磁分离是从生物样本中富集特定目标物的常用方法.传统特异性磁分离方法一般通过将抗体与磁珠偶联获得免疫磁珠的方式用于特定目标物的捕获,但由于抗体有成本高、捕获目标物后不易释放等缺点,免疫磁珠难以满足众多研究领域对同时满足目标物大批量、高特异性富集的需求.核酸适配体同抗体一样具备目标物高特异性捕获的能力,相较抗体具有制备成本低、结构简单和化学稳定性高等优点,更适合用来大批量、高特异性富集特定目标物,因此在本研究中,本文利用石墨烯对单链和双链核酸的吸附能力不同的特性,以CD63适配体为例设计了一套可以将适配体展示于石墨烯表面并用于捕获、富集和释放目标物的方法.该设计主要包括2个单元,一是可以贴附于石墨烯表面并将CD63适配体展示于石墨烯外的双链寡核苷酸支架,二是采用与支架足部序列互补的单链寡核苷酸,将所捕获的目标物从石墨烯表面解吸附.本研究首先以氧化石墨烯(GO)纸为石墨烯界面,通过对支架或CD63蛋白等进行荧光标记,并对比支架释放前后及CD63蛋白捕获前后GO纸表面荧光强度变化表示其支架释放效果与CD63蛋白捕释情况,随后应用氨基修饰的石墨烯壳铁氮磁珠搭载CD63适配体双链支架,用于捕获细胞裂解液中CD63蛋白.结果表明,该支架可以将适配体展示于石墨烯表面捕获CD63蛋白并可以可控释放,使用挑选的改性石墨烯磁珠搭载该适配体双链支架,可以用于细胞裂解液中CD63蛋白的捕获.该方法有望实现多种蛋白质的特异性富集或通过捕获外泌体膜蛋白而富集外泌体等多种用途.

心脑血管疾病是全球死亡率较高的疾病之一，严重影响人类健康。临床上常通过检测心肌损伤标志物的异常数值反映心肌损伤的严重程度，并作为心肌损伤（异常）的筛查、诊断以及预后的参考指标。介绍了金属有机骨架（MOFs）材料及其复合材料的分类，并综述了基于MOFs复合材料的电化学蛋白质传感器、电化学免疫传感器和电化学适配体传感器在检测心肌损伤标志物方面的研究进展。

目的:利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特异性结合的核酸适配子(apt)，探讨apt与BMSCs的结合方式及能力。方法:利用SELEX技术，以大鼠BMSCs为靶点，从构建的核酸文库中反复筛选、克隆、测序及分析，获得候选apt。流式细胞术测定和软件分析获得不同浓度(0、4、8、16、32、64、128、256 nmol/L)候选apt与BMSCs的结合曲线及平衡解离常数。胰酶消化实验探究apt与BMSCs结合的靶点，并观察apt体外捕获BMSCs的能力。结果:流式细胞术与荧光共聚焦实验表明SELEX筛选第9轮文库与BMSCs结合能力最高。经序列分析适配子apt7与BMSCs的亲和力最高，平衡解离常数为(11.79±0.72) nmol/L。胰酶消化实验表明当胰酶消化细胞时间超过10 min后，apt7与BMSCs的亲和力下降甚至消失。体外捕获实验表明固定于培养皿上面的apt7能体外捕获骨髓细胞液中的大鼠BMSCs。结论:本研究通过SELEX技术成功分离出能高亲和力、高特异性结合大鼠BMSCs的特异性适配子apt7，为进一步将适配子应用于组织工程支架表面招募循环干细胞研究提供了实验依据。

