目的:探讨微小RNA-940(miR-940)对迁移和侵袭增强因子1(MIEN1)的作用，对人骨肉瘤细胞MG63的迁移和侵袭等能力的影响。方法:根据对MG63(武汉大学中南医院医学科学研究中心)的转染处理，将其分为miR-940模拟物(mimics)组、控制(control)对照组、miR-940抑制剂(inhibitor)组和空白(Blank)对照组。分析武汉大学中南医院骨科通过手术切除的12例骨肉瘤病理组织，采用世界卫生组织(WHO)病理分级标准进行良恶性分级，Ⅰ级5例，Ⅱ级3例，Ⅲ级4例。采用免疫组织化学分析MIEN1与肿瘤恶性程度的相关性。体外培养人骨肉瘤细胞MG63及正常成骨细胞hFOB1.19，实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-940及MIEN1表达水平，蛋白质印迹法(Western blot)检验MIEN1蛋白表达。对MG63细胞分组转染miR-940模拟物(mimics)、控制(control)对照、抑制剂(inhibitor)和空白对照，48 h后采用实时荧光定量PCR检验miR-940，Western blot检验MIEN1蛋白表达。划痕实验评估转染后细胞的迁移能力。Transwell侵袭实验评价转染后细胞的侵袭能力。采用两样本 t检验，多样本方差分析，Pearson相关性分析。 结果:MIEN1在不同恶性程度的骨肉瘤中的表达水平，与恶性程度呈正相关( r＝0.832， P<0.05)。骨肉瘤细胞MG63比正常成骨细胞的miR-940表达水平更低(4.37±0.61比12.41±1.05)，差异有统计学意义( t＝11.464， P<0.01)，而MIEN1表达水平更高(21.01±1.01比5.49±0.38)，差异有统计学意义( t＝-24.954， P<0.01)，Western blot结果显示miR-940与MIEN1的表达水平呈负相关( r＝-0.914， P<0.01)。转染后，模拟物组miR-940水平高于控制对照及空白对照组，而抑制剂组则低于对照组(51.16±4.27比4.19±0.47比4.36±0.29比1.18±0.15)，差异有统计学意义( F＝372.327， P<0.01)，Western blot结果表明MIEN1的蛋白表达水平为模拟物组比对照组表达降低77.89%( t＝3.174， P<0.05)，而抑制剂组比对照组表达增高141.78%( t＝-4.318， P<0.05)。划痕实验证实迁移能力miR-940模拟物组低于控制对照和空白对照组，而抑制剂组则高于对照组(27.48±0.28比51.05±2.65比50.86±0.88比74.58±1.00)，差异有统计学意义( F＝1252.615， P<0.01)。在MG63细胞侵袭能力方面，miR-940模拟物组能力相较于控制对照和空白对照组降低，而抑制剂组高于对照组(58.20±5.26比79.40±6.19比79.80±5.36比101.40±6.07)，差异有统计学意义( F＝47.313， P<0.05)。 结论:MIEN1与骨肉瘤的恶性程度呈现正相关，miR-940在转录后，调控MIEN1表达水平，抑制骨肉瘤细胞MG63的迁移和侵袭。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) LINC01234对前列腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其分子机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测收集2017年5月至2018年7月郑州大学第一附属医院收治的20例前列腺癌患者的前列腺癌组织及癌旁组织中LINC01234、微小RNA(miRNA，miR)-940的表达水平。分别将LINC01234小干扰RNA(si-LINC01234)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、微小RNA-940模拟物(miR-940 mimics)、阴性对照基因(miR-NC)、si-LINC01234＋阴性对照(anti-miR-NC)、si-LINC01234＋微小RNA 940特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-940)转染至DU145细胞。分别记作si-NC、si-LINC01234、miR-NC、miR-940、si-LINC01234＋anti-miR-NC、si-LINC01234＋anti-miR-940组。噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活性；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；Transwell法检测各组细胞的迁移及侵袭；双荧光素酶报告实验验证LINC01234与miR-940的靶向关系。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:LINC01234在前列腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(1.00±0.08比2.61±0.25， t＝27.430， P<0.05)，miR-940在前列腺癌组织中的表达水平低于癌旁组织(1.00±0.09比0.56±0.05， t＝19.112， P<0.05)，差异有统计学意义；转染si-LINC01234、miR-940 mimics后细胞活力显著降低(1.29±0.11比0.71±0.06；1.24±0.09比0.79±0.07， t＝13.886， P<0.05)，迁移细胞数[(84.36±8.12)个比(39.41±4.22)个；(86.25±8.14)个比(44.37±4.48)个]与侵袭细胞数[(67.25±6.74)个比(28.44±3.58)个；(69.48±6.25)个比(33.47±4.18)个]显著减少( t＝14.735、15.309， P<0.05)，细胞凋亡率[(6.58±0.61)%比(20.36±2.14)%；(7.11±0.71)%比(18.26±1.36)%]显著升高( t＝18.577， P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实miR-940过表达可抑制野生型(WT)-LINC01234细胞的荧光活性，LINC01234可负向调控miR-940的表达( t＝328.298， P<0.05)，差异有统计学意义；干扰miR-940表达可逆转抑制LINC01234表达对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其对凋亡的促进作用。 结论:lncRNA LINC01234可能通过靶向miR-940促进前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭，抑制细胞凋亡。

目的:探讨神经肽P物质(substance P，SP)活化NK92-MI细胞脱颗粒作用，分析差异表达circRNA调控NK92-MI细胞可能的机制。方法:将培养后的NK92-MI细胞分为空白对照组、SP刺激组和NK-1受体拮抗剂(neurokinin-1 receptor antagonist，NK-1RA)组。荧光定量PCR(real-time quantification PCR，qRT-PCR)法检测并分析NK92-MI细胞经SP刺激后穿孔素mRNA表达的时间效应，流式细胞术检测NK92-MI细胞脱颗粒标志物CD107a的表达，高通量测序技术分析circRNA表达谱，qRT-PCR法验证差异倍数最大的circZNF609和circAMBRA1的表达。生物信息学分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的微小RNA(microRNA，miRNA)，并分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA表达的相关性。结果:刺激12 h后，SP刺激组穿孔素mRNA表达较对照组升高约2.06倍，刺激24 h后，穿孔素mRNA表达继续升高，约为对照组3.65倍，差异均具有统计学意义( t值分别为4.00、4.72， P值均<0.05)；在12 h时，NK-1RA组穿孔素mRNA的表达高于对照组，差异具有统计学意义( t＝2.39， P<0.05)，但在24 h时，与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。与静息NK92-MI细胞组相比，K562刺激组、K562+SP组、K562+SP+NK-1RA组中NK92-MI细胞CD107a的表达显著升高{(0.81±0.38)%比[(9.59±2.52)%，(17.78±1.94)%，(10.19±2.04)%]， t值分别为6.27、12.19、7.83， P值均<0.05}。