目的:了解2008年至2017年河南省睢县5岁以下腹泻患儿粪便标本中志贺菌的血清型分布和耐药情况。方法:采集2008年至2017年河南省睢县豆付元卫生室的4 721份5岁以下腹泻患儿粪便标本，细菌培养分离出志贺菌株。采用玻片凝集试验进行血清学分型。按比例选取271株志贺菌株，采用多重梯度聚合酶链反应检测毒力基因，Kirby-Bauer琼脂法进行药物敏感试验。采用趋势性卡方检验分析耐药性年度变化趋势。结果:4 721份粪便标本中志贺菌检出率为20.69%(977/4 721)。977株志贺菌共分为2群13种血清型，福氏志贺菌占77.79%(760/977)，宋内志贺菌占22.21%(217/977)，每年最常见的3种血清型呈交替变化。271株志贺菌中，福氏志贺菌优势基因携带模式为志贺菌肠毒素( Shigella enterotoxin, shET) -1＋、 shET-2＋、侵袭性质粒H抗原(invasion plasmid antigen H， ipaH)＋、侵袭相关毒力基因(invasion-associated locus, ial)＋，占84.04%(179/213)；宋内志贺菌为 shET-1－、 shET-2＋、 ipaH＋、 ial＋，占46.55%(27/58)。志贺菌对氨苄西林、萘啶酸、四环素的耐药率均>90%，对头孢吡肟和头孢他啶较敏感；对头孢噻肟、头孢吡肟、环丙沙星、氯霉素和复方磺胺甲 唑的耐药率逐年上升，差异有统计学意义( χ2＝24.027、7.232、6.039、4.764、6.809，均 P<0.05)。98.52%(267/271)的菌株对3种以上抗菌药物耐药，福氏志贺菌对环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素的耐药率均高于宋内志贺菌；对庆大霉素和复方磺胺甲 唑的耐药率均低于宋内志贺菌，差异均有统计学意义( χ2＝31.866、14.868、83.036、68.534、14.738，均 P<0.01)。 结论:2008年至2017年睢县5岁以下腹泻患儿志贺菌每年主要流行的血清型不断发生变化，不同血清分型的优势基因携带模式不同。大多数分离菌株产生了多重耐药，且不同血清型的志贺菌耐药谱不同。

目的:基于 ompK36基因GD突变，建立一种快速检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌（KPC-Kp）亚胺培南最低抑菌浓度（MIC）的方法。 方法:方法学建立。收集丽水市中心医院2011年3月至2019年12月的非重复肺炎克雷伯菌258株，PCR扩增膜孔蛋白o mpK36基因以及碳青霉烯酶基因 blaKPC、 blaNDM、 blaIMP、 blaOXA-48并测序确认，微量肉汤稀释法检测菌株亚胺培南MIC值，建立基因型与MIC值的对应模式。基于该模式，设计建立实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）快速检测MIC值的方法。利用丽水市疾控中心2017—2019年收集的159株非重复肺炎克雷伯菌进一步验证。四格表计算敏感度、特异度， Kappa检验比较RT-PCR法与肉汤稀释法结果的一致性。 结果:258株肺炎克雷伯菌中，109株未携带碳青霉烯酶基因，65株携带 ompK36基因GD突变，127株携带 blaKPC，15株携带 blaNDM，9株携带 blaIMP，未检测到 blaOXA-48。以肉汤稀释法为标准，肺炎克雷伯菌耐药基因与亚胺培南MIC值存在3种对应模式：4种碳青霉烯酶基因均阴性时，MIC≤1 mg/L，敏感度为100%（107/107），特异度为98.4%（125/127）； blaKPC阳性而 ompK36基因GD突变阴性时，4 mg/L≤MIC≤16 mg/L，敏感度为88.2%（60/68），特异度为98.8%（164/166）； blaKPC和 ompK36基因GD突变双阳性时，MIC≥32 mg/L，敏感度为96.6%（57/59），特异度为96.6%（169/175）。RT-PCR法可准确检测 blaKPC、 blaNDM、 blaIMP、 blaOXA-48基因；在产酶菌株中o mpK36基因GD突变的RT-PCR结果与测序法100%一致。以丽水市疾控中心来源的159株肺炎克雷伯菌为样本，以肉汤稀释法为参照，RT-PCR检测亚胺培南MIC值在3种模式下敏感度和特异度均大于95%， Kappa值为0.971。 结论:基于 ompK36基因GD突变建立的RT-PCR法有助于快速判断KPC-Kp的亚胺培南MIC值范围。

