为探究独脚金内酯抑制剂Tis108对天麻生长的影响,该研究采用10 μmol·L-1的Tis108溶液处理白麻块茎,对块茎的内源激素赤霉素(GA)含量进行测定,通过RT-PCR技术克隆GA失活关键酶GeCYP714A1基因,借助ExPASy、SWISS-MODEL、MEGA 等软件对该基因进行生物信息学分析,并测定其在天麻不同组织部位的表达水平.结果显示,Tis108处理后天麻块茎的GA含量显著升高,GA失活关键酶GeCYP714A1的转录水平显著降低.GeCYP714A 1基因的编码区全长1 173 bp,编码390个氨基酸,蛋白的相对分子质量为44.85 kDa,理论等电点为9.83,不稳定系数为49.20,脂肪系数为89.03,总平均亲水指数平均值为-0.235,属于碱性亲水性不稳定蛋白;且GeCYP714A1蛋白定位于线粒体,无信号肽,不具有跨膜结构.系统进化树分析显示,GeCYP714A1与铁皮石斛DcCYP714C2(PKU78454.1)蛋白亲缘关系最近,序列一致性达67.25％.利用qRT-PCR技术分析天麻GeCYP714A1基因的表达模式,结果显示在天麻块茎中GeCYP714A1转录水平最高,其次是茎和花序.该研究表明Tis108可抑制天麻块茎中GA失活酶GeCYP714A1的转录水平,提高GA的积累量,影响天麻块茎生长,为进一步揭示独脚金内酯调控天麻GA信号和块茎发育奠定基础.

目的 建立超高效液相色谱串联—四极杆—静电场轨道阱质谱技术(ultra-performance liquid chromatogra-phy-linear ion trap quadrupole-Orbitrap-mass spectrometry,UPLC-Q-Orbitrap-MS)对铁皮石斛(Dendrobiumoffi-cinale Kimura&Migo)水提物石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3种萃取组分进行定性表征的方法.方法 提取铁皮石斛水提物并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,旋蒸浓缩后,得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取组分.样品经UPLC-Q-Orbitrap-MS分析,根据元素组成、分子量、质荷比、离子碎片等确定化合物信息并推导裂解规律,通过与文献、MzCloud、MzVault、PudChem、本地数据库比对确定鉴定结果.结果 在正负离子模式下共鉴定出化合物62种,包括黄酮类成分20种,联苄类成分6种,羧酸及其衍生物6种,脂肪酸及其衍生物6种,酚类成分4种,氨基酸及其衍生物3种,糖类成分2种,生物碱类、苯丙素、蒽醌、萜类化合物各1种,其他类成分3种,还检测到8种含量较高、质谱信号较强的未知成分.其中水提石油醚萃取物中鉴定出化合物7种,乙酸乙酯萃取物中鉴定出化合物36种,正丁醇萃取物中鉴定出化合物48种.通过与文献比对,62种化合物中有7种化合物为首次从铁皮石斛中提取得到.结论 该方法可快速有效分析铁皮石斛中多种化学成分,可为铁皮石斛质量控制及药效物质基础研究提供参考.

