目的:对不同道地种源铁皮石斛的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ(芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷,viceninⅡ)进行体外抗氧化及诱导肝癌HepG2细胞凋亡的活性研究.方法:采用2,2-联苯基-1-苦基肼法(DPPH),2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸法(ABTS)和铜离子还原法对viceninⅡ(0.005 ～1 g·L-1)进行体外的抗氧化活性研究;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测viceninⅡ(12.5～100 μmol· L-1)对人6种不同的肿瘤细胞体外的增殖抑制作用;后续凋亡实验viceninⅡ浓度为75 μmol·L-1,采用Hoechst33258染色,荧光显微镜进行HepG2细胞形态学观察;应用流式细胞术,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(AnnexinV-FITC/PI)检测HepG2细胞凋亡率;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及相关凋亡基因的mRNA表达.结果:ViceninⅡ质量浓度为1 g·L-1时,对DPPH的清除率和Cu2*还原率为48.82％和22.01％ (P＜0.01);当viceninⅡ质量浓度为0.5 g·L-1时,对ABTS清除率为86.88％ (P ＜0.01);viceninⅡ显著抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,75 μmol·L-1的viceninⅡ作用48 h后,细胞存活率为45.69％ (P ＜0.01),细胞凋亡率为14.57％ (P ＜0.01),升高B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2,半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8,p38,细胞外信号调节激(ERK),c-Jun氨基末端酶(JNK),核转录因子-κB(NF-κB) mRNA表达(P＜0.01).结论:铁皮石斛不同道地种源的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ在体外具有一定的抗氧化作用,能有效抑制HepG2细胞增殖,并可能通过调控MAPK通路及Bax/Bcl-2途径诱导HepG2细胞凋亡.

目的:对2个道地种源(丹霞种、云南广南种)铁皮石斛中的黄酮苷成分进行提取分离、纯化及结构鉴定,为确认铁皮石斛的共性黄酮苷成分提供实验依据.方法:①采用70％乙醇提取两个产地铁皮石斛叶的总黄酮成分,依次采用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取粗提物,运用大孔吸附树脂AB-8,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)以及ODS柱色谱对水饱和正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过化合物的理化性质结合HPLC,ESI-MSn,1H-NMR,13C-NMR等现代波谱学方法鉴定黄酮苷结构.②利用HPLC分析比较不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛的黄酮苷共有成分.结果:从2个产地铁皮石斛叶中共分离得到了5个黄酮苷化合物,经鉴定为芦丁,新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,佛莱心苷,异佛菜心苷.4个不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛茎中均能检出新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ丰度相对较大,而佛莱心苷、异佛莱心苷在云南广南种、广西铁皮兰种中出峰明显,芦丁则在丹霞种中尤为突出.结论:新西兰牡荆苷Ⅱ为铁皮石斛不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)的共性黄酮苷成分,可作为铁皮石斛特征图谱的参照物.

目的:优化铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱分析方法,明确不同种源的共性成分与特异性成分.方法:色谱条件采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0.05％磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长340 nm;柱温30℃;流速1.0 mL·min-1.结果:27批铁皮石斛共标示出13个黄酮类特征峰,鉴别了6个黄酮碳苷(新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,夏佛塔苷,异夏佛塔苷,佛莱心苷,异佛莱心苷)与1个黄酮氧苷(芦丁)共7个特征峰.不同批次样品检出7～11个特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ为不同来源样品相对稳定的共有峰,芦丁、佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰差异较大.根据特征峰的相对丰度,可将样品分为3大类,其中第Ⅰ类10批样品主要来源于广东、江西、福建、浙江(武义)等丹霞地貌(即“丹霞种”),以检出明显的芦丁强峰为特征;第Ⅱ类11批样品主要来源于云南、广西等地(包括了“云南广南种”“广西铁皮兰种”),以能检出佛菜心苷与异佛莱心苷特征峰为特征;而第Ⅲ类6批样品主要来源于浙江(即“浙江本地种”),以难以检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰,检出不同程度的芦丁峰为特征.比较“丹霞种”与“广西铁皮兰种”的仿野生和大棚栽培铁皮石斛HPLC特征图谱,结果仿野生铁皮石斛中的特征峰在大棚栽培石斛中也能稳定检出,验证了铁皮石斛种源的可靠性.结论:所建立的分析方法能对铁皮石斛黄酮类特征峰达到较好的分离效果,重复性好,基本明确了不同种源铁皮石斛的共性及特异性黄酮苷类成分.提示新西兰牡荆苷Ⅱ适合作为特征图谱的参照物峰;可根据芦丁相对丰度或佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰的检出及相对丰度作为铁皮石斛“丹霞种”“云南广南与广西铁皮兰种”与“浙江本地种”的判断依据.

目的:建立齿瓣石斛中5种黄酮苷类成分的含量测定方法.方法:采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为四氢呋喃-乙腈-甲醇(10:22:5)-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:340 nm.结果:新西兰牡荆苷Ⅱ、新西兰牡荆苷Ⅰ、夏佛塔苷、异夏佛塔苷、芦丁线性范围分别为0.04625～0.5550μg、0.04215～0.5058 μg、0.03570～ 0.4284 μg、0.03265～0.3918 μg、0.08250 ～0.9900 μg(r≥0.9998);平均加样回收率为99.76％～102.06％,RSD均小于3.0％.7批齿瓣石斛样品中上述5种成分的含量分别为0.0276～0.0426 mg/g、0.0297～0.0535 mg/g、0.0158～0.0298 mg/g、0.0220～0.0401 mg/g、0.0362～0.1924 mg/g.结论:该含量测定方法准确可靠,重复性好,可为齿瓣石斛的质量控制提供参考依据.