目的:探讨Circ_002770调控微小RNA(miR)-331-3p对黑色素瘤上皮-间充质转化(EMT)和侵袭的影响。方法:选取32例黑色素瘤患者的癌组织及癌旁组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测黑色素瘤组织和细胞中Circ_002770和miR-331-3p的表达水平；双荧光素酶报告实验检测miR-331-3p与Circ_002770之间的靶向关系；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测EMT程度；Transwell小室法检测细胞侵袭。组间差异采用单因素方差分析进行统计分析。结果:黑色素瘤组织(3.01±0.21)中Circ_00277的表达显著高于癌旁组织(1.00±0.06)，差异有统计学意义( t＝72.113， P<0.05)；MM细胞中Circ_00277的表达显著高于正常皮肤上皮细胞，差异有统计学意义( t＝98.021， P<0.05)。黑色素瘤组织(0.41±0.16)中miR-331-3p的表达显著低于癌旁组织(1.00±0.05)，差异有统计学意义( t＝36.892， P<0.05)；MM细胞中miR-331-3p的表达显著低于正常皮肤上皮细胞，差异有统计学意义( t＝187.239， P<0.05)。Circ_002770发挥分子海绵的作用抑制miR-331-3p表达；miR-331-3p与circ_002770野生型荧光载体共转染后A357细胞活性(0.46±0.21)显著低于对照组(1.00±0.23)，差异有统计学意义( t＝23.823， P<0.05)。而miR-331-3p与circ_002770突变型荧光载体共转染后A357细胞活性无明显变化(1.01±0.40比1.05±0.31)。低表达Circ_002770或过表达miR-331-3p均抑制黑色素瘤细胞的侵袭与EMT( P<0.05)。 结论:Circ_002770可吸附miR-331-3p促进黑色素瘤细胞的EMT和侵袭，进而影响黑色素瘤的进展。

目的:探讨环状RNA circLPAR1对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测2018年1月至2019年6月在河南省人民医院骨科接受治疗的40例骨肉瘤患者的肿瘤组织和对应的瘤旁组织环状RNA溶血磷脂酸受体(circLPAR1)的表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、集落形成实验、细胞迁移和侵袭实验来探讨circLPAR1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。此外，通过生物信息学分析、双荧光素酶报告实验和RNA下拉实验，以阐明circLPAR1在骨肉瘤细胞中的潜在分子机制。组间比较采用配对 t检验或独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，计数资料组间比较采用 χ2检验。 结果:骨肉瘤组织中circLPAR1的水平高于瘤旁组织(3.546±1.624比1.654±0.832， t＝19.734， P<0.01)，circLPAR1表达水平高与年龄和性别无明显相关( χ2＝3.194、0.530， P>0.05)，但与临床分期和远处转移有关( χ2＝6.328、9.337， P<0.05)，U-2OS和MG-63的si-circLPAR1组穿膜细胞数显著低于si-NC组(72.772±9.662、66.332±8.571比335.821±21.529、276.529±16.332， P<0.01)；qRT-PCR显示circLPAR1探针结合的RNA中具有显著的miR-647富集(U-2OS：7.132±0.568比1.133±0.141， t＝21.881， P<0.01；MG-63：7.524±1.813比1.532±0.015， t＝19.228， P<0.01)。野生型circLPAR1 WT与miR-647共转染组细胞的荧光素酶活性明显低于其他组(U-2OS：0.247±0.072比0.983±0.088、0.987±0.092、0.923±0.079， F＝63.228， P<0.01；MG-63：0.276±0.083比0.973±0.152、1.021±0.226、0.977±0.135， F＝58.335， P<0.01)；si-circLPAR1＋anti-miR-647组比si-circLPAR1组的集落细胞数(U-2OS：152.449±7.332比43.283±4.288， t＝－38.662， P<0.05；MG-63：192.344±8.668比71.223±12.384， t＝－32.891， P<0.05)、迁移细胞数(U-2OS：327.263±21.632比89.448±6.335， t＝21.836， P<0.05；MG-63：278.332±16.527比72.682±6.893， t＝19.772， P<0.05)及侵袭细胞数(U-2OS：341.883±11.392比67.663±7.421， t＝8.633， P<0.05；MG-63：325.823±10.284比62.739±8.883， t＝9.156， P<0.05)显著增高。 结论:circLPAR1通过吸附miR-647，从而促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。

