目的 观察芪参还五胶囊改善吡柔比星致小鼠急性心肌损伤并探寻其作用机制.方法 12周龄雄性C57BU6小鼠30只,随机分为对照组、模型组及芪参低、中、高剂量组.通过吡柔比星造模,取材前称量体重并通过心脏超声检测左心室结构和功能,ELISA检测血清心肌肌钙蛋白(cTnI)和氨基端前脑钠素(NT-proBNP)含量;HE染色评价小鼠心肌组织形态学改变;RT-qPCR检测心肌组织中焦亡相关基因NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase1)和坏死性凋亡相关基因白细胞介素-1α(IL-1α)、白细胞介素-33(IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的mRNA水平;Weston blotting检测焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Cleaved-Caspase1和坏死性凋亡相关蛋白磷酸化混合谱系激酶样蛋白(MLKL)、磷酸化受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)、HMGB1水平.结果 与对照组相比,模型组小鼠精神状态萎靡,体重下降(P＜0.05),射血分数(LVEF)下降(P＜0.05),血清cTnI和NT-proBNP水平升高(P＜0.05),心肌损伤评分升高(P＜0.05),坏死性凋亡相关基因和蛋白水平均有升高(P＜0.05);与模型组相比,芪参还五胶囊可以改善小鼠精神状态,增加体重(P＜0.05),升高LVEF(P＜0.05),降低血清中cTnI和NT-proBNP水平,改善心肌损伤(P＜0.05),降低坏死性凋亡相关基因及蛋白表达(P＜0.05);5组间焦亡相关基因及蛋白表达无明显差异(P＞0.05).结论 芪参还五胶囊可以改善吡柔比星造成的小鼠急性心肌损伤,其机制可能与抑制心肌细胞坏死性凋亡有关.

目的 探讨微小RNA(miR)-19b对冠心病大鼠血管内皮细胞损伤的影响及磷酸酶及张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路的作用.方法 选取72只大鼠随机分为正常组、模型组、模拟对照物(NC)组、miR-19b组、miR-19b+质粒互补DNA(pcDNA)3.1组、miR-19b+PTEN组.采用高脂饲料+垂体后叶素建立冠心病模型,尾静脉注射miR-19b mimic、pcDNA3.1-PTEN慢病毒液构建miR-19b、PTEN过表达大鼠.采用荧光定量聚合酶链反应检测冠状动脉组织miR-19b和PTEN信使RNA(mRNA)水平,测定大鼠心功能,观察大鼠冠状动脉病理变化,检测心肌组织细胞凋亡情况、血管内皮功能、冠状动脉中PTEN/PI3K/AKT信号通路、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase)-3、cleaved Caspase-9水平.分离培养冠心病大鼠冠状动脉内皮细胞,根据转染方式分为野生型质粒(WT)+NC组、WT+miR-19b mimic组、突变型质粒(MUT)+NC组、MUT+miR-19b mimic组,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-19b与PTEN的靶向关系.将冠心病大鼠冠状动脉内皮细胞分为正常细胞组、NC细胞组和miR-19b细胞组,检测PTEN mRNA和PTEN蛋白水平.结果 miR-19b组左心室射血分数(LVEF)、miR-19b、血清血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)/PI3K蛋白、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/AKT蛋白水平高于模型组,左心室收缩末期容积(LVESV)、舒张末期容积(LVEDV)、细胞凋亡率、cleaved Caspase-3 和 cleaved Caspase-9、PTEN mRNA、内皮素-1(ET-1)、PTEN 蛋白水平低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-19b+PTEN 组 LVESV、LVEDV、细胞凋亡率、PTEN mRNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、ET-1、VEGF、PTEN 蛋白水平高于 miR-19b 组,LVEF、NO、p-PI3K/PI3K 蛋白和p-AKT/AKT蛋白水平低于miR-19b组,差异均 有统计 学意义(P＜0.05).模型组LVEF、miR-19b、VEGF、NO、p-PI3K/PI3K蛋白、p-AKT/AKT蛋白水平低于正常组,LVESV和LVEDV、细胞凋亡率、PTEN mRNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、ET-1、PTEN蛋白水平高于正常组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与正常组比较,模型组大鼠冠状动脉内皮细胞排列紊乱,并伴有明显的水肿.与模型组比较,miR-19b组冠状动脉组织病理损伤明显减轻.WT+miR-19b mimic组细胞中荧光素酶相对活性低于 WT+NC组、MUT+NC 组、MUT+miR-19b mimic 组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-19b mimic 细胞组 PTEN mRNA和PTEN蛋白水平低于正常细胞组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-19b靶向抑制PTEN,激活PI3K/AKT信号通路,保护冠心病大鼠心功能和血管内皮功能,减少心肌细胞凋亡.

