目的:构建粪肠球菌（Efs）介导的日本血吸虫（Sj）重组疫苗（rEfs-Sj26GST疫苗），并研究Sj26GST-GST融合蛋白在重组疫苗中的表达情况。方法:将pGEX-Sj26GST重组质粒电穿孔转化Efs ATCC47077株感受态，构建rEfs-Sj26GST疫苗，提取质粒进行PCR鉴定；经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后，用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western blot）对表达产物进行分析和鉴定。结果:经PCR鉴定，扩增出大小约676 bp的片段，与Sj26GST扩增片段长度相符。经SDS-PAGE分析，得到相对分子质量约52 × 10 3的条带，与Sj26GST-GST融合蛋白条带相符。Western blot结果显示，rEfs-Sj26GST疫苗表达的Sj26GST-GST融合蛋白可被Sj感染者血清特异性识别。 结论:成功构建了rEfs-Sj26GST疫苗，Sj感染者血清可特异性识别重组疫苗表达的Sj26GST-GST融合蛋白。

目的:比较青蒿琥酯(Art)和扶正化瘀方治疗血吸虫病肝纤维化对线粒体自噬的影响。方法:将80只C57BL/6雌性小鼠随机分为健康组、感染组、Art治疗组和扶正化瘀方治疗组，每组20只。感染组及治疗组小鼠感染日本血吸虫尾蚴16条。6周后，吡喹酮（300 mg/kg）2日疗法杀虫。Art治疗组采用每天100 mg/kg腹腔注射的方式进行治疗，扶正化瘀方治疗组采用每天饲料给药，每1 kg饲料含16 g扶正化瘀方，6周后，取4组小鼠新鲜肝组织。Masson染色观察、蛋白质印迹分析肝组织中参与线粒体三羧酸循环反应的琥珀酸脱氢酶亚单位A（SDHA）、苹果酸脱氢酶(MDH2）、柠檬酸合酶（CS）、酮戊二酸脱氢酶（OGDH）；雷帕霉素靶蛋白1（mTORC1）通路；腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和线粒体自噬通路激酶（PINK1）的相对表达水平。提取各组肝脏组织样品的线粒体检测线粒体的耗氧率。双因素方差分析比较各组间蛋白表达的差异。结果:Masson染色显示，感染组小鼠肝脏纤维化面积显著高于健康组并且Art治疗组和扶正化瘀方治疗组小鼠肝脏纤维化面积均低于感染组。蛋白质印迹法分析结果显示，SDHA蛋白相对表达量感染组（0.82±0.05）与健康组（1.00±0.05）相比显著下降（ t = 11.23， P = 0.004），并且Art治疗组（0.73±0.05）显著高于感染组（ t = 10.79， P = 0.007），但是扶正化瘀方组（0.98±0.05）与健康组比较，差异无统计学意义（ t = 1.925， P = 0.127）；感染组p-AMPK的蛋白质相对表达量（1.15±0.05）显著高于健康组（0.98±0.07， t = 12.18， P = 0.003），Art治疗组（0.50±0.05）相比较于感染组p-AMPK的表达显著降低（ t = 11.78， P = 0.003）。感染组AMPK的蛋白质相对表达量（0.80±0.05）显著低于健康组（1.00±0.05， t = 10.53， P = 0.005），Art治疗组（0.54±0.05）相比较于感染组AMPK的表达显著降低（ t = 13.98， P = 0.004）；感染组p-mTORC1的蛋白质相对表达量（0.93±0.08）与健康组相比差异无统计学意义（ t = 2.28， P = 0.065），而Art治疗组的表达量（0.63±0.05）显著低于感染组（ t = 10.58， P = 0.029）；感染组p-mTORC1/m-TORC1（0.98±0.03）相对于健康对照组（0.97±0.03， t = 0.98， P = 0.085）差异无统计学意义，Art治疗组（0.48±0.05）相对于感染组显著下降（ t = 14.58， P = 0.009）。感染组PINK1的蛋白质相对表达量（0.55±0.05）显著低于健康组（1.00±0.03， t = 13.49， P = 0.001），Art治疗组（1.21±0.05， t = 9.98， P = 0.005）和扶正化瘀方治疗组（1.31±0.35， t = 6.98， P = 0.027）均显著高于感染组。线粒体功能检测显示，加入复合物Ⅱ底物（琥珀酸）后感染组耗氧量低于健康组而Art治疗组和扶正化瘀方治疗组均高于感染组，加入复合物IV底物（抗坏血酸+三甲基戊二醇）后感染组耗氧量低于健康组而Art治疗组和扶正化瘀方治疗组显著高于感染组。 结论:Art通过抑制AMPK/mTORC1信号通路活性并增强线粒体耗氧量和自噬及SDHA表达而缓解血吸虫病肝纤维化。