目的:探讨铁皮石斛叶发酵液对酒精性肝炎（AH）小鼠的干预效果及机制。方法:选取70只6~8周龄近交品系C57BL/6J雄性小鼠，按随机数字表法分为正常组（NG）、模型组（MG）、液体饲料对照组（CG）、水飞蓟宾组（SI）及铁皮石斛叶发酵液低剂量组（DL）、中剂量组（DM）、高剂量组（DH），每组10只。NG组给予普通饲料喂养，CG组给予对照饲料（LB酒精液体对照饲料），SI组给予LB酒精液体饲料及水飞蓟宾灌胃，DL、DM和DH组分别给予LB酒精液体饲料及25%、50%、100%浓度的铁皮石斛叶发酵液灌胃。LB酒精液体饲料喂养8周建立AH模型。第8周取小鼠眼球血，检测丙氨酸转氨酶（ALT）、甘油三酯（TG）、转铁蛋白（TRF）、白细胞介素（IL）-6、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）等含量；并取肝组织行HE、油红O、普鲁士蓝和免疫荧光ROS染色；肝组织匀浆检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量；PCR及Western 印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、AMPKβ1、磷酸化AMPKβ1（p-AMPKβ1）、抑癌基因p53（p53）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GXP4）的mRNA及蛋白相对表达量，以分析铁皮石斛叶发酵液对AH小鼠的干预效果及机制。结果:与MG组相比，DL、DM、DH组小鼠血清ALT和TG均降低［ALT分别为（45.94±19.85）、（45.73±22.62）、（41.68±7.13）比（75.51±17.76）U/L；TG分别为（0.90±0.23）、（0.69±0.22）、（0.41±0.20）比（1.28±0.19）mmol/L，均 P<0.05］；IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ均降低（均 P<0.05）；DM、DH组小鼠血清TRF、IL-10均升高（均 P<0.05）。与模型组相比，DL、DM、DH组小鼠肝组织MDA均降低［分别为（0.41±0.05）、（0.40±0.03）、（0.43±0.14）比（0.64±0.06）μmol/g］，GSH均升高（均 P<0.05）。与模型组相比，DL、DM、DH组小鼠肝组织AMPK（分别为1.36±0.11、1.61±0.17、1.68±0.11比0.80±0.12）、SLC7A11（分别为0.91±0.12、0.97±0.12、0.99±0.13比0.60±0.14）、GPX4（分别为0.51±0.11、0.63±0.17、0.83±0.15比0.42±0.14）的mRNA表达量均增加（均 P<0.05）。与模型组相比，DL、DM、DH组小鼠肝组织AMPKβ1、p-AMPKβ1、SLC7A11和GPX4的蛋白相对表达量均增加，p53蛋白相对表达量降低（均 P<0.05）。与模型组相比，DL、DM、DH组小鼠肝组织脂肪变性、小叶内炎症程度减轻，肝组织铁染色、ROS染色变浅。 结论:铁皮石斛叶发酵液可减轻小鼠AH的严重程度，其机制可能与上调AMPK抑制p53/SLC7A11/GPX4介导的铁死亡通路有关。

目的 通过对党参等9种试点食药物质开展消费状况调查,为完善食药物质安全风险评估基础数据库提供依据.方法 本研究于2019-2021年在广东省抽取19个地市调查点,选择18岁及以上有传统煲汤料等地方特色食品食用习惯的健康人群作为研究对象,采用食物频率调查法收集调查对象过去12个月9种试点食药物质等消费状况.结果 本研究共纳入6 233名调查对象,其中,男性占49.2％、女性占50.8％.调查人群中,9种试点食药物质的消费率为0.8％～55.3％,消费率从高到低分别为:党参55.3％、黄芪47.4％、西洋参41.5％、灵芝30.0％、铁皮石斛(干)24.1％、天麻16.0％、铁皮石斛(鲜)4.8％、肉苁蓉2.6％、杜仲叶1.3％、山茱萸0.8％.消费人群中,9种试点食药物质以不直接食用为主,占比为82.6％～95.1％,每月消费频率均值为每月0.8～2.2次.9种试点食药物质干品每次消费量均值为每次7.4～11.9g,铁皮石斛(鲜)每次消费量均值为每次41.9 g.结论 广东省19个地市18岁及以上人群9种试点食药物质消费率差异较大,党参、黄芪等消费频率较高,建议针对食药物质用法、用量进一步科学评估,对居民做好正确食用的科普宣教.