目的:研究花椒提取物羟基-α-山椒素对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠和过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)氧化损伤的保护作用及可能机制.方法:36只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸地尔硫卓20 mg/kg、羟基-α-山椒素5、10和20 mg/kg组.各组大鼠连续给药14 d,在13、14 d腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)40 mg/kg造成心肌缺血模型,超声心动图检查评估各组大鼠心功能;试剂盒检测血清丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和IL-6含量;实时荧光定量qRT-PCR法检测心肌组织Tnfa、Il1和Il6 mRNA表达;苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理改变.体外培养H9c2细胞,用H2O2600 μmol/L处理H9c2细胞6 h构建氧化损伤体外细胞模型,随机分为正常对照组、模型对照组、羟基-α-山椒素2.5、5、10 μg/mL组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选羟基-α-山椒素最佳给药浓度;采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观测细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)浓度;ELISA法检测MDA、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和SOD含量或活力;蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(BAX)、血红素氧合酶1(HO-1)、切割胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase3)和B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)蛋白表达水平.结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和射血分数(LVEF)显著降低(P＜0.01),血清MDA、cTnl、LDH、CK-MB含量或活力显著升高(P＜0.01),GSH、SOD活力显著降低(P＜0.01),心肌组织中Il1b、Il6及Tnfa mRNA表达明显上调(P＜0.05);与模型对照组相比,羟基-α-山椒素各剂量组LVFS和LVEF明显升高(P＜0.05),羟基-α-山椒素20 mg/kg组MDA、cTnl、LDH、CK-MB含量或活力明显降低(P＜0.05),GSH、SOD活力明显升高(P＜0.05或P＜0.01),心肌组织中Il1b、Il6及Tnfa mRNA表达明显下调(P＜0.05),羟基-α-山椒素各剂量组心肌组织损伤减轻,心肌细胞胶原沉积减少.与正常对照组比较,H2O2模型对照组H9c2细胞活力、线粒体膜电位降低,细胞凋亡率、ROS水平、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,GSH-Px、SOD活力降低(P＜0.01),经羟基-α-山椒素预处理后,H9c2细胞活力显著升高、线粒体膜电位升高,羟基-α-山椒素5、10 μg/mL组细胞凋亡率、ROS浓度、MDA、IL-1β、IL-6含量降低,GSH-Px、SOD活力显著升高(P＜0.01),羟基-α-山椒素10 μg/mL组细胞TNF-α含量显著降低(P＜0.01),羟基-α-山椒素处理H9c2细胞后Nrf2(核内)、HO-1、BCL-2蛋白表达上调,Nrf2(核外)、BAX、Cleaved-caspase3蛋白表达下调(P＜0.01).结论:羟基-α-山椒素可改善ISO所致心肌缺血大鼠的心功能、心肌损伤及纤维化程度,保护H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤,改善H9c2细胞凋亡,其作用机制可能与抑制氧化应激反应和炎症因子释放,激活Nrf2/HO-1信号通路有关.

