目的 探讨参附益心颗粒治疗慢性心力衰竭的可能作用机制. 方法 以不同浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.9、1.2 mg/ml)的参附益心颗粒处理H9C2细胞24h,MTT法检测细胞活性,筛选后续实验的药物浓度.将H9 C2细胞分为正常组(正常培养)、模型组(缺氧6h)、曲美他嗪组(1×10-4 mol/L曲美他嗪+缺氧6h)、辅酶Q10组(1×10-4 mol/L辅酶Q1O+缺氧6h)及中药低剂量组(0.25 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6h)、中药高剂量组(0.5 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6h),检测各组心肌细胞ATP含量、底物代谢酶脂肪酸转运酶(FAT)、肉碱脂酰转移酶1(MCPT-1)、中链脂酰辅酶A脱氢酶(MCAD)、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、葡萄糖转运子4(GLUT-4)、腺苷酸转运体(ANT)、肌酸激酶(CK)蛋白表达水平;观察各组H9C2心肌细胞超微结构的变化.将H9C2细胞分为正常组、模型组、中药组(0.5 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6h),JC-1染色检测线粒体膜电位变化. 结果 0.5 mg/ml参附益心组及低于此浓度组无细胞毒性,以0.5 mg/ml参附益心颗粒用于中药组.与正常组比较,模型组H9C2细胞ATP含量及FAT、MCPT-1、MCAD、GLUT-4、ANT、CK蛋白含量明显降低,AMPK、PDH蛋白含量明显升高(P＜0.05).与模型组比较,中药组和辅酶Q1O组心肌细胞中ATP含量及FAT、MCPT-1、MCAD、GLUT4、ANT、CK蛋白含量均明显升高(P＜0.05).正常组细胞线粒体结构正常,模型组细胞膜破裂,线粒体肿胀,边界模糊不清.与模型组对比,中药组细胞损伤明显减轻,细胞膜完整,线粒体结构清晰.JC-1染色显示中药组可以改善线粒体膜电位的下降.结论 参附益心颗粒可能通过升高心肌H9C2细胞ATP、GLUT-4、ANT、FAT、MCPT-1、MCAD、CK蛋白表达,降低AMPK、PDH蛋白表达,改善缺氧诱导H9C2心肌细胞线粒体膜电位,从而发挥治疗慢性心力衰竭的作用.

目的 利用细胞能量代谢检测系统(seahorse XF analyzer)探讨H9C2大鼠心肌细胞能量代谢的影响因素.方法 H9c2大鼠心肌细胞贴壁培养后以不同细胞密度接种于Seahorse XF24孔板,利用糖酵解压力试剂盒检测糖酵解压力曲线;以105/mL密度接种细胞,以不同浓度碳酰氰-4-三氟甲氧基苯胺(FCCP)刺激细胞,利用线粒体有氧氧化试剂盒检测线粒体功能.结果 各密度下细胞反应良好,以2×104细胞数对寡霉素刺激后的速率数值较好,为50～400范围,是较合适的细胞密度;2μmol/L FCCP能刺激最大反应,为合适的FCCP浓度.结论 细胞密度和FCCP浓度是影响心肌细胞有氧氧化及无氧酵解功能测定的主要因素,H9c2心肌细胞以2×104/孔细胞密度接种,FCCP浓度2μmol/L刺激细胞将适合细胞线粒体功能的检测.