目的:研究耐药铜绿假单胞菌临床分离株β-内酰胺酶基因的携带状况，及其对β-内酰胺类抗菌药物耐药性的作用。方法:收集2018年3月至2019年5月浙江省杭州市和宁波市两个地区6所医院住院患者首次发现感染时临床分离的98株耐药铜绿假单胞菌，其中宁波地区39株，杭州地区59株。所有菌株采用琼脂稀释法对14种抗菌药物进行敏感性试验，采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A、B、C、D四类共39种β-内酰胺酶基因携带情况，阳性基因测序后作BLAST比对。采用SPSS 24.0软件对数据进行分析。结果:98株耐药铜绿假单胞菌中，多重耐药(MDR)菌占81.63%，广泛耐药(XDR)菌占12.25%。所有菌株对多黏菌素B敏感，对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为94.90%和82.65%，宁波地区分离株对阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素的耐药率高于杭州地区分离株( χ2＝31.962、22.440和29.671， P<0.01)，杭州地区分离株对氨曲南和亚胺培南的耐药率均高于宁波地区分离株( χ2＝4.181和5.543， P<0.05)。共检出7种β-内酰胺酶基因，其中 PDC和 OXA-50群的检出率最高，均为100.00%， TEM、GES和 OXA-10群只在宁波地区分离株中检出， KPC只在杭州地区分离株中检出。β-内酰胺酶基因阳性模式有7种，所有菌株均携带 PDC和 OXA-50群，55株(56.12%)只检出 PDC和 OXA-50群。检出 PDC、OXA-50群基因为国内首次报道。 结论:携带 PDC和 OXA-50群基因是导致铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因。

目的:了解2016年至2018年我国下呼吸道感染患儿的肺泡灌洗液病原菌分布及其对抗菌药物的耐药情况。方法:采集2016年1月至2018年12月10家三级医院收治的年龄<18岁的下呼吸道感染患儿的肺泡灌洗液标本，培养分离获得病原菌。采用纸片扩散法或最低抑菌浓度法对分离菌株进行药物敏感试验，分析病原菌的分布情况，以及菌株来源科室情况。统计学分析采用 χ2检验。 结果:共收集肺泡灌洗液阳性分离菌株1 271株，其中革兰阴性菌606株(47.7%)，革兰阳性菌628株(49.4%)，真菌37株(2.9%)。常见的病原菌依次为肺炎链球菌(466株，36.7%)、鲍曼不动杆菌(214株，16.8%)、金黄色葡萄球菌(162株，12.7%)、肺炎克雷伯菌(105株，8.3%)、流感嗜血杆菌(94株，7.4%)、铜绿假单胞菌(79株，6.2%)、洋葱伯克霍尔德菌(67株，5.3%)和大肠埃希菌(47株，3.7%)。重症监护病房(intensive care unit，ICU)来源分离菌以革兰阴性菌为主(80.1%，428/534)，其中鲍曼不动杆菌最常见(37.3%，199/534)；非ICU来源菌株以革兰阳性菌为主(70.8%，522/737)。ICU和非ICU来源菌株中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率分别为45.1%(23/51)和43.2%(48/111)，耐青霉素肺炎链球菌检出率分别为10.9%(6/55)和18.5%(76/411)，耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌检出率分别为57.3%(43/75)和33.3%(10/30)。ICU来源耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌检出率高于非ICU来源菌株[49.1%(27/55)比25.0%(6/24)]，差异有统计学意义( χ2＝3.98， P＝0.046)。耐碳青霉烯类大肠埃希菌检出率为17.0%(8/47)，耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌检出率为76.6%(164/214)。78株流感嗜血杆菌分离自非ICU患儿标本，流感嗜血杆菌对氨苄西林的耐药率为57.4%(54/94)；洋葱伯克霍尔德菌均分离自ICU患儿标本，其对哌拉西林他唑巴坦、左氧氟沙星、环丙沙星、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为13.4%(9/67)、3.0%(2/67)、0(0/67)和9.0%(6/67)。 结论:肺炎链球菌依然是我国儿童下呼吸道感染最常见的致病菌，革兰阴性杆菌是ICU下呼吸道感染患儿主要的致病菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐青霉素肺炎链球菌、耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌检出率均较高，流感嗜血杆菌对氨苄西林耐药率较高。临床经验治疗中应结合临床背景选择合适的初始抗菌药物。

