目的 探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及机制.方法 将72只雄性C57BL/6J小鼠(6～8周龄)随机分为正常对照组、LPS/D-GaIN模型组、LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组和rSj-Cys对照组(n=18).LPS/D-GaIN组和LPS/D-GaIN+rSj-Cys组小鼠均腹腔注射LPS(10 μg/kg)和D-GaIN(700 mg/kg)造模;造模后30 min,LPS/D-GaIN+rSj-Cys组及rSj-Cys对照组小鼠均腹腔注射rSj-Cys(1.25 mg/kg),正常对照组小鼠注射等体积PBS.造模6 h后,每组随机挑选8只小鼠处死,收集小鼠血清及肝组织,进行后续检测,每组剩余10只分别在3、6、12、24 h观察其生存情况,并计算生存率.检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝脏组织病理形态,采用ELISA检测小鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)表达,采用免疫组化法检测肝组织巨噬细胞表面标记物CD68表达水平,采用免疫组化和免疫印迹法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白水平,采用TUNEL检测肝细胞凋亡情况,采用免疫印迹法检测肝组织内质网应激相关蛋白表达水平.结果 模型组小鼠12 h生存率为30%,rSj-Cys治疗组小鼠12 h生存率为80%.模型组小鼠24 h生存率为10%,rSj-Cys治疗组小鼠24 h生存率为60%;与正常对照组相比,LPS/D-GaIN模型组小鼠血清中AST、ALT、IL-6、TNF-α含量均显著上升(P<0.01),病理结构损伤严重,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显增强(P<0.01),促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01),肝细胞凋亡水平显著增加,肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01);而LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠转氨酶AST、ALT和炎症因子IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.01),肝脏病理损伤程度减轻,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显降低(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.01),Bcl-2表达显著增强(P<0.01),肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平下调(P<0.05或P<0.01);rSj-Cys对照组与正常对照组相比,各指标无统计学差异(P>0.05).结论 rSj-Cys通过抑制内质网应激,减轻炎症和肝细胞凋亡缓解LPS/D-GalN引起的小鼠急性肝损伤.

目的 探讨日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(SjCystatin)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠脓毒症的干预效果.方法 54只BALB/c小鼠适应性饲养1周后,随机分为正常对照组(PBS组,A组)、脓毒症造模组(PBS+LPS组,B组)、蛋白干预组(PBS+LPS+SjCystatin组,C组).A组腹腔注射PBS(100 μL),B组、C组腹腔注射含LPS(10 mg/kg)的PBS(100 μL),其中C组小鼠于注射LPS后30 min腹腔注射含25 μg SjCystatin蛋白的PBS(100 μL).每组随机抽取10只,造模后24 h取小鼠血清及肝、肺、肾组织,酶联免疫吸附试验(ELISA)验检血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,全自动生化分析仪检测ALT、AST、BUN和Cr水平;肝、肺和肾组织HE染色观察其病理损伤;每组余8只小鼠,造模后记录小鼠72 h生存率的差别且观察小鼠状态的改变.结果3组小鼠的72 h生存率具有统计学差异(P<0.05),与A组(100%)相比,B组(0%) 72 h生存率降低(P<0.05),经过SjCystatin蛋白治疗后,C组生存率较B组增高(36%).与A组相比,B组肝、肺、肾组织切片病理损伤加重,血清中ALT、AST、BUN、Cr、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05);与B组相比,C组调节因子IL-10水平明显升高,肝、肾、肺组织损伤明显减轻,且血清中上述肝肾功能检测指标及促炎因子水平明显降低(P<0.05).结论 SjCystatin对LPS诱导的脓毒症有显著的治疗作用.

目的 探讨日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Schistosoma japonicum cysteine protease inhibitor,SjCystatin)对葡聚糖硫酸钠(Dextransulphate sodium,DSS)诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎的抑制作用.方法 18只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:A组为对照组,B组为肠炎组,C组为SjCystatin治疗组.A组给予蒸馏水,B、C组连续饮用3％DSS溶液7 d诱发肠炎;C组每天经腹腔注射10μg SjCystatin,A和B组注射PBS.观察各组小鼠临床表现,进行临床疾病活动指数(Dis-ease activity index,DAI)评分.第7天处死小鼠,观察结肠大体及组织病理改变.同时提取小鼠结肠组织匀浆,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-6及IL-10水平.结果 与A组([ 0.50 ± 0.28)分]相比,B组小鼠DAI评分[(9.30 ± 1.30)分]明显增加,建模后小鼠结肠病理损伤显著,结肠组织匀浆上清中TNF-α为(321.33 ± 67.01)pg/mL,IL-6为(403.58 ± 180.51)pg/mL,均明显上升.C组小鼠DAI评分为(6.67 ± 1.57)分,显著下降(F=86.86,P<0.01);小鼠结肠大体及组织病理明显缓解,结肠组织匀浆上清中TNF-α为(188.14 ± 40.14)pg/mL,IL-6为(209.71 ± 48.47)pg/mL,均显著下降(F=17.46、9.89,P<0.01).结论 SjCystatin对DSS诱导的C57BL/6小鼠急性溃疡性结肠炎有抑制效果.

目的 探讨日本血吸虫重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSjcystatin)对小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)预后的影响及其免疫调节机制.方法 建立小鼠MI模型,分别于术后1、3、5、7、14、28 d经腹腔注射PBS及10、25 μg rSjcystatin.术后28 d,记录MI小鼠的生存率及心脏黏连率;通过超声心动图观察心功能变化;Masson三色染色法检测心脏结构重构情况.术后7d,HE染色法检测小鼠心脏损伤情况;CD45免疫组化染色法检测炎症细胞浸润程度;ELISA法检测小鼠血清中主要炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)、IL-6、转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)的分泌水平.结果 MI术后28 d,与PBS组比较,两剂量rSjcystatin治疗组小鼠存活率呈上升趋势,心脏黏连率降低;25 μg rSjcystatin治疗组小鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)明显升高(P＜0.05),左室的梗死面积百分比明显减少(P＜0.01);两剂量rSjcystatin治疗组小鼠左室舒张末内径(left ventricular diastolic internal diameter,LVID,d)显著减小(P＜0.05),左室壁厚度明显增加(P＜0.001);与10 μg rSjcystatin治疗组比较,25 μg rSjcystatin治疗组的LVEF和LVFS均明显升高(P＜0.05),LVID,d差异无统计学意义(P＞0.05),左室梗死面积百分比显著减小(P＜0.05),室壁厚度明显增加(P＜0.001).MI术后7d,与PBS组比较,两剂量rSjcystatin治疗组炎性细胞的浸润减少,心肌纤维的破坏减轻;25 μg rSjcystatin治疗组棕黄色炎性细胞颗粒的平均光密度值显著低于PBS组及10 μg rSjcystatin治疗组(P分别为＜0.05和＜0.001);与PBS组比较,25 μg rSjcystatin组小鼠血清TNF-α和IL-6的含量显著降低(P分别为＜0.05及＜0.01),TGF-β1含量显著升高(P＜0.001),Ib10含量呈升高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rSjcystatin可通过适度减弱炎细胞浸润、降低促炎因子TNF-α和IL-6分泌及增加抗炎因子IL-10和TGF-β1分泌,从而抑制小鼠MI后的炎症反应,延缓心肌结构重构的发生,对心肌有一定保护作用.