目的 探讨可溶性生长刺激表达基因 2 蛋白(sST2)对缺血性心肌病(ICM)大鼠心室重塑的调控作用.方法 采用左侧冠状动脉结扎法建立ICM大鼠模型,随机分为模型组(15 只)、空载体组(15 只)及用药组(15 只),另设假手术组(15 只);空载体组皮下注射 1 mL空载腺病毒,用药组皮下注射1mL腺病毒sST2载体诱导sST2过表达,模型组及假手术组皮下注射等量生理盐水,所有大鼠连续给药 2 d后正常饲养 1 周.所有大鼠均在末次给药后 1 周通过超声心动图检查心室重塑指标[左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)、室间隔舒张末期厚度(IVSd)],并检测血清sST2、心肌损伤标志物[心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]及炎症指标[白细胞介素(IL)-33、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,同时通过苏木精-伊红(HE)染色实验与Masson染色实验观察大鼠心肌组织病理变化及心肌纤维化程度,并通过免疫组化实验检测心肌组织中sST2表达情况.sST2 表达水平与炎症指标及心室重塑指标的相关性应用Pearson相关性分析.结果 与假手术组相比,模型组及空载体组大鼠心肌细胞排列紊乱,细胞间隙较大,心肌细胞间质胶原沉积较为明显,用药组大鼠心肌细胞排列更加不规则,细胞间隙更大,间质胶原沉积更多.模型组、空载体组及用药组LVEF、IL-33 低于假手术组,且用药组上述指标低于模型组与空载体组(F=618.974、28.151,P<0.05);模型组、空载体组及用药组LVEDd、LVESd、IVSd、sST2、cTnI、CK、CK-MB、IL-6、TNF-α水平高于假手术组,且用药组上述指标高于模型组与空载体组(F=3.665、3.418、122.807、36.596、101.736、37.573、79.716、20.371、51.494,P<0.05);模型组、空载体组及用药组心肌组织中sST2表达水平高于假手术组,且用药组高于模型组与空载体组(F=122.843,P<0.05);ICM大鼠血清及心肌组织中sST2 水平与心室重塑指标LVEF及炎症指标IL-33呈负相关(P<0.05),与LVEDd、LVESd、IVSd、IL-6、TNF-α呈正相关(P<0.05).结论 sST2与ICM大鼠心室重塑有关,sST2高表达会促进大鼠心室重塑进程.

目的 基于中医经典"有故无殒"理论,探讨附子水煎液对健康小鼠及慢性心力衰竭小鼠心脏的不同作用.方法 将SPF级别8周龄C57BL/6J品系雄性小鼠随机分为对照组(Ctrl)、附子组(FZH)、多柔比星组(Dox)、多柔比星加附子组(Dox+FZH).分别给予Dox小鼠和Dox+FZH小鼠每3天腹腔注射5 mg/kg多柔比星,Ctrl与FZH给予等体积氯化钠溶液(9 g/L)腹腔注射,实验开始第1天给予Dox、Dox+FZH小鼠5 mg/kg多柔比星腹腔注射后,分别给FZH与Dox+FZH小鼠每日2 g/kg附子灌胃,Ctrl与Dox小鼠分别使用等体积氯化钠溶液(9 g/L)灌胃,造模周期共4周.观察小鼠的一般情况,对小鼠生存率、心质量、体质量、心质量比、心胫比及心超指标等进行统计,分析小鼠心脏组织及血清中脑利尿钠肽(BNP)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的含量,并检测心脏组织中凋亡相关蛋白的表达情况,观察小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积大小,评估附子对健康和慢性心力衰竭状态下小鼠心肌损伤的影响.结果 ①健康状态下,Ctrl和FZH小鼠被毛毛色光亮,形体匀称,四肢活动正常且Ctrl和FZH小鼠均未见死亡;与Ctrl比较,FZH小鼠的心质量、心质量比、心胫比、左室射血分数、左室短轴缩短率、心率、收缩期左室后壁厚度均降低(P<0.05),左室舒张末期内径升高(P<0.05);与Ctrl比较,FZH小鼠活化后的半胱氨酸蛋白3(Cleaved-Caspase3)表达升高(P<0.05),B-细胞淋巴瘤因子2蛋白/Bcl2关联X蛋白(Bcl2/Bax)比值降低(P<0.05);血清中BNP和cTnⅠ的含量差异无统计学意义(P>0.05);小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积相应缩小(P<0.05).与Ctrl比较,FZH小鼠心房利尿钠肽(ANP)基因表达升高(P<0.05).②慢性心力衰竭状态下,Dox小鼠毛色晦暗,形体消瘦,活动迟缓,进食量减少,而Dox+FZH小鼠活动能力和进食情况均较Dox有所改善;Dox共计死亡6只,Dox+FZH小鼠死亡3只,附子可以改善病理状态小鼠生存率但差异无统计学意义(P>0.05);与Dox比较,Dox+FZH小鼠心率降低(P<0.05),左室射血分数轻度上升但差异无统计学意义(P>0.05);与Dox比较,Dox+FZH小鼠Bcl2/Bax比值明显升高(P<0.05),Cleaved-Caspase3蛋白表达降低但差异无统计学意义(P>0.05);血清中BNP和cTnⅠ的含量减少(P<0.05);小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积增大(P<0.05).与Dox比较,Dox+FZH小鼠ANP基因表达变化差异无统计学意义(P>0.05).结论 附子对健康状态下的小鼠心脏产生毒性作用,对慢性心力衰竭状态下的小鼠具有一定治疗作用.