目的:优选出不同状态(新鲜、干燥)及不同药用部位的不同药用植物(滇重楼、密脉鹅掌柴、铁皮石斛)最适宜的制片方法,提高横切面组织装片制备效率.方法:采用不同防冰晶形成保护剂(不处理、蔗糖和甘油)处理新鲜材料并进行冰冻切片,采用甘油软化干燥材料并进行石蜡切片,比较不同前处理条件和两种制片方法的制片效果.结果:新鲜材料中,密脉鹅掌柴的茎叶,滇重楼的根茎、茎、叶采用甘油溶液做保护剂效果较佳,而铁皮石斛适用蔗糖磷酸缓冲溶液做保护剂;滇重楼的须根用石蜡切片法可获得组织结构完整的装片.此外,经甘油溶液软化,滇重楼的干燥根茎和密脉鹅掌柴的干燥叶可获得质量较好的石蜡切片.结论:质地稍硬的新鲜药材用甘油溶液处理后采用冰冻切片可以获取较为理想的效果;质地柔软的新鲜药材可不经任何处理或经蔗糖磷酸缓冲液浸泡后采用冰冻切片;干燥药材或含淀粉类药材采用石蜡切片法可获得理想的切片效果.

目的 探讨铁皮石斛对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及作用机制.方法 用高脂饲料喂养建立ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,随机分别给予生理盐水(10 mL/kg)、麝香保心丸溶液(20 mg/kg)、低剂量铁皮石斛液(10 g/kg)、高剂量铁皮石斛液(30 g/kg)为模型组、阳性药物组、低剂量组和高剂量组,普通饲料喂养ApoE-/-小鼠为对照组给予生理盐水(10 mL/kg),每组 8 只.治疗 4 周后,苏木精-伊红染色观察小鼠胸主动脉组织病理学改变;检测小鼠血浆中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;利用荧光定量PCR技术检测胸主动脉中胆固醇外转运蛋白ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ABCG1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达情况.结果 与对照组比较,模型组动脉内膜脂质斑块形成,斑块内有菱形胆固醇结晶,伴炎性细胞浸润和大量泡沫细胞聚集.与模型组比较,阳性药物组、低剂量组和高剂量组小鼠胸主动脉的泡沫细胞沉积减少,动脉粥样硬化病变程度减轻.与对照组比较,模型组TG、TC、LDL-C水平高、HDL-C水平低,ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量低,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,阳性对照组、低剂量组和高剂量组TG和TC水平降低,HDL-C水平升高;阳性药组、高剂量组ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 铁皮石斛可改善ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠的血脂水平,减轻动脉粥样硬化小鼠的动脉病变程度,可能与影响ABCA1、ABCG1 和PPARγ的表达有关.

糖尿病肾脏病为本虚标实之证,本虚为气阴两虚,标实为瘀血、痰浊,治疗宜益气养阴通络,益气用黄芪、党参、太子参,养阴用生地黄、熟地黄、铁皮石斛、黄精等补络脉之不足,行络脉之气血.气阴亏虚于内,水不涵木,则易生风动风,此为内风;本虚于内,易受外邪侵扰,此为外风.外风宜散,内风宜熄,临床常用僵蚕、生龙骨、生牡蛎平熄内风;穿山甲、乌梢蛇、海风藤、牛蒡子等散外风.祛痰通络用半夏、瓜蒌、白芥子以消肾络之痰浊.散结通络常用醋鳖甲、醋莪术等通络消积.络病日久,瘀血阻滞络脉,凝聚成形,络熄成积,痼结难解,此时单用草木之品难以奏效,常配伍虫类药以搜剔化瘀通络,常在丹参、川芎的基础上配伍地龙、全蝎、水蛭等虫类药.益气养阴药配伍祛风通络药、祛痰通络药、散结通络药以及化瘀通络药,有益气养阴、通畅肾络之效.