目的 评价参附益心颗粒辨证治疗慢性心力衰竭(CHF)的有效性和安全性.方法 采用多中心、随机、双盲、安慰剂对照的方法,将300例CHF患者随机分为治疗组151例和对照组149例.在健康教育基础上,治疗组采用西医规范治疗加中医辨证治疗,分心气(阳)虚、心血瘀阻,心阳亏虚、痰瘀互阻两型,分别给予参附益心颗粒及参附益心颗粒加味,对照组采用西医规范治疗加治疗组中药的模拟药.两组均治疗6个月.比较两组患者治疗前及治疗3、6个月射血分数(EF)、中医证候评分、6分钟步行距离(6MWD)、明尼苏达心力衰竭生活质量调查表(MLHF-Q)评分,并进行心功能疗效和中医证候疗效评价,同时进行安全性评价.结果 治疗组心功能疗效总有效率为82.4％,对照组为54.26％;治疗组中医证候疗效总有效率为93.55％,对照组为59.23％,治疗组心功能疗效及中医证候疗效均优于对照组(P＜o.o1).与本组治疗前比较,两组患者治疗3个月、6个月EF、6MWD均较治疗前增加,中医证候积分、MLHF-Q评分均较治疗前下降(P＜0.01).治疗6个月,治疗组6MWD长于对照组,中医证候积分低于对照组(P＜0.01);而EF、MLHF-Q评分与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗组发生18例不良事件,对照组16例不良事件.结论 参附益心颗粒辨证治疗加西医规范治疗能进一步提高CHF患者的心功能,提升运动能力,改善患者的临床症状和体征,且安全性较好.

目的 研究参附益心颗粒(SFG)对H9C2心肌细胞增殖及H2O2氧化损伤的影响.方法 利用IncuCyte长时间动态活细胞成像及功能分析系统IncuCyteS3,分别检测不同浓度参附益心颗粒(0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/mL)对H9C2心肌细胞活性的影响;利用MTT法检测H2O2氧化损伤对心肌细胞活性的影响,并确定合适损伤浓度;心肌细胞在100 μg/mL H2O2作用后,分别利用参附益心颗粒预孵育30min,再进行H2O2氧化损伤造模,IncuCyteS3系统检测其细胞增殖变化;同时加入荧光染料YOYO-1共培养,荧光显微镜拍照分析凋亡率.结果 不同浓度参附益心颗粒处理心肌细胞不同的时间,未见明显细胞毒性;参附益心颗粒预孵育30min,再以50μm浓度H2O2刺激细胞,可不同程度的改善氧化损伤的程度;同时,参附益心颗粒预孵育一段时间后,与模型组比较,细胞凋亡率有所下降.结论 参附益心颗粒可能能够改善氧化损伤的心肌细胞损伤,并改善由此引起的细胞凋亡.

目的 观察参附益心颗粒对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响及可能作用机制.方法 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法制备心肌梗死模型,将造模成功的32只SD大鼠随机分为模型组、参附常用量组、参附高剂量组、氯沙坦组,另设只穿线不结扎的假手术组,均每组8只.参附常用量组和参附高剂量组分别给予参附益心颗粒1.76、8.8 g/(kg·d)灌胃,氯沙坦组给予氯沙坦片10 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予蒸馏水1ml/ (100g·d)灌胃.4周后超声心动图评价各组大鼠心脏功能,并计算左室重量指数(LVWI);Masson染色法及羟脯氨酸测定法测定心肌组织胶原蛋白分布及含量;Westem blot法确定心肌组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad 2、Smad 3的蛋白表达量;RT-PCR法检测微小RNA-21(miR-21)和转化生长因子βⅢ型受体(TGF-βRⅢ)mRNA的表达水平. 结果 与模型组比较,参附常用量组、参附高剂量组、氯沙坦组左室收缩末内径(LVESD)减小、左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)升高,LVWI和胶原蛋白含量下降,同时心肌组织TGF-β1、Smad 3蛋白表达量和miR-21的mRNA表达水平降低,TGF-βRⅢmRNA表达水平升高(P＜0.05或P＜0.01);与参附常用量组比较,参附高剂量组LVESD减小、LVEF、LVFS和心肌组织TGF-βRⅢmRNA表达升高(P＜0.05或P＜0.01). 结论 参附益心颗粒可改善心力衰竭大鼠心肌纤维化,抑制心室重构,提高心脏功能,其作用机制可能与调控miR-21从而抑制TGF-β1/Smads信号通路的过度激活有关.