目的:探究五味子甲素(Sch A)调节miR-429/Notch1信号轴对冠心病大鼠心肌组织损伤的影响.方法:利用盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导建立冠心病大鼠模型,随机分为对照(Control)组、模型(ISO)组、低剂量Sch A组(L-Sch A组)、中剂量Sch A组(M-Sch A组)、高剂量 Sch A 组(H-Sch A 组)、普萘洛尔(Pro)组、miR-429 mimics 阴性对照+H-Sch A 组、miR-429 mimics+H-Sch A 组.于ISO诱导30 min后,观察心功能指标[心率、平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)];酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌损伤血清标志物[肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、B型钠尿肽(BNP)];苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测心肌组织miR-429 mRNA;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织Notch 1信号相关因子[Notch受体胞内结构域(NICD)、Hes1]蛋白.结果:与Control组比较,ISO组心率、MAP、LVSP降低(P＜0.05),LVEDP、CK-MB、cTnⅠ、BNP升高(P＜0.05),同时可见明显病理学损伤,心肌细胞结构异常、肌原纤维排列紊乱、炎性细胞浸润;而经 L-Sch A 组、M-Sch A 组、H-Sch A 组及 Pro 组心率、MAP、LVSP 升高(P＜0.05),LVEDP、CK-MB、cTnⅠ、BNP降低(P＜0.05),同时病理学损伤明显减轻,且H-Sch A效果更佳,与Pro效果相当.与Control组比较,ISO组miR-429 mRNA升高(P＜0.05),NICD/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、Hes1/GAPDH 蛋白比值降低(P＜0.05);而经 H-Sch A 预处理,miR-429 mRNA 降低,NICD/GAPDH、Hes1/GAPDH 蛋白比值升高(P＜0.05);而使 miR-429 过表达后,NICD/GAPDH、Hes1/GAPDH 蛋白比值降低(P＜0.05);同时LVEDP、CK-MB、cTnⅠ、BNP升高,心率、MAP、LVSP降低(P＜0.05),以及心肌组织病理损伤程度有所加重.结论:Sch A可减轻冠心病大鼠心肌组织损伤,可能通过下调miR-429表达,进而激活Notch1信号通路而实现.

