.

目的:探讨芒果苷减轻缺氧复氧所致人心肌细胞损伤的效应及机制.方法:将人心肌AC16细胞分为正常对照组、缺氧复氧组及芒果苷(50、100和200μmol/L)+缺氧复氧组.分别采用RT-qPCR及Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap-1)、Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9和超氧化物歧化酶2(SOD2)的mRNA及蛋白表达;Western blot法检测细胞核中核因子E2相关因子2(Nrf-2)的表达水平;RT-qPCR法检测miR-432-3p的表达;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡.结果:相对于正常对照组,缺氧复氧处理AC16细胞后,miR-432-3p和Keap-1的mRNA及蛋白表达无明显变化,Nrf-2核转位和ROS生成增多(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9的mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD2和Bcl-2的mRNA及蛋白水平以及细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡显著增多(P<0.05);相对于缺氧复氧组,芒果苷处理组miR-432-3p表达显著上调(P<0.05),ROS生成减少(P<0.05),Keap-1、Bax、caspase-3和caspase-9的mRNA及蛋白水平显著下降(P<0.05),Nrf-2核转位进一步增多(P<0.05),SOD2和Bcl-2的mRNA及蛋白水平以及细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡显著减少(P<0.05),中、高剂量组的效应明显优于低剂量组,中、高剂量组间的差异无统计学显著性.结论:芒果苷可抑制缺氧复氧损伤所造成的心肌细胞活力下降及细胞凋亡,其机制可能与其促进miR-432-3p表达,进而上调Nrf-2抗氧化应激效应有关.

目的 探究脊柱结核患者血清特异性循环miRNA表达水平及其临床意义.方法 选择2016年6月至2018年9月深圳市第三人民医院收治的50例脊柱结核患者作为观察组,选择同期在上述医院进行体检的50例健康志愿者作为对照组.分别提取其外周血血清中RNA,经miRNA基因芯片检测筛选出差异表达的miRNA,采用实时荧光定量PCR进行验证.比较两组受检者及观察组患者手术前后的miRNA表达水平.结果 经miRNA基因芯片初步筛选出17个差异表达的miRNA,其中16个表达下调,1个表达上调;经实时荧光定量PCR验证,hsa-miR-30c-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p的表达量显著下调,hsa-miR-210-3p的表达量显著上调;观察组患者术前的hsa-miR-30c-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p表达水平分别为1.48±0.45、1.67±0.32、1.84±0.43、1.49±0.35,明显低于对照组的11.35±3.08、4.72±1.13、5.29±1.49、4.11±1.28,hsa-miR-210-3p表达水平为3.92±1.34,明显高于对照组的1.28±0.31,组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);观察组患者术后1年的hsa-miR-30c-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p表达水平分别为10.31±2.29、4.01±1.22、4.69±1.17、3.52±0.87,明显高于术前的1.48±0.45、1.67±0.32、1.84±0.43、1.49±0.35,hsa-miR-210-3p表达水平为1.86±0.47,明显低于术前的3.92±1.34,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);hsa-miR-30c-5p在诊断脊柱结核上的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00％、96.00％、98.00％、96.15％和100.00％,明显高于hsa-miR-432-5p、hsa-miR-192-5p、hsa-miR-532-5p和hsa-miR-210-3p,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 脊柱结核患者的血清中存在特异性表达的循环miRNAs,其检测对于脊柱结核的临床诊断具有一定的临床参考价值.

目的 分析胆道闭锁患者肝组织中has-circ-0009096和has-circ-00083234的表达差异及其作用机制.方法 通过RT-qPCR检测了15例BA组及其对照组肝组织中has-circ-0009096和has-circ-00083234的表达水平;通过生物信息技术预测了能够与它们结合的miRNA及其下游靶基因,并进行KEGG信号通路富集分析以阐明BA的潜在发病机制.结果 has-circ-0009096在BA组中的相对表达水平高于CC组(P＜0.0001);has-circ-00083234在BA组中的表达水平下调(P=0.0037).通过circRNA预测的靶miRNA与BA相关的miRNA集相交,我们获得了4个miRNA(hsa-miR-145-5p,hsa-miR-222-3p,hsa-miR-221-3p和hsa-miR-432-5p).基于这2个circRNA和4个miRNA,建立了circRNA-miRNA调控网络.根据miRNA下游基因进行KEGG信号通路富集分析,发现了Hippo,TGF-β,Adherens junction,Focal adhesion,ECM-receptor interaction以及多能干细胞调节等多条信号通路可能与BA的发病机制相关.结论 has-circ-0009096和has—circ-00083234在BA肝组织中表达失调,并可能参与BA的疾病进展.因此,has-circ-0009096和has-circ-00083234可作为BA诊断的候选指标,而circRNA-miR通路的研究可能为探索BA的发病机制提供新的思路.

目的 探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本(LncRNA ZFAS)1通过靶基因微小RNA-432-5p(miR-432-5p)调控肺癌细胞增殖和侵袭迁移的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测不同肺癌细胞中Ln-cRNA ZFAS1、miR-432-5p的表达情况.双荧光素酶报告基因检测ZFAS1与miR-432-5p的相互作用.MTT实验检测抑制ZFAS1及miR-432-5p过表达后肺癌A549细胞增殖能力变化及抑制miR-432-5p的表达后肺癌A549细胞增殖能力的恢复情况.Transwell迁移及侵袭实验检测抑制ZFAS1及miR-432-5p过表达后A549细胞迁移及侵袭能力的变化及抑制miR-432-5p的表达后A549细胞迁移及侵袭能力的恢复情况.Western印迹实验检测细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达.结果 与BE-AS-2B细胞相比,不同肺癌细胞中ZFAS1表达水平明显升高,而miR-432-5p表达水平明显降低;双荧光素酶实验证实ZFAS1可调控miR-432-5p的表达与活性;抑制ZFAS1或上调miR-432-5p的表达后可降低A549细胞增殖、迁移及侵袭能力,CyclinE、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均明显降低;抑制miR-432-5p的表达后A549细胞增殖、迁移及侵袭能力相对增强.结论 ZFAS1可调控靶基因miR-432-5p的表达影响肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.