目的:探讨外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体3（TLR3）信号通路的活化在重组HBsAg（rHBsAg）免疫应答中的作用及机制。方法:收集13名健康献血者外周血制备血液制品时滤除的白细胞，分离培养PBMC后分别给予TLR3激动剂聚肌苷酸-聚胞苷酸（Poly I：C组）及PBS（对照组）处理，48 h后收集部分细胞，采用流式细胞术检测TLR3信号通路蛋白水平；在活化（Poly I：C组）/未活化（对照组）TLR3信号通路后，采用rHBsAg处理两组PBMC 72 h，采用流式细胞术检测PBMC中树突状细胞（DC）、T、B淋巴细胞及其亚群比例。采用配对 t检验、配对资料的符号秩和检验和典型相关分析进行统计学分析。 结果:Poly I：C组PBMC TLR3信号通路中TLR3蛋白阳性细胞百分比（19.21%）、TLR3蛋白表达量（8 983.95）、NF-κB蛋白的表达量（26 193.13）、磷酸化NF-κB（pNF-κB）蛋白阳性细胞百分比（13.73%）及其占NF-κB的比例（16.03%）、磷酸化IRF3（pIRF3）蛋白阳性细胞百分比（12.64%）及其占IRF3的比例（21.80%）均明显高于对照组（分别为11.54%、8 086.00、22 340.66、8.72%、9.71%、9.57%、19.12%）（ P<0.05），TRIF蛋白阳性细胞百分比（89.75%）和蛋白表达量（304 219.54）均高于对照组（89.64%、288 149.72）（ P>0.05）；经rHBsAg处理后，Poly I：C组髓样DC（mDC）（2.90%）、浆细胞样DC（1.80%）、B细胞（5.31%）比例及浆细胞占B细胞比例（67.71%）均明显高于对照组（1.83%、0.81%、4.23%、58.82%）（ P<0.05）；TLR3信号通路相关蛋白阳性细胞百分比和蛋白表达量与免疫细胞之间均存在典型相关，TLR3蛋白表达量与浆细胞比例、pIRF3蛋白表达量与浆细胞和mDC比例、pNF-κB和pIRF3蛋白阳性细胞百分比与CD4 +T细胞的比例均正相关。 结论:Poly I：C可以活化PBMC TLR3/TRIF/NF-κB和TLR3/TRIF/IRF3信号通路，促进下游信号分子发挥功能，进而促进DC的成熟，诱导CD4 +T细胞免疫反应，促进B细胞的成熟分化，促进rHBsAg的免疫应答。

目的:研究耐药铜绿假单胞菌临床分离株β-内酰胺酶基因的携带状况，及其对β-内酰胺类抗菌药物耐药性的作用。方法:收集2018年3月至2019年5月浙江省杭州市和宁波市两个地区6所医院住院患者首次发现感染时临床分离的98株耐药铜绿假单胞菌，其中宁波地区39株，杭州地区59株。所有菌株采用琼脂稀释法对14种抗菌药物进行敏感性试验，采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A、B、C、D四类共39种β-内酰胺酶基因携带情况，阳性基因测序后作BLAST比对。采用SPSS 24.0软件对数据进行分析。结果:98株耐药铜绿假单胞菌中，多重耐药(MDR)菌占81.63%，广泛耐药(XDR)菌占12.25%。所有菌株对多黏菌素B敏感，对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为94.90%和82.65%，宁波地区分离株对阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素的耐药率高于杭州地区分离株( χ2＝31.962、22.440和29.671， P<0.01)，杭州地区分离株对氨曲南和亚胺培南的耐药率均高于宁波地区分离株( χ2＝4.181和5.543， P<0.05)。共检出7种β-内酰胺酶基因，其中 PDC和 OXA-50群的检出率最高，均为100.00%， TEM、GES和 OXA-10群只在宁波地区分离株中检出， KPC只在杭州地区分离株中检出。β-内酰胺酶基因阳性模式有7种，所有菌株均携带 PDC和 OXA-50群，55株(56.12%)只检出 PDC和 OXA-50群。检出 PDC、OXA-50群基因为国内首次报道。 结论:携带 PDC和 OXA-50群基因是导致铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因。