目的:分析烟台市5起伤寒病原学特征及分子流行病学关联。方法:2018年自烟台市5例伤寒确诊病例样本和流行病调查样本分离获得6株伤寒沙门菌菌株，病例发病时间自2018年5月26日至7月24日，分别分布于烟台牟平区水道镇、烟台蓬莱区登州街道、烟台龙口东莱街道、烟台牟平区文化街道、烟台芝罘区福莱山街道。采用常规细菌分离方法和XbaⅠ/BlnⅠ双酶切脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对伤寒杆菌进行溯源分析，同时开展viaB毒力基因检测和27种临床常用抗生素敏感试验对伤寒杆菌进行病原学研究。结果:6株伤寒杆菌经PFGE-XbaⅠ和PFGE-BlnⅠ电泳分为4个PFGE模式，其中3株菌同源性100%；1株多耐药菌（外籍患者），1株单耐药菌（外省滞留史患者），1株完全敏感菌，同一PFGE模式的3株菌药敏表型一致，除对氨基糖甙类和喹诺酮类部分抗生素中介外，对其他抗生素均敏感； 除外籍患者标本分离株viaB基因阴性外，其他菌viaB基因均阳性。结论:烟台寒杆菌对临床常用抗生素敏感性良好，仍需重视伤寒散发病例发生和伤寒输入感染。

探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）基因组特征并进行相关聚类分析，为防治CRKP引起的感染提供实验依据。采用回顾性病例-队列研究方法，对2023年1—6月南方医科大学第十附属医院临床非重复的19株CRKP进行全基因组测序（WGS）分析和多位点序列分型（MLST），比较菌株间基因组特征，对菌株携带的耐药基因及同源性进行相关聚类分析。结果显示，19株CRKP分离自8个不同临床科室，主要来源于呼吸道标本。全基因组测序结果显示CRKP基因组长度在4.90~5.85 Mbp之间，每个CRKP基因组的重叠群（contigs）N50均>20 kb；总体GC含量中位数 M（ Q1， Q3）为 57.0%（50.4%，57.1%）；比较基因组特征发现3个基因组变异度较高的区域。WGS检测到11类共32种耐药基因，19株CRKP均携带碳青霉烯类耐药基因（ blaKPC-2和 blaOXA-48）、 blaTEM-1B超广谱β-内酰胺酶耐药基因、 qnrS1喹诺酮类耐药基因和 fosA磷霉素耐药基因，且每株菌仅携带一种碳青霉烯酶基因， blaKPC-2检出率高达94.7%（18/19）。MLST分型为ST11、ST437和ST147三种型别，ST11型占89.5%（17/19），属优势克隆型别，以获得性耐药基因为基础作聚类分析，发现菌株72和菌株90，菌株88、84、66和菌株79等耐药基因聚类分析较为接近，存在3个克隆传播模式。综上，CRKP菌株同时携带多种耐药基因，聚类分析显示院内克隆传播与获得性耐药基因密切相关，以ST11- blaKPC-2型菌株为优势菌株，应加强CRKP监控，并制定有效的防控策略，以减少院内传播。