目的:探讨放射性同位素示踪技术在生物药临床研究中的应用价值。方法:对3名健康志愿者静脉滴注 131I标记的国际一类新药美珀珠单抗，通过测定14 d内不同时间点血样与尿样的放射性浓度，评价美珀珠单抗在健康人体内的药代动力学性质（试验1）。对6名健康志愿者静脉注射 68Ga标记的核酸适配体Sgc8，分别于不同时间点行正电子发射型计算机断层显像（PET/CT），通过测定不同器官对 68Ga Sgc8的标准摄取值，评价 68Ga-Sgc8在健康人体内的生物学分布（试验2）。对9例疑似神经内分泌瘤患者静脉注射 99mTc奥曲肽，4 h后行单光子发射和X线计算机断层扫描（SPECT/CT），测定感兴趣区放射性摄取水平；结合患者活检组织生长抑素受体亚型2（SSTR2）免疫组化染色结果，评价 99mTc-奥曲肽对SSTR2的亲和性和靶向性（试验3）。 结果:纳入试验1的3名健康志愿者均为男性，年龄分别为28、45和25岁； 131I-美珀珠单抗注射剂量分别为21.0、25.9和17.6 mg，放射性活度分别为364、420和304 MBq。纳入试验2的6名健康志愿者中男性和女性各3名，年龄（46±11）岁，范围35~63岁；放射性活度为（80±7）MBq，范围69~87 MBq。纳入试验3的9例疑似神经内分泌瘤患者中男性5例、女性4例，年龄（54±10）岁，范围39~69岁；放射性活度为（777±74）MBq，范围740~ 925 MBq。静脉滴注 131I-美珀珠单抗后，受试者血液放射性浓度在1.5 h达峰值， 131I-美珀珠单抗主要与血细胞结合，其全血清除半衰期为420 h；尿液放射性浓度在16~24 h达峰值，24 h后逐渐降低。静脉注射 68Ga-Sgc8后即刻放射性信号由强至弱的器官依次为膀胱、肾脏、心脏、子宫、肝脏、脾脏、胆囊、大肠和肺；注射药物后3 h内心脏的清除速率最快，子宫、肾脏和肝脏次之，脾脏和胆囊的清除速率较慢，大肠和肺的清除速率最慢。9例患者静脉注射 99mTc-奥曲肽后4 h体内均有放射性异常浓聚，免疫组化染色结果示SSTR2呈强阳性表达，表明 99mTc-奥曲肽对SSTR2有良好的亲和性和靶向性。安全性测试结果显示，试验1中1名受试者静脉滴注 131I-美珀珠单抗后1个月出现碘相关甲状腺功能亢进，无干预持续监测8个月后恢复正常；其余受试者均未发生不良反应。 结论:放射性同位素示踪技术可无创、动态、可视化地评价生物药在人体内的药代动力学性质、生物学分布及靶向性，安全性良好，在生物药的临床评价中具有重要的应用价值。

外泌体是一种机体内大多数细胞分泌的直径为30~150 nm，具有脂质双层膜的微小囊泡，可以直接反映分泌细胞的生理和功能状态，参与细胞间的物质运输和信息通讯，其作为肿瘤早期诊断和治疗评估的生物标志物具有重要意义。外泌体的检测方法有很多，在这些检测方法中，适配体传感器技术以其价廉易用、响应快、灵敏度高、特异性强等特点，帮助肿瘤患者早期发现，早期获得诊断，早期治疗，提高生存率，并为愈后效果的评价提供了重要依据。常见的适配体传感器有荧光、电化学、比色法、光致发光、横向流动带、表面增强拉曼散射和表面等离子体共振适配体传感器，不同的适配体传感器具有不同的特征，文章对几种常见适配体传感器检测肿瘤外泌体的研究进展进行阐述。

目的:探讨上皮细胞黏附分子（EpCAM）靶向的核酸适体药物偶连物（SYL3C-MMAE）对人胃上皮细胞GES-1（以下简称GES-1细胞）以及人胃癌细胞AGS、MKN45（以下简称AGS、MKN45细胞）的亲和力以及毒性。方法:采用实验研究方法。采用免疫组织化学染色检测胃癌组织中EpCAM的表达水平；采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（PCR）检测胃癌组织中EpCAM的mRNA表达水平；应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测GES-1、AGS、MKN45细胞中EpCAM蛋白的表达水平；通过流式细胞仪检测SYL3C对3种细胞的亲和力；通过巯基的SYL3C序列马来酰亚胺反应合成SYL3C-MMAE；采用CCK8法检测药物对细胞的毒性；碘化丙啶法检测药物处理后细胞周期情况。观察指标：（1）EpCAM在胃癌中的表达情况。（2）靶向EpCAM的抗体与SYL3C对相关细胞系的亲和力。（3）药物合成情况。（4）药物毒性检测以及细胞周期抑制情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著差异法检验；方差不齐者采用Welch' t检验。偏态分布的计量资料以 M（IQR）表示，组间比较采用配对秩和检验。计数资料以绝对数表示，组间比较采用配对 χ2检验。 结果:（1）EpCAM在胃癌中的表达情况。组织芯片免疫组织化学染色检测结果显示：35对胃癌及其癌旁组织（正常组织）中，胃癌组织EpCAM阳性率为82.9%（29/35），正常组织EpCAM阳性率为22.9%（8/35），两者比较，差异有统计学意义（ P<0.05）。实时荧光定量PCR检测结果显示：12对胃癌组织及其癌旁组织中EpCAM的mRNA相对表达水平分别为1.23（4.13）和4.04（1.72），两组比较，差异有统计学意义（ Z=-2.67， P<0.05）。Western blot检测结果显示：以AGS细胞中EpCAM蛋白表达量为标准，GES-1、AGS、MKN45细胞中，EpCAM蛋白的相对表达量分别为0、1.00、0.27。（2）靶向EpCAM的抗体与SYL3C对相关细胞系的亲和力。流式细胞仪检测结果显示：EpCAM抗体以及SYL3C均对AGS以及MKN45细胞有较好的亲和力，而对于GES-1细胞则没有亲和力。（3）药物合成情况。SYL3C与单甲基奥瑞他汀E（VcMMAE）连接合成质谱检测结果显示：合成完成后的药物原液于16 355分子量位置出现强峰，符合SYL3C-MMAE复合物的预期分子量，提示SYL3C-MMAE合成成功。（4）药物毒性检测以及细胞周期抑制情况。CCK8法检测细胞活力结果显示：VcMMAE对GES-1、AGS、MKN45细胞半抑制浓度（IC 50）分别为123.00、30.48、51.83 nmol/L。SYL3C-MMAE对于上述3种细胞的IC 50分别为241.80、20.66、27.64 nmol/L。PI法检测细胞周期结果显示：VcMMAE与SYL3C-MMAE均能引起GES-1、AGS、MKN45细胞的细胞周期发生G2/M期阻滞。 结论:SYL3C-MMAE对于胃癌细胞有较好的亲和力，与VcMMAE比较，其在高效抑制胃癌细胞的同时对正常细胞的影响显著减轻。

