介绍了荧光分析法检测尿酸相比常规检测方法的优势,综述了有机荧光探针、无机荧光探针、有机-无机杂化荧光探针的制备过程、检测原理、检测性能,分析了各类荧光探针用于尿酸检测的优势与不足,并展望了未来的研究方向.

目的:探讨肿瘤酸性微环境响应铁基金属有机框架(Iron-containing Metal Organic Frameworks,Fe-MOF)纳米探针对乳腺癌光动力增敏铁死亡及其体外MRT1激活效应.方法:制备Fe-MOF纳米探针,用透射电子显微镜(Transmission Electron Micro-scope,TEM)及原子力显微镜(Atomic Force Microscope,AFM)对其形态进行表征;采用3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)评价其在溶液水平ROS生成及GSH消耗能力;通过细胞毒性实验(MTT)测定纳米探针在暗毒性及光毒性条件下对4T1乳腺癌细胞的光动力增敏铁死亡的效能;将4T1细胞与Fe-MOF共孵育后,协同激光照射处理,使用荧光显微镜观察其活性氧(Reactive Oxygen Specis,ROS)、脂质过氧化物(Lipid PerOxide,LPO)的生成以及细胞活/死染色情况;观察纳米探针在不同的pH条件下T1加权成像的激活效应,并在细胞水平测量不同时间点的T1激活效能.结果:制备的Fe-MOF纳米探针呈针状结构,厚度约为44 nm;在体外溶液水平可有效促进ROS的生成及LPO的消耗;荧光显微镜结果显示Fe-MOF触发的铁死亡效应联合光动力治疗可有效促进细胞内ROS和LPO的生成,以及肿瘤细胞死亡率升高(P＜0.001);MR成像结果显示,在酸性条件下纳米探针的T1信号可被特异性激活,pH 5.0条件下r1弛豫率为4.954 mM-1s-1,具有较好pH响应性及细胞水平时间依赖性激活效能.结论:pH响应诊疗一体化的Fe-MOF纳米探针可实现乳腺癌的光动力增敏铁死亡效能以及MR微环境响应激活成像.

黑曲霉是有机酸与酶制剂重要的工业生产菌株,具有强大的水解酶系与葡萄糖转运系统,可快速响应胞外碳源变化,摄取环境中葡萄糖供给细胞生长和产物合成.作为重要的碳源底物与关键的信号分子,葡萄糖的摄取吸收直接影响黑曲霉细胞生长与发酵性能.针对目前丝状真菌缺乏简便葡萄糖吸收能力定量表征方法的问题,本文以 2-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-氨基)-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)作为葡萄糖吸收探针,通过将预培养的黑曲霉孢子与 2-NBDG孵育后,利用荧光显微成像与流式细胞分析,建立了丝状真菌的葡萄糖吸收的定量检测方法.结果发现,2-NBDG 的最佳使用浓度为 150 μmol/L,最佳孵育时间为4 h.进一步利用该定量分析方法,发现低亲和力葡萄糖转运蛋白MstC的过表达使黑曲霉葡萄糖吸收提高 1.44 倍,同时在前期研究的基础上,利用多序列比对分析,设计了MstC的突变体R188K,通过检测发现该点突变可直接导致MstC葡萄糖转运活性的丧失,这表明Arg188 是影响MstC葡萄糖转运能力的关键氨基酸位点.本文葡萄糖摄取定量检测方法的建立及其在MstC功能研究上的应用,不仅加深了丝状真菌葡萄糖吸收的定量认识,也为葡萄糖转运系统的改造优化提供了技术支撑.