目的:了解儿童百日咳鲍特菌感染的临床特点、菌株体外耐药模式和治疗效果，为百日咳的诊治提供参考。方法:采集2017年浙江大学医学院附属儿童医院临床疑诊为百日咳的住院患儿的鼻咽拭子培养百日咳鲍特菌，并收集患儿的临床表现资料，菌株以百日咳特异性抗血清凝集试验鉴定，并经质谱分析最终确认。药物敏感试验采用E-test法，抗菌药物治疗2周评价疗效。统计学分析采用曼-惠特尼 U检验和 χ2检验。 结果:1 029例患儿中211例(20.5%)鼻咽拭子培养百日咳鲍特菌阳性，7月份分离率最高[31.2%(45/144)]。211例患儿中，男105例(49.8%)，女106例(50.2%)，年龄为3.8(2.2，6.9)个月，114例(54.0%)未接种百白破混合疫苗。192例(91.0%)患儿在标本采集前曾使用抗菌药物，142例(67.3%)来自多孩家庭，其中136例(95.8%)为家庭中的幼子。159例(75.4%)夜间阵发性咳嗽剧烈，61例(28.9%)咳嗽后有鸡鸣样回声。白细胞计数>20×10 9/L、淋巴细胞计数>10×10 9/L的患儿分别为94例(44.5%)和97例(46.0%)。红霉素、阿奇霉素和克林霉素对138株(65.4%)菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)均>256.000 mg/L。氨苄西林、头孢曲松、头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南和甲氧苄啶/磺胺甲基异口恶唑对菌株的MIC 90分别为0.190、0.190、0.094、0.094和0.750 mg/L；哌拉西林/他唑巴坦对所有菌株的MIC均<0.016 mg/L。195例(92.4%)患儿经治疗后症状明显好转出院。76例(57.1%)经红霉素或阿奇霉素治疗满7 d症状无改善者改用或联合应用其他抗菌药物。使用头孢哌酮/舒巴坦或哌拉西林/他唑巴坦的患儿单药治疗2周[46/48(95.8%)比46/57(80.7%)]、出院后1周[45/46(97.8%)比39/47(83.0%)]和出院后2周[45/45(100.0%)比41/47(87.2%)]鼻咽部细菌阴转率均高于使用红霉素或阿奇霉素治疗的患儿，差异均有统计学意义( χ2＝5.50、5.86、6.15， P＝0.019、0.015、0.013)。 结论:百日咳患儿鸡鸣样回声较少，百日咳鲍特菌对大环内酯类抗菌药物耐药率高，头孢哌酮/舒巴坦或哌拉西林/他唑巴坦的临床应用价值值得进一步评估。

目的:探讨儿童侵袭性鲍曼不动杆菌感染的相关危险因素及耐药模式。方法:回顾性研究，收集2016年1月至2018年12月6家医院血流和脑脊液鲍曼不动杆菌培养阳性的98例住院患儿的基本信息、临床资料和抗菌药物敏感试验检测结果进行分析。根据感染菌株对碳青霉烯类的敏感性，分为碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌（CSAB）组和碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）组；根据感染可能的来源，分为医院感染组和社区感染组。组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率检验、秩和检验进行分析，采用Logistic回归分析儿童侵袭性CRAB感染的危险因素。结果:98例患儿中男56例、女42例，发病年龄8（2，24）月龄，62例（63%）来自农村。87例（89%）为血液感染，12例（12%）为脑膜炎（1例同时合并血流感染）。66例（67%）接受了侵袭性操作或手术，54 例（55%）接受了含碳青霉烯类抗菌药物的治疗。CRAB组24例、CSAB组74例。CRAB组患儿起病年龄低于CSAB组［4（1，9）比10（4，24）月龄， Z=-2.16， P=0.031］，CRAB组患儿在重症监护病房住院、接受碳青霉烯类抗菌药物治疗、合并肺炎及发生不良预后的比例均高于CSAB组［6例（25%）比 4例（5%）、18例（75%）比36例（49%）、17例（71%）比 17例（23%）、6例（25%）比4例（5%），χ 2=5.61、5.09、18.32、5.61，均 P<0.05］。医院感染组77例、社区感染组21例。医院感染组患儿在院内感染高危病房住院的比例、住院时间、接受抗菌药物治疗种类、抗菌药物治疗时间均高于社区感染组（均 P<0.05）。Logistic回归分析显示农村地区居住（ OR=8.42，95% CI 1.45~48.88）、先前机械通气（ OR=12.62，95% CI 1.31~121.76）、先前的抗菌药物治疗（ OR=4.90，95% CI 1.35~17.72）是CRAB感染的独立危险因素。CSAB菌株庆大霉素耐药率为20%（13/65），其他抗菌药物的耐药率均<6%，而CRAB分离株对氨苄西林-舒巴坦（20/20）、头孢吡肟（23/23）、派拉西林（17/17）、美罗培南（23/23）和亚胺培南（24/24）耐药率均为100%，其他抗菌药物耐药率也高达42%~96%。 结论:我国儿童侵袭性鲍曼不动杆菌感染多数为医院感染。侵袭性CRAB感染患儿预后更差，分离到的CRAB菌株耐药率高。农村地区居住、先前机械通气和先前抗菌药物治疗是侵袭性CRAB感染的独立危险因素。应加强院感防控和抗菌药物管理，降低鲍曼不动杆菌的感染。