SP作用NK92-MI细胞后共有9个差异表达的circRNAs：circZNF609、circAMBRA1、circCAMSAP1、circAAGAB、circLMBR1、circGNB1、circBPTF、circGPI和circCSNK1G3。NK-1RA可以阻断除circCSNK1G3外的上述8个circRNAs的表达。qRT-PCR验证circZNF609和circAMBRA1的表达与测序结果一致。生物信息学预测，circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的miRNAs为miR-149-5p、miR-940和miR-942-5p。circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA的表达均呈负相关( r值分别为-0.57、-0.74， P值均<0.05)。 结论:SP可以通过与NK-1R结合活化NK92-MI细胞，下调circZNF609和circAMBRA1的表达，上调穿孔素mRNA的表达，促进NK92-MI细胞脱颗粒增强其杀伤功能。

目的 探讨急性脑梗死患者血清微小RNA(miR)-210 和miR-940 的表达水平及其临床意义.方法 选取绵阳市中心医院 2021 年 9 月—2022 年 9 月收治的 80 例急性脑梗死患者作为本研究的研究组,依据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分标准分为重型患者(15 例)、中型患者(35 例)、轻型患者(30 例),并以同期体检正常的 50 例健康人员作为对照组,收集各组一般资料,采用qRT-PCR法检测各组血清miR-210 和miR-940 水平;ROC曲线分析血清miR-210 和miR-940 水平对急性脑梗死的诊断价值;Pearson法分析急性脑梗死患者血清中miR-210 和miR-940 水平的相关性;Logistics回归分析影响NIHSS评分升高的因素.结果 在糖尿病、收缩压及舒张压的比较中,对照组及研究组具有统计学差异(P＜0.05),但在年龄、性别、总胆固醇、甘油三酯以及吸烟史、饮酒史的比较中均无统计学差异(P>0.05);与对照组相比,研究组患者血清中miR-210 和miR-940 水平显著下降(P＜0.05);与轻度急性脑梗死患者相比,重度、中度患者血清中miR-210、miR-940 水平显著下降;与中度急性脑梗死患者相比,重度患者血清中miR-210、miR-940 水平显著下降(P＜0.05);Pearson法分析显示miR-210 和miR-940 水平呈正相关.血清miR-210 与miR-940 水平以及二者联合诊断急性脑梗死患者的敏感度分别为 88.75%、82.50%、80.00%,特异度分别为 68.00%、80.00%、92.00%,曲线下面积分别为 0.830、0.881、0.926.Logistics回归分析显示血清miR-210、miR-940 水平为NIHSS评分升高的独立危险因素(P＜0.05).结论 急性脑梗死患者血清中miR-210、miR-940 水平显著下降,与患者病情程度有关,二者表达呈正相关,对急性脑梗死具有一定的诊断价值,二者联合诊断效能更佳.

目的 探讨外泌体miR-940在前列腺癌(PCa)骨转移中的作用.方法 采集2017年6月在温州医科大学附属第一医院就诊的3例正常老年男性及3例PCa骨转移患者的血清标本,采用RT-PCR法检测血清外泌体中微小RNA(miRNA)表达并绘制miRNA谱.培养PCa细胞株PC-3及正常前列腺上皮细胞株RWPE-1,提取并鉴定细胞外泌体;采用RT-PCR法检测细胞外泌体中miR-940表达.PC-3细胞经转染后与人骨髓间充质干细胞(hMSC)共培养48 h,采用RT-PCR法检测成骨细胞分化相关基因表达,Von Kossa染色法检测矿化面积占比.结果 与正常老年男性比较,PCa骨转移患者血清外泌体中多个miRNA表达明显升高,其中miR-940尤为明显.在电镜下,PC-3细胞外泌体呈40～100 nm的盘状囊泡,外泌体标志性蛋白VDAC、CD63、Hsp70、CD81表达均明显上调.PC-3细胞外泌体中miR-940表达明显高于RWPE-1细胞外泌体(P<0.05).在PCa-hMSC共培养体系中,miR-940过表达组ALP、骨钙素(BGLAP)基因表达及矿化面积占比较miR-940敲减组、空白对照组均明显降低(均P<0.05).结论 外泌体miR-940可以有效抑制PCa-hMSC成骨分化,这为转移性PCa个体化治疗提供了新的靶点.