目的 观察参附益心颗粒对心力衰竭大鼠线粒体呼吸功能的影响.方法 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法复制心肌梗死后心力衰竭大鼠模型.将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、参附益心颗粒(简称参附)常用剂量组[1.76 g/(kg·d)]、大剂量组[8.8 g/(kg·d)]和氯沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组10只,同时设假手术组10只.分别给予相应的药物或相同体积的蒸馏水灌胃4周.利用颈动脉导管法测量相关血流动力学指标:心率(HR)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室压最大上升和下降速率(±dp/dtmax);采用Seahorse法检测线粒体呼吸功能相关参数:基础呼吸、最大呼吸、态3呼吸(T3)、态4呼吸(T4)和控制率(RCR);Western Blot法检测心肌线粒体呼吸链复合酶Ⅰ～Ⅴ的蛋白表达量.结果 与假手术组比较,模型组HR、LVEDP明显升高(P＜0.01),LVSP、±dt/dPmax降低(P ＜0.05,P＜0.01);T3、最大呼吸及RCR1、RCR2值均降低(P＜0.01),T4明显升高(P＜0.01);呼吸链复合酶Ⅲ和Ⅳ表达降低(P ＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,各药物干预组LVEDP降低(P＜0.01),±dt/dPmax升高(P ＜0.05,P＜0.01),参附常用量和大剂量组LVSP增高(P ＜0.05,P＜0.01),参附常用量组和氯沙坦组中HR降低(P＜0.05);各药物干预组T3、最大呼吸和RCR值均上升(P＜0.01),参附常用量组和氯沙坦组T4下降(P ＜0.05,P＜0.01);各药物干预组呼吸链复合酶Ⅲ均升高(P＜0.01,P＜0.05),参附大剂量组和氯沙坦组中呼吸链复合酶Ⅳ升高(P＜0.05).结论 参附益心颗粒能够改善心衰大鼠线粒体呼吸功能、增加心肌收缩力,其机制可能与抑制线粒体呼吸链复合酶Ⅲ和Ⅳ含量的降低有关.

目的 探讨参附益心颗粒(ShenFu Yixin granule,SFG)对缺氧诱导的大鼠H9c2心肌细胞脂代谢的影响.方法 将细胞分为5组:正常组、模型组(缺氧组)、曲美他嗪组(曲美他嗪+缺氧组)、辅酶Q10组(辅酶Q10 +缺氧组)及中药组(0.5mg/ml参附益心颗粒+缺氧组),培养30min后模型组、曲美他嗪组、辅酶Q10组、中药组置于缺氧培养箱中继续培养6h,建立体外H9C2细胞缺氧损伤模型,检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor α,PPARα),过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ(peroxisome proliferator activated receptorβ/δ,PPARβ/δ)、PGC-1α 表达.结果 缺氧组H9c2心肌细胞PPARα、PPARβ/δ、PGC-1α蛋白含量与正常组相比明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).给药干预后,曲美他嗪组能够明显增加PPARα、PGC-1α蛋白表达,辅酶Q10组能够明显增加PPARα,PPARβ/δ、PGC-1α蛋白表达,与缺氧组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).参附益心颗粒能够提高缺氧诱导的心肌细胞中PPARα、PPARβ/δ、PGC-1α蛋白的表达,与缺氧组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 参附益心颗粒可能使缺氧诱导的心肌细胞的PPARα、PPARβ/δ、PGC-1α抑制作用被激活,通过恢复PPARα、PPARβ/δ、PGC-1α活性而潜在保护缺氧诱导的心肌细胞,进而改善心衰.

目的 观察参附益心颗粒联合米力农治疗慢性心力衰竭(CHF)的疗效,并探讨其对患者心室重塑及心功能的影响.方法 选取天津市红桥医院心内科2018年3月至2020年1月收治的110例CHF患者为研究对象,按照入院单双号分为观察组和对照组各55例,两组患者均采用常规治疗并加用米力农治疗7 d,观察组在此基础上联合参附益心颗粒治疗6个月,6个月治疗结束后比较两组患者的心功能疗效、中医症候疗效、治疗前后6 min步行试验距离(6MWD)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末内径(LVEDd)和收缩末内径(LVESd)及安全性.结果 治疗结束时,观察组和对照组分别有53例和51例患者完成研究;观察组患者的心功能治疗总有效率为83.02％,明显高于对照组的62.74％,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的中医症候疗效的总有效率为88.68％,明显高于对照组的66.67％,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组和对照组患者的6MWD[(409.72±67.23)m vs(381.29±69.24)m]和LVEF[(44.23±6.53)％vs(41.08±7.11)％]、LVEDd[(61.43±6.19)mm vs(64.29±6.41)mm]和LVESd[(54.83±6.09)mm vs(57.48±6.51)mm]比较,观察组明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者的不良事件发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 参附益心颗粒联合米力农治疗CHF有助于改善患者的心功能和心室重塑,安全性好.