目的:优选铁皮石斛鲜品的性状评价指标,揭示其性状与成分之间的关联性,并对其进行综合评价.方法:测定不同批次铁皮石斛鲜品的外观性状指标(中部节间长、色度值等)及内在品质指标(粗纤维、多糖等),并通过Excel和SPSS 21.0软件进行数据统计与分析.结果:中部茎粗、中部节间长可作为优选铁皮石斛鲜品的性状指标;铁皮石斛鲜品糖类成分中多糖和半乳糖醛酸、葡萄糖和半乳糖醛酸及半乳糖、甘露糖和半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖之间存在显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).根据主成分分析-聚类分析可将12批铁皮石斛鲜品分为3类,第1类品质较优,包括修水、余干大棚,龙虎山、修水挂树附生及修水崖壁仿野生种植的铁皮石斛;第2类品质居中,包括龙虎山、余江、鄱阳大棚和广丰、横峰崖壁仿野生种植的铁皮石斛;第3类品质相对较差,包括德安大棚和德兴挂树附生种植的铁皮石斛.结论:通过主成分分析-聚类分析建立多指标、多成分铁皮石斛鲜品品质评价体系,有助于建立铁皮石斛鲜品品质评价标准和规格等级划分.

目的 为了探讨不同省份基地栽培的铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是否存在分子水平的遗传差异,为种质筛选和栽培选育提供参考.方法 通过采集 5 个省份的 30 份人工栽培铁皮石斛样品,并利用ITS及叶绿体条形码标记对其进行种水平遗传分析.结果 在种水平上,部分叶绿体条形码在不同产地的铁皮石斛上可以检测到变异,而ITS片段的种内变异少.其中trnH-psbA长度为790 bp(1 indel,2 SNP),pbsI-pbsK为473 bp(3 indel,1 SNP),trnF-ndhJ为682 bp(1 SNP);而ITS为551 bp(2 SNP).在叶绿体的NETWORK图和NJ树上可以看出,贵州的铁皮石斛样品具有特有的单倍型,而部分贵州安龙铁皮石斛样品的遗传距离与金钗石斛最接近;ITS分析的结果显示浙江的铁皮石斛样品与金钗石斛遗传距离更近.结论 贵州的铁皮石斛样品具有更高的遗传多样性,提示其可能具有多个种质来源;而贵州和浙江的铁皮石斛样品与金钗石斛的遗传距离更近,说明其在种源上可能属于进化过程中较早的一支,其他样本更有可能是由其发展而来.研究结果表明,虽然目前不能依靠种内的遗传变异对各地区的铁皮石斛进行产地区分,但可用于揭示不同地区铁皮石斛在种质来源上的遗传差异性,为铁皮石斛的栽培选育提供一定的科学依据.

目的:调查广东韶关丹霞地貌现存铁皮石斛野生资源的生存现状,为野生铁皮石斛就地保护、回归保育及仿野生栽培提供参考.方法:对国内铁皮石斛野生资源情况进行整理,基于本课题组近 10 年来对广东韶关丹霞地貌野生铁皮石斛资源分布和生境开展的跟踪调查,对 11 个调查地点的海拔、朝向、铁皮石斛数量、坡位、坡向进行分析,探讨丹霞地貌野生铁皮石斛植物形态和生境特点.结果:调查记录了广东韶关丹霞地貌中的野生铁皮石斛 300 余丛,约 3000 g,处于极度濒危状态;实地观察发现,野生铁皮石斛茎多呈紫红色,长 5～10 cm,有"形似蚱蜢髀"的茎条,叶铁锈色斑点明显;丹霞地貌的野生铁皮石斛大多生长在海拔 100～500 m的丹霞崖壁中部或近坡顶处,常与苔藓和地衣伴生,一般生长在东南至西南朝向、通风良好、傍水潮湿的丹霞岩壁上,且半阳偏阴、温凉高湿环境下长势较好.结论:野外考察证实,《本草经集注》中记载的"今用石斛出始兴"的石斛为铁皮石斛,其药用历史在 1500 年以上;丹霞地貌的铁皮石斛为目前国内铁皮石斛的主要种源之一;野生丹霞铁皮石斛因自身繁殖率低、人为长期采摘等原因,现已极度濒危,亟须开展铁皮石斛野生资源的调查与保护工作.