目的:探讨长基因间非蛋白质编码核糖核酸01638(LINC01638)调控胶质瘤细胞增殖和凋亡机制。方法:U251胶质瘤细胞购自中国科学院细胞库。选择2017年1月至2019年1月兰州大学第一医院诊治的颅脑胶质瘤患者及颅脑血肿清除术患者为研究对象。将U251细胞根据转染基因分为si-NC组、si-LINC01638组、pcDNA组、pcDNA-LINC01638组、miR-NC组、miR-647 mimics组、si-LINC01638+anti-miR-NC组和si-LINC01638+anti-miR-647组。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC01638和微小核糖核酸647(miR-647)表达；细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测48 h细胞吸光度；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)及bcl-2相关X(bax)表达；双荧光素酶报告实验检测LINC01638和miR-647的靶向关系。两组间比较采用 t检验；多组间比较采用单因素方差分析(两组间比较用SNK- q检验)。 结果:胶质瘤组织中LINC01638表达显著高于正常脑组织(2.96±0.27比0.95±0.08)，miR-647表达显著低于正常脑组织(0.54±0.05比1.02±0.06)，差异有统计学意义( t＝31.921、27.485， P<0.05)。si-LINC01638组U251细胞LINC01638表达(0.49±0.03比0.97±0.07)、48 h细胞吸光度值(0.41±0.03比0.72±0.04)、Cyclin D1表达(0.24±0.02比0.69±0.04)显著低于si-NC组，p21表达(0.58±0.03比0.19±0.02)、细胞凋亡率[(22.63±3.18)%比(6.95±0.86)%]及bax表达(0.91±0.06比0.26±0.03)显著高于si-NC组，差异有统计学意义( t＝14.238、18.432、20.399、16.981、19.322、24.876， P<0.05)。miR-647与WT-LINC01638共转染后U251细胞荧光素酶活性显著降低，转染pcDNA-LINC01638后miR-647低表达，转染si-LINC01638后miR-647高表达( P<0.05)。miR-647 mimics组U251细胞miR-647表达(2.71±0.08比1.01±0.03)、细胞凋亡率[(20.60±2.14)%比(6.12±0.39)%]、p21(0.51±0.06比0.18±0.02)和bax(0.83±0.07比0.23±0.04)表达显著高于miR-NC组，48 h细胞吸光度值(0.45±0.07比0.63±0.09)、Cyclin D1(0.28±0.05比0.69±0.07)和bcl-2(0.29±0.03比0.81±0.08)表达显著低于miR-NC组，差异有统计学意义( t＝20.254、16.133、15.541、12.689、17.431、21.356， P<0.05)。si-LINC01638+anti-miR-647组U251细胞miR-647表达(0.62±0.05比1.01±0.06)、细胞凋亡率[(11.37±2.33)%比(22.43±3.41)%]、p21(0.28±0.06比0.59±0.08)和bax(0.39±0.05比0.87±0.09)表达显著低于si-LINC01638+anti-miR-NC组，48 h细胞吸光度值(0.58±0.06比0.32±0.03)、Cyclin D1(0.58±0.06比0.21±0.03)和bcl-2(0.63±0.07比0.25±0.04)表达显著高于si-LINC01638+anti-miR-NC组，差异有统计学意义( t＝13.133、12.087、19.287、11.303、16.765、18.433， P<0.05)。 结论:抑制LINC01638表达可抑制U251细胞增殖并促进凋亡，其机制可能与LINC01638上调miR-647有关。