寄生虫病仍然是全球最大的健康问题，给贫困地区造成巨大的经济负担。目前用于治疗原虫病和蠕虫病的药物存在一定缺陷，亟待研发更为有效的治疗药物。小檗碱最早从黄连的根茎中提取获得，是一类重要的抗炎药物。小檗碱的衍生物通过修饰小檗碱的结构位点获得，除了具有抗菌和抗微生物活性以外，小檗碱及其衍生物还具有显著的抗寄生虫活性。本文概括了小檗碱及其衍生物抗原虫（利什曼原虫、锥虫、刚地弓形虫、恶性疟原虫和柔嫩艾美尔球虫）和蠕虫（曼氏血吸虫、日本血吸虫、细粒棘球绦虫和犬弓首蛔虫）感染的作用，以期为相关研究工作者提供参考。

目的:比较青蒿琥酯(Art)和扶正化瘀方治疗血吸虫病肝纤维化对线粒体自噬的影响。方法:将80只C57BL/6雌性小鼠随机分为健康组、感染组、Art治疗组和扶正化瘀方治疗组，每组20只。感染组及治疗组小鼠感染日本血吸虫尾蚴16条。6周后，吡喹酮（300 mg/kg）2日疗法杀虫。Art治疗组采用每天100 mg/kg腹腔注射的方式进行治疗，扶正化瘀方治疗组采用每天饲料给药，每1 kg饲料含16 g扶正化瘀方，6周后，取四组小鼠新鲜肝组织。Masson染色观察、蛋白质印迹分析肝组织中参与线粒体三羧酸循环反应的琥珀酸脱氢酶亚单位A（SDHA）、苹果酸脱氢酶（MDH2）、柠檬酸合酶（CS）、酮戊二酸脱氢酶（OGDH）；雷帕霉素靶蛋白1（mTORC1）通路；腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和线粒体自噬通路激酶（PINK1）的相对表达水平。提取各组肝脏组织样品的线粒体检测线粒体的耗氧率。双因素方差分析比较各组间蛋白表达的差异。结果:Masson染色显示，感染组小鼠肝脏纤维化面积显著高于健康组并且Art治疗组和扶正化瘀方治疗组小鼠肝脏纤维化面积均低于感染组。蛋白质印迹法分析结果显示，SDHA蛋白相对表达量感染组（0.82±0.05）与健康组（1.00±0.05）相比显著下降（ t = 11.23， P = 0.004），并且Art治疗组（0.73±0.05）显著高于感染组（ t = 10.79， P = 0.007），但是扶正化瘀方组（0.98±0.05）与健康组比较，差异无统计学意义（ t = 1.925， P= 0.127）；感染组p-AMPK的蛋白质相对表达量（1.15±0.05）显著高于健康组（0.98±0.07， t = 12.18， P = 0.003），Art治疗组（0.50±0.05）相比较于感染组p-AMPK的表达显著降低（ t= 11.78， P= 0.003）。感染组AMPK的蛋白质相对表达量（0.80±0.05）显著低于健康组（1.00±0.05， t = 10.53， P = 0.005），Art治疗组（0.54±0.05）相比较于感染组AMPK的表达显著降低（ t= 13.98， P= 0.004）；感染组p-mTORC1的蛋白质相对表达量（0.93±0.08）与健康组相比差异不显著（ t = 2.28， P= 0.065），而Art治疗组的表达量（0.63±0.05）显著低于感染组（ t= 10.58， P = 0.029）；感染组p-mTORC1/m-TORC1（0.98±0.03）相对于健康对照组（0.97±0.03， t = 0.98， P= 0.085）差异无统计学意义，Art治疗组（0.48±0.05）相对于感染组显著下降（ t= 14.58, P = 0.009）。感染组PINK1的蛋白质相对表达量（0.55±0.05）显著低于健康组（1.00±0.03， t= 13.49, P= 0.001），Art治疗组（1.21±0.05, t= 9.98, P= 0.005）和扶正化瘀方治疗组（1.31±0.35， t= 6.98， P= 0.027）均显著高于感染组。线粒体功能检测显示，加入复合物Ⅱ底物后感染组耗氧量低于健康组而Art治疗组和扶正化瘀方治疗组均高于感染组，加入复合物Ⅲ底物后感染组耗氧量低于健康组而Art治疗组和扶正化瘀方治疗组显著高于感染组。 结论:Art通过抑制AMPK/mTORC1信号通路活性并增强线粒体耗氧量和自噬及SDHA表达而缓解血吸虫病肝纤维化。