目的:探究慢性应激对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)小鼠心肌损伤的影响并揭示其潜在机制.方法:选用SPF级8周龄雄性C57BL/6J小鼠和ApoE-/-小鼠.10周饮食干预后进行AS病理观察,AS鉴定成模后再复合慢性不可预计温和刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)6周,分为五组:对照(control)组、CUMS组、AS-普通饲料喂养(AS-regular diet,AS-r)+CUMS组、AS-高脂饲料喂养(AS-high-fat diet,AS-h)组和AS-h+CUMS组,每组各10只.CUMS期间对各组小鼠进行旷场实验、糖水偏好实验;采用全自动生化分析仪检测小鼠血脂;HE、油红O染色评估主动脉根部病理改变;超声心动图评估小鼠心功能;ELISA法检测小鼠血清心肌损伤标志物含量、心肌组织ATP含量;透射电镜观察心肌线粒体超微结构;Oxygraph-2k高分辨呼吸能量代谢仪检测心肌线粒体耗氧率;Western blot检测B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)和cleaved caspase-3蛋白表达.结果:与control组相比各CUMS组运动总路程、进入中央区次数、糖水偏好率均显著下降(P<0.05);各AS组主动脉根部均出现了不同程度的脂质沉积及内皮损伤,心功能均显著下降(P<0.05)、并伴随不同程度心肌损伤(P<0.05);AS-h+CUMS、AS-r+CUMS心肌线粒体结构破坏,ATP含量显著下降(P<0.05),线粒体呼吸链复合物I支持的呼吸、线粒体呼吸链复合物I+II支持的呼吸和电子传递系统最大呼吸能力均显著下降(P<0.05);Bax和cleaved caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05).结论:慢性应激通过破坏AS小鼠心肌线粒体结构及能量代谢功能导致线粒体非稳态负荷发生,进而加剧心肌细胞凋亡加重心肌损伤.

目的:探讨五味子甲素(DSD)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及其对核因子κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用机制.方法:将无特定病原体(SPF)组雄性SD大鼠分为假手术组(仅穿线不结扎,生理盐水灌胃)和造模大鼠(MIRI模型).将造模成功大鼠随机分为模型组(生理盐水灌胃)、阳性药物组(复方丹参滴丸8.5 mg/kg灌胃)、DSD低剂量组(DSD 20 mg/kg灌胃)、DSD中剂量组(DSD 40 mg/kg灌胃)、DSD高剂量组(DSD 80 mg/kg灌胃),每组20只.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ);氯化三苯基四氮唑(TTC)测量心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理变化;检测心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6);蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织NF-κB/MAPK通路相关蛋白的表达.结果:与假手术组比较,模型组MIRI大鼠心肌组织肌纤维弯曲,肌细胞减少,肿胀明显,细胞核严重固缩,血清CK-MB、Mb、cTnⅠ水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、p-p38蛋白水平均升高,SOD活性降低(P＜0.05).与模型组比较,阳性药物组和DSD各剂量组大鼠心肌组织损伤减轻,肌纤维形态完整,肌细胞增加,无明显肿胀,细胞核固缩减轻,血清CK-MB、Mb、cTnⅠ水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、p-IκBα、p-ERK1/2、p-p38蛋白水平均降低,SOD活性升高(P＜0.05).结论:DSD通过抑制NF-κB/MAPK通路,对MIRI大鼠发挥保护作用.

目的 探讨巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)通过调控心脏巨噬细胞对小鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后心功能的影响及机制.方法 50只C57小鼠随机分为Sham组(n=10,制备假手术组)、MI组(n=20,制备AMI模型,随后予以腹腔注射0.9％氯化钠溶液)和MM组{n=20,制备AMI模型,随后予以腹腔注射M-CSF试剂[500μg/(kg·d)]}.实验结束时行心脏超声检查,采集心肌组织,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immu-nosorbent assay,ELISA)法检测白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte ehemoattractant protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(in-terleukin-10,IL-10)、干扰素-α(interferon-α,IFN-α)、心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、Collagen Ⅰ 及 Collagen Ⅲ;Western blot 法检测凋亡蛋白 Bax、C-caspase-3、caspase-3 及核转录因子(nuclear transcription facter,NF)-κB p65、信号转导与转录激活因子 3(transduction and activator of transcription 3,STAT3)、信号转导与转录激活因子6(transduction and activator of transcription 6,STAT6)等;免疫组化法测定AMI周边区新生血管标志物;流式细胞术测定M1型、M2型巨噬细胞水平.结果 与MI组比较,MM组小鼠左心室大小明显改善,左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)明显增加,心肌炎症、肥大、凋亡及纤维化指标均明显下降,MM组新生血管标志物CD31水平较MI组表达明显上调.MM组小鼠M2型巨噬细胞水平明显高于MI组,但M1型巨噬细胞水平低于MI组(P＜0.05).MI组小鼠NF-κB p65水平较Sham组与MM组明显升高,且MM组STAT3与STAT6水平显著高于MI组(P＜0.05).结论 M-CSF可明显抑制炎性反应,减轻心肌纤维化、肥大及凋亡,促进血管新生,抑制M1型巨噬细胞,上调表达M2型巨噬细胞,促进心肌组织修复,改善心室结构重构,NF-κB/STAT信号通路在其中发挥重要作用.