目的:探究子宫颈癌组织中环状RNA（circRNA）的表达谱，并对差异表达的circRNA进行功能分析。方法:收集2021年2月至8月在郑州大学第二附属医院经病理检查确诊的15例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本。（1）采用circRNA高通量测序技术分析其中5例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中circRNA的表达谱差异；对显著差异表达circRNA的亲本基因作基因本体（GO）功能注释及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。（2）将本研究中circRNA高通量测序并筛选出的差异表达circRNA与从美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因表达综合（GEO）数据库下载的基因表达谱GSE102686数据集中筛选出的差异表达circRNA取交集，选择差异倍数最高的3个显著下调和3个显著上调共6个circRNA，即hsa_circ_0079480、hsa_circ_0005480、hsa_circ_0003162和hsa_circ_0084927、hsa_circ_0002151、hsa_circ_0001849，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术验证15例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中6个差异表达circRNA的表达。（3）选择6个差异表达circRNA中经过qRT-PCR技术验证的在子宫颈癌组织及其癌旁组织中表达水平有显著差异（ P<0.05）的circRNA进行下一步的功能研究（共有3个差异表达circRNA，即hsa_circ_0005480、hsa_circ_0003162和hsa_circ_0084927），构建小分子干扰RNA（siRNA），转染子宫颈癌细胞系SiHa和HeLa细胞以敲低其表达，实验分为4组，即hsa_circ_0005480敲低组、hsa_circ_0003162敲低组、hsa_circ_0084927敲低组和阴性对照（NC）组，采用活细胞计数（CCK-8）法检测4组SiHa和HeLa细胞的增殖能力。（4）通过Starbase、CircInteractome等数据库预测能够与hsa_circ_0005480、hsa_circ_0003162和hsa_circ_0084927结合的微小RNA（miRNA），构建竞争性内源性RNA（ceRNA）网络，即circRNA-miRNA网络。 结果:（1）高通量测序结果显示，5例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中共检测到26 280个circRNA，有1 421个差异表达的circRNA，其中表达上调774个，表达下调647个。GO功能注释及KEGG信号通路富集分析显示，差异表达circRNA主要富集于血管内皮生长因子（VEGF）、恶性肿瘤中的miRNA、铂类药物耐药性等信号通路。（2）qRT-PCR技术检测显示，hsa_circ_0005480（分别为0.54±0.31、1.03±0.27； t=4.647， P<0.001）和hsa_circ_0003162（分别为0.48±0.45、1.24±0.81； t=3.172， P=0.004）在子宫颈癌组织中的表达水平显著低于其癌旁组织，而hsa_circ_0084927在子宫颈癌组织中的表达水平显著高于其癌旁组织（分别为2.34±0.90、1.11±0.54； t=-4.507， P<0.001）。（3）与NC组细胞（包括SiHa和HeLa细胞）相比，hsa_circ_0005480敲低组细胞的增殖能力显著增强，而hsa_circ_0003162敲低组和hsa_circ_0084927敲低组细胞的增殖能力显著减弱（ P均<0.01）。（4）ceRNA网络的构建结果：hsa_circ_0005480可与hsa-miR-224-3p、hsa-miR-522-3p等8个miRNA相互作用；hsa_circ_0003162可与hsa-miR-485-3p、hsa-miR-1243和hsa-miR-1279相互作用；hsa_circ_0084927可与hsa-miR-874-3p、hsa-miR-367-5p等9个miRNA相互作用。 结论:本研究初步阐明了子宫颈癌组织中circRNA的表达谱，对差异表达的circRNA进行验证和功能研究，并构建ceRNA网络，为研究子宫颈癌的发生、发展及治疗靶点提供依据。

目的 探讨前列腺癌组织中微小RNA-647(miR-647)、微小RNA-122(miR-122)、组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)与其临床病理特征及预后的相关性.方法 选取100 例前列腺癌患者作为研究对象,均于术中采集肿瘤组织及癌旁正常组织标本送检,统计肿瘤组织及癌旁正常组织内miR-647、miR-122、KMT2D表达水平差异;分析miR-647、miR-122、KMT2D表达与肿瘤分期、肿瘤直径、淋巴结转移、微血管侵犯等的关系;并随访 2 年,比较复发转移与未复发转移患者miR-647、miR-122、KMT2D表达间差异.结果 肿瘤组织内miR-647 表达水平为(0.62±0.13),低于癌旁正常组织的(1.02±0.19),miR-122、KMT2D表达水平为(6.45±1.24)、(1.45±0.23),低于对照组的(1.23±0.22)、(0.89±0.12)(P<0.05);肿瘤分期Ⅲ期、肿瘤直径≥3 cm、有淋巴结转移及有微血管侵犯患者miR-647 表达水平低于肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者,miR-122、KMT2D表达水平高于肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者(P<0.05);100 例患者术后随访 2 年,共出现 24 例复发转移,复发转移率为24.00%(24/100);复发转移患者miR-647 表达水平为(0.51±0.11),低于未复发转移患者的(0.73±0.15),miR-122、KMT2D表达水平为(8.42±1.39)、(1.89±0.32),高于未复发转移患者的(4.68±1.02)、(1.12±0.15)(P<0.05).结论 前列腺癌组织内miR-647、miR-122、KMT2D存在不同程度表达,均与肿瘤分期、肿瘤直径及淋巴结转移等关系密切,且可明显影响患者预后,还需临床高度重视.