目的 探索参附益心颗粒改善缺氧心肌细胞能量代谢的机制.方法 采用CCK-8法筛选出参附益心颗粒含药血清实验研究的药物浓度.H2C9心肌细胞随机分为正常组,缺氧组,缺氧+二氮嗪组,缺氧+参附益心颗粒组,缺氧+参附益心颗粒+5-羟基癸酸组.除正常组外,根据实验分组,缺氧处理前预先对细胞进行二氮嗪、5-羟基癸酸和参附益心颗粒含药血清处理,后将细胞置于缺氧的37℃的细胞培养箱中连续培养6 h.采用荧光素酶发光法检测细胞ATP的浓度,CCK-8检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,Western blot测定线粒体KATP(mitoKATP)的蛋白Kir6.2和SUR2A的表达.结果 根据CCK-8实验结果选择250μM的参附益心颗粒含药血清作为实验药物浓度.与正常组相比,缺氧H2C9心肌细胞ATP水平显著降低,细胞的增殖能力降低,凋亡率增加,mitoKATP通道蛋白的Kir6.2和SUR2A的表达水平均显著降低(均P＜0.01).与缺氧组相比,二氮嗪和参附益心颗粒组的ATP浓度,细胞增殖能力和Kir6.2,SUR2A蛋白表达水平均显著升高,细胞的凋亡率显著下降(均P＜0.01).而参附益心颗粒经mitoKATP阻断剂5-羟基癸酸作用后,细胞的ATP浓度,增殖能力和Kir6.2,SUR2A的表达均显著下降(均P＜0.01),凋亡率明显升高(P＜0.01).结论 参附益心颗粒可能通过mitoKATP通道改善缺氧心肌细胞的能量代谢.

目的 观察参附益心颗粒对急性心肌梗死心衰大鼠左室心肌细胞KATP蛋白表达的作用.方法 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立心梗模型,第2日行心脏超声检查结果提示左室射血分数(LVEF) ＜50％判定模型成功.实验分6组:假手术组(Sham)、心梗组(MI)、尼可地尔组-KATP通道开放剂[Nico,0.1mg/(kg·d)]、参附益心颗粒小剂量组[SFL,1.76g/(kg·d)]、参附益心颗粒大剂量组[SFH,8.8g/(kg·d)],福辛普利组[ACEI,4mg/(kg· d)],每组各8只.给药干预4周后行心脏超声检查后处死,取材.药物干预4周后,HE染色法观察各组大鼠心肌组织病理学变化,检测各组大鼠血清NT-proBNP浓度,Western blot检测KATP通道蛋白Kir6.2和SUR2A的表达水平,生物发光法检测左心室缺血危险区组织的ATP含量.结果 与Sham组相比,MI组大鼠心肌组织中的KATP通道蛋白Kit6.2和SUR2A均代偿性的轻度升高(P＜0.05),而经过药物治疗后Kir6.2和SUR2A的表达均进一步的增加(均P＜0.05),参附益心颗粒高剂量能显著升高Kit6.2和SUR2A的表达(P＜0.05),福辛普利也能增加两个通道蛋白的表达,其中以增加SUR2A的表达较显著(P＜0.05).结论 心梗后心衰发生的心肌缺血组织内KATP通道蛋白代偿性的增加,参附益心颗粒高剂量治疗能显著增加二者蛋白的表达,为线粒体能量的产生和细胞膜的稳定性提供物质基础.