目的:利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特异性结合的核酸适配子(apt)，探讨apt与BMSCs的结合方式及能力。方法:利用SELEX技术，以大鼠BMSCs为靶点，从构建的核酸文库中反复筛选、克隆、测序及分析，获得候选apt。流式细胞术测定和软件分析获得不同浓度(0、4、8、16、32、64、128、256 nmol/L)候选apt与BMSCs的结合曲线及平衡解离常数。胰酶消化实验探究apt与BMSCs结合的靶点，并观察apt体外捕获BMSCs的能力。结果:流式细胞术与荧光共聚焦实验表明SELEX筛选第9轮文库与BMSCs结合能力最高。经序列分析适配子apt7与BMSCs的亲和力最高，平衡解离常数为(11.79±0.72) nmol/L。胰酶消化实验表明当胰酶消化细胞时间超过10 min后，apt7与BMSCs的亲和力下降甚至消失。体外捕获实验表明固定于培养皿上面的apt7能体外捕获骨髓细胞液中的大鼠BMSCs。结论:本研究通过SELEX技术成功分离出能高亲和力、高特异性结合大鼠BMSCs的特异性适配子apt7，为进一步将适配子应用于组织工程支架表面招募循环干细胞研究提供了实验依据。

在倡导精准医疗的今日,在基本掌握与肿瘤发生密切相关的靶点的机理后,如何实现肿瘤靶向治疗,尽量消减由治疗带来的不良反应显得尤为关键.核酸适配子是能与靶标以高亲和力、高特异性结合的寡核苷酸;无机纳米材料是纳米材料作为医学领域诊疗制剂中重要的组成部分;利用核酸适配子与靶标结合的特性将其与无机纳米材料结合后,可将靶向结合、生物成像及药物递送等特点集于一体,综合应用于肿瘤研究,同时有力于促进核酸纳米技术的发展.综述了近年不同无机纳米材料结合核酸适配子在肿瘤研究领域中的研究进展,以及对无机纳米材料在医学应用的安全性思考,以期早日实现新型靶向肿瘤治疗策略的开发.

目的 应用SELEX技术筛选与HER2蛋白特异性结合的适配子(aptamer),探讨其对胃癌的抗肿瘤活性.方法 (1)建立DNA寡核酸文库,通过SELEX技术筛选出HER-2核酸适配子,并行核酸适配子的鉴定及结构修饰.(2)采用胃癌细胞株的细胞增殖试验(MTT)及流式细胞术的细胞凋亡与增殖体外研究HER-2核酸适配子对高表达HER-2胃癌细胞的抑瘤活性.(3)建立Balb/C裸鼠胃癌模型,研究HER-2核酸适配子对高表达HER-2胃癌细胞的抗瘤活性.结果 (1)筛选获得的胃癌细胞HER-2核酸适配子86个核苷酸序列,对NCI-N87蛋白裂解液中HER-2具有较好的亲和反应.(2)细胞增殖试验(MTS)显示HER-2适配子对NCI-N87细胞增殖活力具有显著的抑制作用,流式细胞术显示其能显著诱导NCI-N87细胞的凋亡.(3)体内胃癌模型实验显示HER-2核酸适配子能抑制肿瘤生长.结论 采用SELEX技术筛选出高特异性及高亲和力结合HER-2的核酸适配子,通过体内外实验均证实HER-2核酸适配子可以抑制胃癌细胞生长、促进胃癌细胞凋亡而呈现良好的抗瘤活性.

肿瘤干细胞具有自我更新和多向分化潜能,在肿瘤生成、转移、复发和放化疗抗性等方面起着重要作用,是近年来肿瘤研究的热点.适配子是小分子寡核苷酸,具有极强的靶向性和亲和力,是肿瘤诊断和治疗的新型核酸分子.目前利用适配子进行肿瘤干细胞的诊断和治疗的研究越来越多,为肿瘤的诊断和治疗提供新的研究工具.