目的 基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨参附益心颗粒治疗心力衰竭的作用机制.方法 (1)通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索、筛选参附益心颗粒组方中药的有效活性成分;利用PubChem数据库、Swiss Target Prediction平台进行作用靶点预测;通过GeneCards、OMIM数据库检索、筛选心力衰竭疾病相关靶点;通过Venny 2.1.0 平台对参附益心颗粒活性成分作用靶点与心力衰竭疾病相关靶点取交集(共同靶点),即为参附益心颗粒抗心力衰竭的潜在作用靶点.将潜在作用靶点导入STRING数据库,构建蛋白互作(PPI)网络,筛选参附益心颗粒治疗心力衰竭的核心靶点.通过Cytoscape 3.6.1 软件构建"药物-活性成分-疾病-靶点"网络,筛选参附益心颗粒治疗心力衰竭的关键活性成分.利用DAVID数据库对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析.利用AutoDock Vina软件对关键活性成分和核心靶点进行分子对接验证.(2)将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参附益心颗粒组(5.28 g·kg-1)及阳性药组(沙库巴曲缬沙坦组,20.8 mg·kg-1),每组 8 只.采用结扎左冠状动脉前降支的方法复制急性心肌梗死后心力衰竭大鼠模型.灌胃给药,每日 1 次,连续 4 周.采用超声心动图检测大鼠心功能:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS);HE、Masson染色法观察大鼠心脏组织病理变化;ELISA 法检测血清脑钠素(BNP)、心钠肽(ANP)、醛固酮(ALD)水平;qPCR 及 Western Blot 法检测心脏组织 CAV1、F2、MAPK1 mRNA 及蛋白表达水平.结果 (1)共获得参附益心颗粒的活性成分 210 个,作用靶点 1 196 个,心力衰竭疾病相关靶点 801 个;通过Venny 2.1.0 平台取交集,共得到参附益心颗粒治疗心力衰竭的潜在作用靶点(共同靶点)97 个.通过"药物-活性成分-疾病-靶点"网络分析得到槲皮素、木犀草素、花生四烯酸、山柰酚、丹参醛等关键活性成分.通过潜在作用靶点的PPI网络分析得到MAPK1、F2、CAV1、EDN1、GJA1 等核心靶点.潜在作用靶点主要集中在基因表达的正向调节、心脏发育及对MAPK级联的正向调节等生物过程,涉及MAPK信号通路、HIF-1 信号通路和 PI3K/Akt等关键通路.MAPK1、CAV1、EDN1、F2 与槲皮素、木犀草素、山柰酚、丹参醛以及MAPK1、F2 与花生四烯酸均具有较好的结合活性.(2)与假手术组比较,模型组大鼠的 LVEF、LVFS 显著降低(P＜0.01),心脏质量指数明显升高(P＜0.05);心肌组织病理损伤明显,间质纤维化程度严重,心脏胶原容积分数显著升高(P＜0.01);血清BNP、ANP、ALD水平显著升高(P＜0.01);心肌组织中CAV1、F2、MAPK1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,参附益心颗粒组、阳性药组大鼠的LVEF、LVFS 均显著升高(P＜0.01),但是心脏质量指数下降不明显(P＞0.05);心肌组织病理损伤明显改善,间质纤维化程度明显减轻,心脏胶原容积分数显著降低(P＜0.01);血清BNP、ANP、ALD水平显著降低(P＜0.01);心肌组织中CAV1、F2、MAPK1 mRNA及蛋白表达水平显著下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 参附益心颗粒可能是通过槲皮素、木犀草素、花生四烯酸、山柰酚、丹参醛等活性成分,作用于MAPK1、F2、CAV-1、EDN1 等靶点,调控MAPK信号通路、PI3K/Akt信号通路等相关通路,从而改善心力衰竭大鼠的心功能及心肌纤维化.