目的 探究miR-940、miR-365在急性脑梗死患者血清中的表达水平及预测价值.方法 收集2018年1-11月在郑州大学附属洛阳中心医院治疗的72例急性脑梗死患者(脑梗死组)作为研究对象,另选取同期体检的84名健康者为对照组,脑梗死患者人院后对梗死面积及神经功能缺损情况进行评定,实时荧光定量PCR法检测血清中miR-940、miR-365表达,分析其与临床参数的关系,采用Pearson相关性分析miR-940、miR-365与神经功能缺损评分——美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分的相关性,logistic回归分析影响急性脑梗死发生的危险因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-940、miR-365对急性脑梗死的诊断价值.结果 脑梗死组吸烟人数、收缩压、舒张压均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).脑梗死组血清中miR-940表达低于对照组,miR-365表达高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-940、miR-365表达与年龄、性别、舒张压、收缩压无关(P＞0.05),与梗死面积、神经缺损程度相关(x2=11.726、12.109,7.858、9.784;P=0.003、0.002、0.020、0.008).miR-940与 NIHSS评分成显著负相关(r=-0.564,P＜0.05),miR-365 与 NIHSS 评分成显著正相关(r=0.497,P＜0.05).miR-940、miR-365 是影响急性脑梗死发生的危险因素(P＜0.05).ROC分析miR-940对急性脑梗死诊断的曲线下面积(AUC)为0.813(95％CI:0.743～0.871),miR-365对急性脑梗死诊断的AUC为0.837(95％CI:0.769～0.891).结论 miR-940在急性脑梗死患者血清中表达降低,miR-365表达升高,两者是影响脑梗死发生的危险因素,且对急性脑梗死具有一定的诊断价值.

本研究旨在探讨新疆哈萨克族原发性高血压患者和健康者外周血淋巴细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)差异表达谱,为高血压的发生机制研究提供理论基础.将2016年4月至2019年5月新疆石河子大学医学院第一附属医院心内科住院部及门诊就诊的30例哈萨克族原发性高血压患者作为高血压组,将30例哈萨克族健康者作为对照组.比较6个哈萨克族高血压患者与6个配对的正常血压者外周血淋巴细胞中miRNA表达谱,对差异表达的miRNA进行聚类、GSEA富集、靶基因预测和靶基因注释等生物信息学分析,并进行qRT-PCR验证.结果显示,与对照组相比,高血压组筛选出73个差异表达miRNA,其中39个miRNA表达上调,34个miRNA表达下调;通过GSEA富集分析共筛选出11个与高血压相关的miRNA,分别是hsa-miR-100-5p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-299-5p、hsa-miR-299-3p、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-196b-5p、hsa-miR-503-5p、hsa-miR-628-5p、hsa-miR-874-3p、hsa-miR-543、hsa-miR-940.通过qRT-PCR检验发现,与对照组相比,高血压组hsa-miR-100-5p、hsa-miR-299-5p、hsa-miR-299-3p、hsa-miR-196b-5p,hsa-miR-503-5p、hsa-miR-628-5p、hsa-miR-543表达上调,hsa-miR-150-5p,hsa-miR-296-5p,hsa-miR-874-3p、hsa-miR-940表达下调.基因芯片中的表达趋势和qRT-PCR验证结果一致.利用在线数据库对11个与高血压相关的miRNA进行预测,共预测出1 647个靶基因;GO功能富集分析显示,在生物过程方面,高血压相关靶基因主要与神经系统发育、细胞定位、细胞代谢过程的调节、神经元的产生以及生物过程的正调控等方面相关;在细胞组成方面,主要与膜界细胞器、细胞质、细胞内膜结合的细胞器、突触部分、神经元部分、核质等相关;在分子功能方面,主要与蛋白质结合、转录调控区DNA结合、RNA聚合酶Ⅱ调节区DNA结合、转录调节活性、离子结合等方面相关;KEGG富集分析显示p53信号通路、心肌细胞中的肾上腺素能信号、cAMP信号通路、内分泌和其他因子调节的钙重吸收、mTOR信号通路、醛固酮调节的钠重吸收、TGF-β信号通路可能与高血压的发生和发展相关.以上结果提示,哈萨克族原发性高血压患者与健康者外周血淋巴细胞中miRNA表达存在差异,筛选出的miRNA可能与哈萨克族原发性高血压的发生和发展相关,其在高血压中的作用机制有待进一步探索验证.