目的:高通量测序分析日本血吸虫童虫的微小RNA（microRNA，miRNA），鉴定已知miRNA的表达水平，预测分析miRNA靶基因及其生物学功能。方法:体外制备日本血吸虫童虫，提取童虫的总RNA构建文库进行Illumina高通量测序。采用DEGseq R语言包，结合perl脚本进行miRNA表达量的差异分析；分别利用miRanda、Blast软件和KEGG数据库对差异miRNA进行靶基因及其生物学功能预测。结果:构建文库中，日本血吸虫童虫表达的miRNAs与最新miRBase数据库比对结果显示，共有38 483条匹配序列，鉴定到已知miRNA 60个；其中，sja-miR-125b表达量最高，其次为sja-miR-61、sja-miR-71a、sja-miR-36-3p和sja-miR-10-5p，上述5种miRNA表达量占总miRNA的91%（3 263/3 585）。共预测到靶基因7 176个，基因功能集中在核苷酸转移酶活性、细胞氮复合代谢、分子功能、生物学过程、生物合成、等离子体膜及蛋白质成熟；功能富集分析显示，高表达的miRNA主要参与致病过程、生物进展及多条代谢途径通路。结论:日本血吸虫童虫显著表达的miRNA参与了血吸虫分化、生长发育和致病过程中的代谢途径调节，为研究血吸虫发育调控机制及新药物开发奠定了基础。

血吸虫病是一种人畜共患寄生虫病，被《中华人民共和国传染病防治法》列为乙类传染病。影响血吸虫病流行的因素众多，包括经济、社会、自然与生物等，因此血吸虫病疫情容易出现反弹 [1]。我国是日本血吸虫病流行区 [2]。近年来，在调整防治策略，并经过一系列防治措施的实施后，我国血吸虫病的疫情得到根本改善，流行程度大大降低 [3]。本文对我国2011—2020年血吸虫疫情进行分析，对防控效果进行总结，并对现存问题进行分析，现报告如下。

建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)检测利什曼原虫的方法,为内脏利什曼病防治提供技术支持.根据利什曼原虫动基体5.8S核糖体RNA(GenBank:OP829811)序列,设计合成LAMP扩增特异性引物,建立LAMP法.用LAMP法检测恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫感染者和健康人血样DNA,以及日本血吸虫、刚地弓形虫和杜氏利什曼原虫前鞭毛体DNA,评价LAMP法的特异性评价特异性;杜氏利什曼原虫前鞭毛体DNA稀释为 1 ng/μl、100pg/μl、10pg/μl、1 pg/μl、100fg/μl、10fg/μl、1 fg/μl,确定LAMP法的最低检测限及有、无钙黄绿素对检测限的影响.用建立的LAMP法和实时荧光定量PCR(qPCR)检测不明原因发热患者和健康人血样;取阳性患者骨髓涂片吉氏染色后镜检,查找利什曼原虫无鞭毛体.建立的LAMP法可检出杜氏利什曼原虫DNA,反应结果呈绿色;检测4种疟原虫感染者和健康人血样以及日本血吸虫、刚地弓形虫DNA的结果均为阴性,呈橙色.LAMP法检测健康人血样46份,均呈阴性,无交叉反应,特异性高.65 ℃反应60min,未加和加钙黄绿素的检出限分别为1pg/μl和1 ng/μl,浊度速率峰值均值分别为0.194、0.120,加钙黄绿素后出现浊度时间较未加钙黄绿素平均延迟23.6 min.LAMP法和qPCR法检测发热患者血样67份的结果一致,均检出相同的2份阳性,2份阳性血样对应的骨髓涂片镜检均查见利什曼原虫无鞭毛体.本研究建立的了检测利什曼原虫的LAMP法操作简便、灵敏度和特异性均较高,检测结果可视,具有较好的推广应用价值.