核酸适配体(aptamer)是1种可以和不同靶标(包括小分子、离子、病毒、细胞等)高特异性、高亲和力结合的单链DNA或RNA。该文主要介绍核酸适配体在核医学领域的研究进展，包括在SPECT和PET显像领域的研究。随着核医学相关设备和核素标记技术的发展，核酸适配体将在核医学领域中具有更广阔的应用前景。

目的:筛选血管炎性标志物脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）的DNA适体，并建立以非标记核酸适体-纳米金为探针的可视化检测方法。方法:方法学建立。通过磁珠固定SELEX技术经孵育结合、ssDNA分离、PCR扩增、单链回收的8轮循环筛选Lp-PLA2适体，利用表面等离子体共振技术和流式细胞术验证适体的亲和力和特异性，并通过计算机软件模拟适体二级结构及其与靶蛋白的三维分子对接。随后制备适体-纳米金复合物，利用靶标竞争结合导致纳米金溶液在盐诱导下凝聚引起颜色变化，分光光度计检测溶液的吸光度检测靶标浓度，建立样品溶液中Lp-PLA2浓度与吸光度的线性关系。结果:筛选获得3条高亲和力、强特异性的Lp-PLA2核酸适体B76-2、B76-4及B76-5，解离常数分别为1.07、1.26及1.75 nmol/L；并成功基于B76-2适体构建纳米金比色传感方法，其线性范围和检测限分别是20~500 ng/ml和78 ng/ml，反应时间30 min，可特异性区分靶标与其他血栓标志物如凝血酶和髓过氧化物酶。结论:利用核酸适体-纳米金显色实现了简单、快速、特异的Lp-PLA2可视化检测。

目的:制备载miR-33反义核苷酸(ANM33)的双靶标脂质超声微泡(HA-PANBs)，体外评价其分阶段靶向泡沫细胞并实现细胞内精准释药的可行性。方法:设计以纳米泡NBs为微泡核心，透明质酸(hyaluronic acid，HA)第一阶段靶向受损内皮细胞，适配子PM1第二阶段靶向泡沫细胞，ANM33为治疗因子的双靶标脂质超声微泡。完成脂质泡表征的同时检测其稳定性及体外造影能力；随后建立受损人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和巨噬细胞(RAW264.7，MΦ)共培养模型，结合流式细胞术、油红O染色和小动物活体成像仪等评价HA-PANBs体外精准定位泡沫细胞并释放ANM33的能力。结果:制备的双靶标脂质超声微泡HA-PANBs形态规则，稳定性好，粒径为(1 357.53±140.20)nm，表面电位为(－5.61±0.73)mV，HA、PM1及ANM33均有效连接。在受损HUVEC/MΦ共培养模型中，HA-PANBs靶向下层泡沫细胞的效果最佳，且有效摄取量高达(80.65±2.12)%，较NBs组高56.74%；油红O染色显示HA-PANBs组泡沫细胞的胆固醇外排能力明显优于NBs组，差异有统计学意义[(629.80±21.99)a.u.比(1 071.00±55.49)a.u.， P<0.05]。 结论:构建的双靶标脂质超声微泡HA-PANBs能精准靶向泡沫细胞并显著增强其胆固醇外排能力，为实现动脉粥样硬化的早期无创诊疗提供了新策略。

促炎细胞因子选择性诱导受体细胞的特定信号以调控宿主应答，其异常释放导致的免疫稳态失衡与多种疾病的发生发展密切相关。细胞因子特异检测对疾病诊断和疗效监测具有重要的临床意义。核酸适配体是一种高选择性和高亲和力与目标分子结合的单链寡核苷酸，在炎症性疾病特异标志物检测新方法开发中备受关注。本文综述了近年来电化学和光学适配传感器在检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、转化生长因子β、干扰素γ和白细胞介素8方面的研究进展；这不仅有助于读者全面了解核酸适配体在炎症关键细胞因子检测中的临床应用潜力及面临的挑战，也可为基于适配体的多细胞因子即时检测传感器的研制及炎症相关疾病诊断新策略的开发提供有意义的参考。