适配子(aptamer)是通过体外指数级富集的配体系统进化(SELEX)技术筛选得到的能折叠成三维空间结构的单链DNA/RNA寡核苷酸.适配子可特异性识别细胞表面的分子标记,与单克隆抗体相比,具有相似甚至优于抗体的特征,如高特异性、高亲和力、易于修饰、化学性质稳定、无毒性及低免疫原性等.基于适配子的这些优势,除了自身用作治疗剂,也能特异性地运载药物、纳米粒子、核酸治疗剂到靶细胞内,成为一种能靶向递送治疗药物到细胞、低毒高效的新型工具.文章论述近几年适配子用于靶向治疗的最新进展,为肿瘤等疾病的治疗提供新思路.

核酸适配体以其高特异性和高亲和力在肿瘤的早期诊断、治疗等领域显现出巨大潜能,运用cell-SELEX筛选获得的核酸适配体能够通过靶分子变化识别肿瘤细胞,进而实现肿瘤的预防与治疗.目前研究者们利用cell-SELEX技术并结合流式细胞术成功筛选到多条核酸适配体.弥补适配子缺陷并发挥其优势,可使核酸适配体技术真正应用于临床诊断与治疗.

目的 通过SELEX技术筛选获得癌胚抗原(CEA)特异性核酸适配子,为建立CEA适配子检测方法和肿瘤靶向治疗奠定实验基础.方法 构建长度为88 bp的随机ssDNA文库,体外筛选人血清CEA特异性适配子,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测特异性适配子结合蛋白.结果 经过优化体外筛选条件,经12轮筛选,获得特异性核酸适配子,经SDS-PAGE证实了其识别并特异性结合的物质为人血清CEA.结论 经体外12轮筛选,证实了所获得的CEA适配子可特异性地与人血清CEA蛋白结合,为后续建立CEA特异性检测平台提供基础,也为靶向治疗药物的研制提供一定的思路.

构建随机ssDNA文库,通过SELEX技术,以正常、炎性宫颈脱落细胞为反筛细胞,以上皮内低级别病变(CIN1)、上皮内高级别病变(CIN2、CIN3)和鳞状细胞癌脱落细胞为正筛细胞,经过12轮筛选特异性适配子高度富集得到宫颈癌前病变适配子库,经特异性、亲和力分析和细胞免疫荧光确立高特异性适配子CIN-Ap4可作为诊断宫颈癌前病变生物标志物,为宫颈癌前病变分子诊断奠定理论基础,提供新思路.利用Prime Premier 5.0设计构建了随机ssDNA文库并根据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的退火温度、循环数以及上、下游引物浓度比等条件进行优化,分析确定50 μL反应体系中对称PCR的最佳反应条件为:最佳退火温度为49.5℃,最佳循环数为15个循环;间接不对称PCR的最佳反应条件为:50 μL反应体系中上、下游引物浓度的最佳比例为80:1,最佳循环数为35个循环.实验结果表明成功构建了寡核苷酸文库,在最适PCR条件下可获得理想的dsDNA和ssDNA,并具有良好的重复性,为顺利筛选适配子提供保证.

适配子是生物分子的单链寡核苷酸配体,通过指数富集的配体系统进化技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选获得.本文从连接方式、治疗靶点、疗效、优缺点多个方面对适配子介导转运在靶向肿瘤化疗、核酸治疗、光动力疗法和光热疗法中的研究进展进行概述.指出以适配体靶向肿瘤的递送系统在肿瘤相关靶向治疗中发展迅速,但仍面临许多挑战.筛选更多靶点的高亲和力适配子,改进适配子与其他治疗药物的结合模式,改善药 物的药代动力学是目前工作的重点.

目的 筛选和鉴定艰难梭菌毒素B适配子(Apt).方法 体外合成80 bp的单链DNA(ssDNA)随机文库,重组表达艰难梭菌毒素B蛋白,利用指数富集配体系统进化(SELEX)技术筛选艰难梭菌毒素B的核酸适配子.使用DNA MAN5.2.2.0软件和mfold软件筛选出的适配子序列进行同源性和二级结构的分析,并利用非竞争酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定其亲和常数.结果 经过12轮筛选,文库中随机ssDNA与艰难梭菌毒素B的结合率从0.8％ 增加到39.6％,筛选出51条适配子,二级结构最稳定的是Apt-B20,其亲和常数为3.76×10-7.结论 利用SELEX技术成功筛选出高亲和力的Apt,为临床上艰难梭菌感染的实验室快速诊断提供一定的参考依据.