为了对广西产拳卷地钱药材进行质量控制,采用HPLC指纹图谱法对8批药材进行了研究,色谱条件为安捷伦ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),流动相为乙腈(B)-0.1%磷酸水溶液(D),梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温为25 ℃.结果表明:建立了参考指纹图谱,共有峰6个,8批广西产拳卷地钱药材HLPC指纹图谱相似度均大于0.75,其精密度、重复性、稳定性实验均符合指纹图谱技术要求.HPLC指纹图谱分析,数据稳定可靠,方法简便高效,可为广西产拳卷地钱质量评价提供参考.

目的:通过筛选引物并优化反应条件,建立以目标起始密码子多态性(SCoT)技术进行标记的广西产拳卷地钱DNA的聚合酶链式反应(PCR)体系.方法:采用改进的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取广西产拳卷地钱药材样品DNA,以凝胶电泳法与紫外分光光度法考察样品DNA的纯度和浓度;以样品DNA为模板,对36条SCoT引物进行PCR扩增反应,并对产物进行电泳、染色、成像以筛选合适引物;以DNA浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度等5个主要因素进行5因素4水平的正交试验,对SCoT-PCR反应体系条件进行优化.结果:所提取的样品DNA条带整齐,无RNA污染、无降解、无弥散荧光,加样孔清晰;260、280 nm紫外波长处吸光度比值在1.8～2.0范围内,样品DNA纯度和浓度均适合后续试验;36条引物PCR结果显示,4号引物所得产物条带整齐、无弥散荧光且亮度最高,故以其为引物进行PCR反应;最佳SCoT-PCR反应体系为30.00μg/mL DNA、2.00 mmol/L Mg2+、0.20 mmol/L dNTP、0.40μmol/L引物、0.50 U/mL Taq DNA聚合酶(总反应体积20μL).结论:筛选得到合适的样品DNA的SCoT-PCR引物并优化了反应体系,可为广西产拳卷地钱的品种鉴定、遗传多样性评价及亲缘关系分析提供技术基础.

目的:为了限制药材中含水量和泥沙等杂质及为了鉴别药材的真伪,更全面地控制广西产拳卷地钱质量,该实验对其水分、灰分和浸出物进行限量测定及薄层色谱鉴定方法进行研究.方法:按照2015年版《中华人民共和国药典》(第四部)0832项下水分测定法、2302项下灰分测定法、2201项下浸出物测定法和0502项下薄层色谱法,对广西产拳卷地钱进行水分灰分浸出物限量测定和考察其TLC条件,建立其薄层色谱鉴定方法.结果:广西不同产地10批拳卷地钱水分含量在4.86％～9.44％,总灰分含量在14.78％～19.99％范围内,酸不溶性灰分含量在1.77％～4.80％范围内,50％乙醇热浸出物的含量在12.11％～20.01％.薄层色谱鉴别结果显示:展开剂为氯仿:甲醇(7:0.5),以芹菜素为对照品,用5％三氯化铝乙醇显色再结合荧光灯(365 nm)下检视,广西不同产地10批药材与芹菜素对照品在相同的位置上分离出一个相同的黄色荧光斑点.结论:该方法简便、数据准确、重复性良好,为广西产拳卷地钱质量评价的研究奠定基础,也为今后拳卷地钱药材质量标准的建立提供了参考依据.

目的:研究广西产拳卷地钱Marchantia convoluta Gao et Chang的化学成分.方法:拳卷地钱的80％乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果:从广西产拳卷地钱中分离纯化得到13个化合物,分别鉴定为:正十六烷酸(1)、β-谷甾醇(2)、豆甾醇(3)、5-羟基-7,4'-二甲氧基黄酮(4)、5-羟基-7,4'-二甲氧基二氢黄酮(5)、芹菜素(6)、槲皮素(7)、β-胡萝卜苷(8)、5-羟基-7-甲氧基-2-甲基色原酮(9)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(10)、木犀草素(11)、熊果酸(12)、5,7-二羟基-6,4'-二甲氧基黄酮(13).结论:其中,化合物1、4～13为首次从该植物中分离得到.

目的 采用HPLC-MS鉴定广西产拳卷地钱75％乙醇提取物中黄酮类成分.方法 采用色谱柱:AC-QUITY UPLC HSS T3 C18(2.1 mm×100mm,1.8 μm),流动相为0.1％甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,质谱使用电喷雾电离源(ESI)正负离子模式.结果 分析得出拳卷地钱含有黄酮类成分5个,分别是Apigenin7,4’-diglucuronide、Apigenin7-glucuronide、芹菜素、木犀草素、金圣草黄素.结论 该方法稳定、准确性好,可用于广西产拳卷地钱成分鉴定及质量控制.

目的 考察拳卷地钱乙醇提取物HPLC指纹图谱与其抗急性肝损伤的谱效关系.方法 建立HPLC指纹图谱后,探讨药材乙醇提取物对四氯化碳诱导急性肝损伤大鼠的保护作用,对指纹图谱中共有峰成分含量与其抗急性肝损伤活性进行灰色关联分析和多元线性回归分析.结果 11批样品指纹图谱中有11个共有峰,与其抗急性肝损伤作用的关联度均大于0.740,以芹菜素最高.与模型组比较,各样品均可降低血清AST、ALT水平(P＜0.05,P＜0.01),抗AST、ALT谱效关系方程P＜0.01,R2分别为0.960、0.929.结论 拳卷地钱乙醇提取物及其中某些成分与该药材抗急性肝损伤有关,以芹菜素作用最强.

目的:研究拳卷地钱总黄酮抗小鼠肝纤维化的作用及可能机制.方法:将72只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(秋水仙碱0.2 mg/kg)和卷拳地钱总黄酮高、中、低剂量组(300、150、75 mg/kg),每组12只.除空白组外,其余各组小鼠均于背部皮下注射25％四氯化碳-花生油溶液复制肝纤维化模型;于造模的同时,空白组和模型组小鼠灌胃水,其余各组小鼠灌胃相应药物,灌胃体积均为20 mL/kg,每天1次,连续10周.末次灌胃后,检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的水平;观察小鼠肝组织病理学变化;检测小鼠肝组织中Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)、COL-Ⅲ、转化生长因子β1(TGF-β1)水平;检测小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、Smad2、Smad4、Smad7蛋白的表达水平;检测小鼠肝组织中TGF-β1、Smad2、Smad4、Smad7 mRNA的表达水平.结果:与空白组比较,模型组小鼠血清中ALT、AST水平,肝组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1水平以及α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad4的蛋白表达水平和TGF-β1、Smad2、Smad4的mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),肝组织中Smad7的mRNA及其蛋白的表达水平均显著降低(P＜0.05);肝组织损伤及胶原纤维增生较明显.与模型组比较,阳性对照组和拳卷地钱总黄酮高剂量组小鼠上述指标均显著逆转(P＜0.05或P＜0.01);拳卷地钱总黄酮中剂量组小鼠血清中ALT水平,肝组织中COL-Ⅰ水平和TGF-β1、Smad2、Smad4的mRNA及其蛋白的表达水平均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);拳卷地钱总黄酮低剂量组小鼠肝组织中Smad2、Smad4蛋白的表达水平均显著降低(P＜0.05);各给药组小鼠肝组织的损伤及纤维化程度均有所减轻.结论:拳卷地钱总黄酮具有抗小鼠肝纤维化的作用,其作用机制可能与调节TGF-β/Smad信号通路中TGF-β1、Smad2、Smad4、Smad7的mRNA及其蛋白的表达相关.