目的 构建粪肠球菌(Efs)为载体的日本血吸虫(Sj)重组Efs-Sj14-3-3疫苗,并研究其表达效率.方法 制备重组质粒pGEX-Sj14-3-3和粪肠球菌ATCC47077株感受态.采用电穿孔技术将重组质粒pGEX-Sj14-3-3转化粪肠球菌ATCC47077株,构建重组Efs-Sj14-3-3疫苗.抽提质粒进行PCR扩增鉴定;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹对表达产物进行分析和鉴定.结果 以从重组Efs-Sj14-3-3抽提的质粒为模板进行PCR,可扩增出约399 bp的Sj14-3-3基因片段,SDS-PAGE显示表达产物为40×103Mr的融合蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的18％;免疫印迹表明融合蛋白能被日本血吸虫感染的患者血清识别.结论 成功构建了日本血吸虫重组Efs-Sj14-3-3疫苗,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

目的 研究血吸虫病相关性肺高血压的超声心动图特征.方法 从超声心动图肺高血压高度可能的前瞻性研究队列中筛选肝脾型血吸虫病患者10例为观察组,其他病因性肝病12例为对照组,分析超声心动图特征.结果 与对照组比较,观察组有较高的年龄[84(81～88)岁(P=0.029)];心力衰竭、心房颤动、慢性肾衰竭发病率较高(P＜0.05);左心疾病、慢性肺病、肝硬化、门脉高压发病率差异无统计学意义(P＞0.05);房室内径较小,但仅右心室长径和基底径差异有统计学意义(P＜0.05);三尖瓣反流峰速[3.9(3.4～4.5)m/s]和肺血管阻力[2.5(2.3～3.4)]WU(Wood单位)差异无统计学意义(P＞0.05);右心功能不全检出率(50.0％)较高(P=0.005).Kaplan-Meier生存分析发现右心功能不全显著缩短心力衰竭再入院时间(x2=8.323,P=0.004).结论 血吸虫病相关性肺高血压心脏形态和功能类似限制型心肌病样改变,因右心力衰竭再入院率高.

目的 探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及机制.方法 将72只雄性C57BL/6J小鼠(6～8周龄)随机分为正常对照组、LPS/D-GaIN模型组、LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组和rSj-Cys对照组(n=18).LPS/D-GaIN组和LPS/D-GaIN+rSj-Cys组小鼠均腹腔注射LPS(10 μg/kg)和D-GaIN(700 mg/kg)造模;造模后30 min,LPS/D-GaIN+rSj-Cys组及rSj-Cys对照组小鼠均腹腔注射rSj-Cys(1.25 mg/kg),正常对照组小鼠注射等体积PBS.造模6 h后,每组随机挑选8只小鼠处死,收集小鼠血清及肝组织,进行后续检测,每组剩余10只分别在3、6、12、24 h观察其生存情况,并计算生存率.检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝脏组织病理形态,采用ELISA检测小鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)表达,采用免疫组化法检测肝组织巨噬细胞表面标记物CD68表达水平,采用免疫组化和免疫印迹法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白水平,采用TUNEL检测肝细胞凋亡情况,采用免疫印迹法检测肝组织内质网应激相关蛋白表达水平.结果 模型组小鼠12 h生存率为30%,rSj-Cys治疗组小鼠12 h生存率为80%.模型组小鼠24 h生存率为10%,rSj-Cys治疗组小鼠24 h生存率为60%;与正常对照组相比,LPS/D-GaIN模型组小鼠血清中AST、ALT、IL-6、TNF-α含量均显著上升(P<0.01),病理结构损伤严重,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显增强(P<0.01),促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01),肝细胞凋亡水平显著增加,肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01);而LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠转氨酶AST、ALT和炎症因子IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.01),肝脏病理损伤程度减轻,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显降低(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.01),Bcl-2表达显著增强(P<0.01),肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平下调(P<0.05或P<0.01);rSj-Cys对照组与正常对照组相比,各指标无统计学差异(P>0.05).结论 rSj-Cys通过抑制内质网应激,减轻炎症和肝细胞凋亡缓解LPS/D-GalN引起的小鼠急性肝损伤.