目的:筛选急性缺血性中风阴类证、阳类证患者血清的差异表达长链非编码核糖核酸(lncRNA),微小RNA(miRNA),信使RNA(mRNA),获取基因间调控关系,从转录组学层面探讨急性缺血性中风阴类证、阳类证形成的物质基础与生物学机制.方法:使用lncRNA,mRNA及miRNA芯片微阵列,分别检测急性缺血性中风阴类证、阳类证与非中风受试者(各10例)血清中lncRNA,miRNA与mRNA的表达情况,通过联合分析,筛选出阴类证、阳类证相关的差异表达谱.对获得的差异基因进行反义lncRNA与mRNA共表达分析、基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能通路分析,获取基因间调控关系,预测lncRNA的靶基因.对40例(阳类证10例,阴类证30例)样本中部分差异基因进行实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证.结果:227个lncRNA,54个mRNA,4个miRNA的表达与阳类证密切相关,394个lncRNA,206个mRNA的表达和阴类证密切相关.阳类证组中反义lncRNA RP11-647P12.1和RP11-677M14.2可能通过上调表达水平,分别调控神经元衍生神经营养因子(NDNF)和神经颗粒素(NRGN)的基因表达.通路富集显示,阴类证、阳类证之间转录组表达谱差异主要与血压调节、神经递质受体活性调节、内分泌激素调节、炎症反应、肾素-血管紧张素系统等通路相关.结论:急性缺血性中风阴类证、阳类证的lncRNA,miRNA,mRNA表达谱存在差异,阴、阳类证的表型差异可能由血压调节、肾上腺素能受体调节、肾素-血管紧张素系统以及γ-氨基丁酸(GABA)等多个通路的共同参与.转录组学特征为研究急性缺血性中风阴类证、阳类证的生物学基础提供了一定的科学依据.

目的 探讨微小RNA-592(miR-592)对Janus激酶1( JAK1)表达的靶向调控作用及非小细胞肺癌( NSCLC)细胞迁移和侵袭的影响.方法 采用实时定量PCR(QPCR)检测NSCLC细胞系A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B的miR-592水平.经脂质体Lipofectamine 2000法向A549细胞转染miR-592模拟物(过表达组)和阴性对照(NC组)后采用QPCR检测miR-592水平,划痕实验和Transwell小室实验分别检测划痕愈合率和穿膜细胞数以评价迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-592对JAK1的靶向调控作用,Western blotting检测JAK1、磷酸化JAK1( p-JAK1)、磷酸化信号转导和转录激活因子3( p-STAT3)和基质金属蛋白酶-9( MMP-9)的蛋白水平.结果 QPCR 结果显示 A549 细胞的 miR-592 水平为0. 312±0. 097,低于BEAS-2B细胞的1. 062±0. 136(P＜0. 05);过表达组的miR-592相对表达量为6. 647±1. 847,高于NC组的1. 054±0. 168(P＜0. 05).过表达组的愈合率和穿膜细胞数分别为(27. 45±2. 51)%和(105. 2±15. 8)个,均低于NC组的(54. 45 ±3. 06)%和(312. 4±19. 2)个,差异有统计学意义(P＜0. 05). A549细胞中miR-592模拟物可抑制JAK1野生型3′非翻译区的相对荧光素酶活性,但对突变型JAK1的无影响.与NC组相比,过表达组的JAK1、p-JAK1、p-STAT3和MMP-9蛋白水平均下调(P＜0. 05).结论 miR-592负调控NSCLC细胞侵袭和迁移,可能与抑制JAK／STAT3信号通路活性有关,提示miR-592发挥抑癌作用且可能是NSCLC治疗的潜在靶标.