背景:光热疗法是一种新兴的肿瘤治疗手段,利用光热剂将光能转化为热能来实现肿瘤的无创消融.光热疗法与纳米技术的兴起为乳腺癌的治疗开辟了新视角.目的:制备一种乳腺癌细胞膜修饰的新型近红外仿生纳米探针,探究其体外近红外荧光/超声显像效果,观察其体外对同源肿瘤细胞的靶向能力和光热治疗效果.方法:以具有A-D-A结构的有机小分子ITIC-4CI作为光热剂、聚乳酸/羟基乙酸共聚物为纳米载体、小鼠乳腺癌细胞4T1细胞膜为纳米颗粒表面修饰剂,并核心负载全氟己烷,采用双步乳化法与超声法制备新型近红外仿生纳米探针(4T1m/ITIC-4CI/PFH),对纳米探针进行基本表征,并验证其对同源肿瘤细胞的靶向性;探究纳米探针的光热性能及光热稳定性,观察激光照射下纳米探针的近红外荧光/超声成像效果;采用CCK-8法和钙黄绿素/碘化丙啶染色法评估纳米探针的光热治疗效果.结果与结论:①制备的纳米探针4T1m/ITIC-4CI/PFH尺寸均一、稳定性好,平均粒径为(92.7±2.3)nm,与乳腺癌4T1细胞膜具有相似的蛋白图谱;体外细胞摄取实验证实,该纳米探针可靶向同源乳腺癌4T1细胞;②纳米探针4T1m/ITIC-4CI/PFH具有红移吸收光谱和延伸到近红外Ⅱ区的尾部发射,在激光辐照下可发出明亮的近红外Ⅱ区荧光信号;③经激光照射,纳米探针4T1m/ITIC-4CI/PFH可相变为微气泡,增强超声显像;CCK-8和钙黄绿色/碘化丙啶染色结果显示,纳米探针4T1m/ITIC-4CI/PFH对乳腺癌4T1细胞具有明显的光热杀伤效果;④结果表明,纳米探针4T1m/ITIC-4CI/PFH具有靶向同源肿瘤的能力,并可增强近红外Ⅱ区波段荧光/超声显像和光热疗法疗效.

目的 研究溶质载体有机阴离子转运蛋白家族1B1(SLCO1B1)基因rs2306283、rs4149056 及载脂蛋白 E(ApoE)基因 rs429358、rs7412 遗传多态性对不同种类中等强度他汀降脂疗效的影响.方法 收集冠心病患者血样,用聚合酶链反应-荧光探针法检测SLCO1B1、ApoE基因多态性,记录治疗前后三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并计算其变化差值,分析SLCO1B1、ApoE基因多态性与不同种类中等强度他汀降脂疗效的关系.结果 本研究纳入231例冠心病患者.SLCO1B1 rs2306283 AG型在汉族与维吾尔族患者中分布频率分别为37.50％和50.67％,GG 型分别为 53.91％和 34.66％(均 P＜0.05);ApoE rs429358 CC 型在男性与女性患者中分布频率分别为0％和4.92％(P＜0.05).SLCO1B1 rs2306283 GG型患者经阿托伐他汀治疗后的HDL-C为(0.91±0.27)mmol·L-1均显著低于瑞舒伐他汀(1.13±0.38)mmol·L-1与其他类他汀(1.13±0.42)mmol·L-1(均P＜0.05).SLCO1B1 rs4149056 TT 型患者经其他类他汀治疗后的HDL-C为(1.10±0.34)mmol·L-1 显著高于阿托伐他汀(0.90±0.28)mmol·L-1(P＜0.01);经阿托伐他汀治疗后LDL-C下降值为(-0.50±0.76)mmol·L-1显著优于瑞舒伐他汀(-0.13±0.84)mmol·L-1(P＜0.05).ApoE rs429358 TT型患者经阿托伐他汀治疗后TC差值和LDL-C差值分别为(-0.71±1.02)mmol·L-1与(-0.54±0.79)mmol·L-1,均优于瑞舒伐他汀(均P＜0.05).ApoE rs7412 CC型患者经瑞舒伐他汀和其他类他汀治疗后的HDL-C分别为(1.02±0.34)和(1.11±0.34)mmol·L-1均高于阿托伐他汀(0.89±0.26)mmol·L-1(均P＜0.05).结论 SLCO1B1 和ApoE基因多态性对中等强度阿托伐他汀、瑞舒伐他汀降脂疗效有一定的影响,可能作为预测他汀降脂疗效的遗传学指标.

目的 通过海藻多糖(SP)与锌离子(Ⅱ)络合成一种新型的海藻多糖锌(SPZC),在比较SP和SPZC二者理化性质、结构组成基础上,对锌离子的多糖螯合物在单核细胞THP-1细胞耗氧的影响做了初步的研究.方法:用苯酚法法测定SP和SPZC的总多糖含量、Hodgson法测定二者的硫酸根含量和Folin酚试剂法等化学法测定二者主要作用成分,气相色谱(GC)分析了二者所含的主要单糖及摩尔比,红外光谱(IR)分析多糖二者的主要成分基团等.用ESR自旋捕捉法检测了二者对细胞的呼吸爆发作用(respiratory burst,RB)下耗氧量的影响,以及利用活性氧(reactiveoxygen species,ROS)的荧光探针(2,7-二氢二氯荧光素,DCFH-DA)分析了PMA激活THP-1细胞后ROS产生的变化.结果 SP络合上锌离子成为SPZC后也具有很好的稳定性,二者之间的主要成分含量变化明显,多糖含量、蛋白质含量、硫酸根离子下降明显;而SPZC中Zn(Ⅱ)的含量为15％.通过GC分析,表明锌离子的配位反应,使得SP的单糖组成也有改变;IR图谱可以发现SP结合上锌离子后,图谱上的特征性峰发生位移、钝化或消失,而代之有SPZC核的类型峰.RB结果,提示在细胞受到激发的短暂时间内,SPZC比SP更能维持细胞的RB在一个更高水平;而同样细胞激发后的较长时间内,ROS产生的荧光染色,相较SP对ROS产生有一定的淬灭作用,而SPZC则能触发ROS产生更多.结论 SP同锌离子(Ⅱ)络合产生的SPZC,增加了新的有机锌来源;同时,SPZC对比SP,其抗氧化性能有所减弱.

卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,对卵巢癌的早期诊断是提高生存率和生活质量的关键.目前发现包括糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)等数十种卵巢癌血清肿瘤标志物用于卵巢癌的诊断,传统的血清检测卵巢癌标志物的方法,如放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、电化学发光法(ECLIA)等,难以克服灵敏度和特异度不高、操作步骤繁琐、工作量大、样本使用量大、容易出现误差等缺点.液态悬浮芯片检测技术是基于流式细胞仪发展起来的新技术,其有机整合了激光分析、流式细胞技术、荧光编码微球及信号处理等多种技术.其以聚苯乙烯微球为反应界面,利用特异性探针分子包被后即可俘获一些小分子物质,通过检测微球的“放大”作用对小分子物质进行检测,具有高通量、高灵敏度、高特异度等优点.目前液态悬浮芯片用于卵巢癌血清标志物的检测主要是联合检测多个指标,现就液态悬浮芯片技术在卵巢癌诊断中应用价值加以综述.

目的 探讨XPD Asp312Asn单核酸多态性在预测以奥沙利铂为基础方案的转移结直肠癌患者化疗疗效的价值.方法 应用TaqMan荧光探针Real-Time PCR分析方法对106例接受奥沙利铂为基础方案(FOLFOX4方案72例,XELOX方案34例)化疗的转移结直肠癌患者进行着色性干皮病互补基团D(XPD) Asp312Asn基因型测定.Logistic回归分析疗效,Kaplan-Meier方法预测生存期.结果 106例结直肠癌患者化疗有效率为57.6％ (61/106),两种化疗方案中G/G、G/A和A/A基因型在化疗有效组和无效组之间分布的差异无统计学意义(P＞0.05).多因素生存分析显示A/A基因型、癌胚抗原(CEA)≥5 ng/ml和年龄≥65岁的患者生存时间相对较短,具有统计学意义(P＜0.05).结论 XPD Asp312Asn单核酸多态性可以作为转移结直肠癌患者生存期的一个预测指标,但与奥沙利铂药物敏感性的关联不大,需要进一步论证.

目的 探讨老年汉族患者溶质载体有机阴离子转运蛋白家族1B1(SLCO1B1)和载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的分布情况,为老年人合理用药提供依据.方法 采用聚合酶链反应-荧光探针方法对2016年4月-2018年4月解放军总医院第四医学中心2 633例心血管疾病患者的SLCO1B1和ApoE基因多态性进行检测,纳入对象年龄≥60岁,其中男性1 427例,女性1 206例,分析基因型分布的性别差异.结果 SLCO1B1基因的*1a/*1a+*1a/*1b+*1b/*1b组合最多见,占78.28％(2 061/2 633);*5/*5+*5/*15+*15/*15组合33例,占1.25％.各基因型组合的性别分布差异无统计学意义(P＞0.05).ApoE基因的E2/E4+E3/E3组合最多见,占69.69％(1 835/2 633),E3/E4+E4/E4组合有430例,占16.33％,各基因型组合的性别分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本研究展示了大样本老年汉族人群中SLC01B1及ApoE基因多态性的分布,结果对调整的用药方案具有重要意义.

使用简单的溶剂法制备了一种新型的锰簇卟啉金属有机框架纳米载体(nMn-MOF),并对其体外增效光动力治疗的能力进行了考察.通过动态光散射仪、透射电镜、X射线光电子能谱对该纳米载体进行表征,采用氧探针、ICG荧光染料考察其催化过氧化氢产生氧气和光照下产生单线态氧(1 O2)的能力.在细胞水平上,采用CCK-8法检测纳米载体的暗毒性和光毒性,通过荧光染色观察纳米载体改善肿瘤细胞乏氧和产生活性氧的能力.结果表明,制备的纳米级的锰簇卟啉金属有机框架纳米载体具有过氧化氢特异性产氧和产生高水平单线态氧的能力,改善肿瘤乏氧,从而增效光动力治疗.