目的:检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株分子特征分析，为肺炎球菌疫苗的临床评价奠定基础。方法:对24株检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株的16S rRNA基因片段进行PCR扩增、测序，并运用多位点序列分析(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)等方法，对相关菌株进行分子分型。结果:16S rRNA基因序列比对结果显示24株菌株的基因序列与肺炎链球菌模式株NCTC 7465的16S rRNA基因序列(LN831051)的相似性在98.35%~99.86%之间，碱基的差异在2~23 bp；多位点序列分析结果显示24株标准菌株的ST型各不相同；PFGE分析结果表明24株标准菌株100~1 000 Kb大小的DNA片段得到了较好的分离效果，各血清群/型的菌株各具其特征性的条带(12~15个片段)。结论:本研究发现检测肺炎球菌疫苗功能性抗体的标准株的ST型和PFGE图型均不相同，具有代表性，为肺炎球菌功能性抗体检测用标准菌株质量控制方法提供参考。

目的:调查儿童社区获得性铜绿假单胞菌（CAPA）感染的临床特征、预后和细菌耐药性。方法:回顾性队列研究，纳入2016年1月至2018年12月在我国6家三级医院进行血培养铜绿假单胞菌阳性的社区获得性感染的91例患儿为研究对象。根据菌株分离地区，分为海南地区组和其他地区组，分析比较菌株的耐药模式、临床特征、治疗和预后资料。组间比较采用 χ2检验、Mann-Whitney U检验。 结果:91例患儿中男63例、女28例，就诊年龄22.5（5.4，44.0）月龄。海南地区组74例、其他地区组17例。24例（26%）患儿有基础疾病，常见首发症状有发热79例（87%）、咳嗽64例（70%）、喘息8例（9%）、腹泻3例（3%）和呕吐4例（4%）。28例（31%）患儿合并其他器官感染，肺炎22例（24%）、皮肤感染5例（5%）、脑膜炎、腹腔感染和上尿路感染各1例（1%）。CAPA菌株对头孢吡肟［4%（4/90）］、阿米卡星［1%（1/90）］、环丙沙星［2%（2/90）］、左氧氟沙星［1%（1/89）］的耐药率较低，对头孢他啶、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、碳青霉烯类药物的耐药率分别为12%（11/90）、3/16、18%（10/56）和6%（5/90）。52%（47/91）患儿接受联合抗菌药物进行合适的经验性治疗，59%（52/88）患儿接受联合目标治疗。放弃治疗2例（2%），死亡3例（3%）。其他地区组CAPA感染不良预后比例高于海南地区组［4/17比1%（1/74）， χ2=9.74， P<0.05］。 结论:儿童CAPA血流感染存在区域发病差异，患儿的临床症状和体征不典型，分离到的CRPA菌株耐药率低。海南地区患儿不良预后较其他地区患儿比例低。