目的 肺癌发生和发展是一个多基因参与、长时间演变的复杂过程.因此有必要对肺癌分子机制进行系统研究.本研究采用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库分析肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)中差异表达的长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA)、信使RNA (messenger RNA,mRNA)和微小RNA (microRNA,miRNA),构建基因间调控网络,并进一步筛选和分析与患者生存预后相关的RNA分子,为肺腺癌分子标志物及治疗靶点的发掘提供依据.方法 TCGA数据库获得535例肺腺癌样本和59例正常肺组织样本的RNA测序(RNAsequencing,RNA-Seq)数据,521例肺腺癌样本和46例正常肺组织样本的miRNA-seq数据以及522例肺腺癌患者临床信息进行分析.使用R语言中的“DESeq”鉴定差异表达RNA.通过miRcode数据库预测差异表达的lncRNA和miR-NA之间的相互作用,并根据TargetScan、miRTarBase和miRDB数据库进一步检索miRNA靶向的mRNA.基于RNA间的相互作用构建lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA网络.使用DAVID 6.8和R语言中的“clusterprofiler”对网络中mRNA基因功能和信号通路进行富集分析.采用Kaplan-Meier生存分析差异表达的RNA与肺腺癌患者生存预后的关联性.采用多因素Cox风险回归筛选出影响肺腺癌患者总体生存率的独立RNA分子.结果 数据分析结果表明共有lncRNA 1 647个、miRNA 120个和mRNA 2 503个在肺腺癌中差异表达,差异倍数＞2,P＜0.01.经RNA间相互作用分析结果表明这些差异表达的RNA中有lncRNA 138个,miRNA 22个和mRNA 36个参与了ceRNA网络构建.36个mRNA主要富集于11个生物学进程和5个细胞信号通路中,P＜0.05.Kaplan-Meier生存分析表明,LINC00518 (P＜0.001)、AP002478.1(P=0.011)等31个LncRNA;CCNB1 (P＜0.001)、CHEK1 (P=0.005)等16个mRNA以及1个miRNA hsa-mir-31 (P=0.021)与肺腺癌患者总体生存率有关联.多因素Cox回归分析结果表明,患者TNM分期,LINC00221、UCA1、STEAP2-AS1、LINC00518、E2F7、DLC1、CCNE2和SALL1可作为肺腺癌患者预后的独立危险因素(HR＞1,P＜0.05),而MED4-AS1和CLSPN可作为肺腺癌患者预后保护因素(HR＜1,P＜0.05).结论 根据肺腺癌中差异表达的RNA成功构建了ceRNA调控网络,有助于进一步探索肺腺癌发生发展分子机制.同时,对网络中RNA的生物学功能进行了初步分析并筛选出影响肺腺癌患者生存预后的风险因子,有望为肺腺癌患者诊断和预后提供新的生物标志物.

目的:探讨血清微小RNA(miRNA)-647、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)与急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后支架内再狭窄的关系.方法:209例ACS患者,根据PCI术后1年是否发生支架内再狭窄为再狭窄组(n=45)和无再狭窄组(n=164),qPCR和ELISA检测血清miR-647,PTEN水平.Pearson相关性分析ACS患者血清miR-647与PTEN水平的相关性.多因素Logistic回归分析ACS患者PCI术后支架内再狭窄影响因素,ROC曲线分析血清miR-647,PTEN水平对ACS患者PCI术后支架内再狭窄的预测价值.结果:与无再狭窄组比较,再狭窄组miR-647水平升高,PTEN水平降低(P<0.05).ACS患者血清miR-647与PTEN水平呈负相关(r=-0.701,P<0.001).支架内径、Gensini积分、PTEN为PCI术后支架内再狭窄独立保护因素,miR-647为独立危险因素(P<0.05).血清miR-647,PTEN水平最佳截断值分别为0.91,2.53ng/mL时,单独及联合预测PCI术后支架内再狭窄的AUC分别为0.768,0.790,0.866,敏感度分别为66.67％,64.44％,77.78％,特异度分别为72.56％,81.10％,83.54％.miR-647+PTEN预测ACS患者PCI术后支架内再狭窄的AUC大于miR-647,PTEN单独预测(P<0.05).结论:PCI术后支架内再狭窄ACS患者血清miR-647水平升高,PTEN水平降低,二者可能共同参与支架内再狭窄,可作为支架内再狭窄预测指标.

目的:明确风湿性二尖瓣疾病合并心房颤动(房颤)患者心房组织的主要病理变化,生物信息学分析并筛选与风湿性二尖瓣疾病房颤患者心房纤维化相关的微小RNA(miRNA)及其靶基因.方法:收集在西安交通大学第一附属医院行心脏外科手术治疗的30例风湿性二尖瓣疾病患者(窦性心律组10例,房颤组20例)的临床资料及心房样本.苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组织化学染色后观察心房组织病理变化;实时定量聚合酶链反应及Western blot法检测纤维化相关蛋白和通路在心房组织中的表达;生物信息学分析并筛选出与风湿性二尖瓣疾病房颤发病机制相关的miR-647及其预测靶基因PRKCA;进一步应用双荧光素酶报告基因确定miR-647的靶基因为PRKCA.结果:相较于窦性心律组患者,房颤组患者左房组织具有典型的心房肌肥大、间质纤维化、心房肌细胞坏死等病理改变;房颤组患者左房纤维化蛋白及通路表达水平显著高于窦性心律组(P均＜0.05);生物信息学筛选出风湿性二尖瓣疾病房颤相关miR-647及其纤维化相关的下游靶基因PRKCA;房颤组左房组织中miR-647明显下调,PRKCA表达则明显升高(P均＜0.05);双荧光素酶报告基因实验验证miR-647对靶基因PRKCA具有明显的抑制作用(P＜0.05).结论:miR-647靶向作用于PRKCA基因,与风湿性二尖瓣疾病房颤患者的心房纤维化有关.