目的:评估一款具有服药提醒功能的智能手表对心房颤动(房颤)患者口服抗凝药物(OAC)依从性的影响。方法:将2018年10月至2019年12月来自6家医疗中心的210例正在接受OAC治疗的房颤患者随机数字抽样法分为标准随访组和智能手表提醒随访组。标准随访组通过随访护士进行电话及门诊随访，智能手表提醒随访组在标准随访的基础上，还通过一款智能手表进行随访。该手表具备每日服药提醒、漏服报警、上传反馈功能，未按时服药时会将信息反馈至随访终端，由随访护士人工电话督促服药。通过Morisky用药依从性问卷(MMAS-8)及药片计数法[服药天数所占比例(PDC)法]评价药物依从性。药物依从性良好的定义为MMAS-8问卷评分＝8分或PDC≥80%。所有患者均随访12个月。比较两组MMAS-8及PDC法计算患者药物依从性。结果:标准随访组MMAS-8评分＝8分的比例由第1个月时的82.9%下降到第12个月时的27.8%；智能手表提醒随访组MMAS-8评分＝8分的比例从第1个月时的75.2%提高至第12个月时的86.3%。从第7个月开始，智能手表提醒随访组的MMAS-8评分＝8分的比例显著高于标准随访组(66.7%对51.0%， P＝0.025)。标准随访组PDC≥80%的比例从第1个月时的72.4%降至第12个月时的16.7%；而智能手表提醒随访组每个月的PDC≥80%的患者比例均超过90%，且随访期间均高于标准随访组( P<0.001)。 结论:智能手表服药提醒辅助随访可以持续改善房颤患者OAC治疗的依从性。

原发性胆汁性胆管炎（PBC）是一种以慢性进行性胆汁淤积为主要特征的自身免疫性肝病，针对自身抗原——丙酮酸脱氢酶复合体E2亚单位（PDC-E2）免疫耐受性的丧失是PBC发病的根源。肝内胆管上皮细胞特有的免疫生物学特性使其成为PBC发病的积极参与者。近年来，PBC的检出率逐年提高，但临床上仍未改变熊去氧胆酸单一用药的格局，深入了解PBC的免疫发病机制将有助于临床医师更好地预防和治疗疾病。

目的:探讨儿童颅底SMARCB1/INI1缺失性差分化脊索瘤（poorly differentiated chordoma，PDC）的临床病理特点及鉴别诊断。方法:整理2017年3月至2021年3月首都医科大学三博脑科医院诊断的脊索瘤139例，其中5例诊断为SMARCB1/INI1缺失性的PDC，收集此5例患者的临床影像学资料，进行HE和免疫组织化学染色、DNA甲基化测序检测，并复习相关文献。结果:5例PDC均发生在中颅底斜坡，平均年龄6.4岁（3~16岁）；3例女性，2例男性。形态学上，缺乏脊索瘤的典型形态学特征，表现为成片或巢片状分布的上皮样或梭形肿瘤细胞，核分裂象活跃，均见坏死，可见肿瘤浸润周围组织。免疫表型特征上，表达脊索瘤常见免疫标志物广谱细胞角蛋白（CKpan）、上皮细胞膜抗原（EMA）、波形蛋白及brachyury，同时SMARCB1/INI1核表达缺失。2例S-100蛋白阳性，Ki-67阳性指数高（20%~50%），均存在p53过表达。需要与儿童颅底发生的SMARCB1/INI1缺失性肿瘤或具有上皮样和梭形细胞形态学特征的肿瘤进行鉴别。其中3例的甲基化特征不同于任何儿童非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤亚组，构成独立的DNA甲基化特征簇。本组5例患者临床预后均很差，总体生存时间2~17个月。结论:PDC属于新认识的SMARCB1/INI1缺失性的特殊类型脊索瘤，多见于儿童，常累及颅底；表现为上皮样或梭形细胞的形态特征，具有脊索瘤的典型免疫表型特征，同时存在SMARCB1/INI1表达缺失，并具有独特的表观遗传特征。

目的:初步探讨序贯应用保守治疗、经皮经肝胆管引流(PTCD)、腹腔镜胆囊切除术(LC)+腹腔镜胆总管探查术(LCBDE)+一期胆管缝合(PDC)治疗胆总管结石(CBDS)合并胆囊结石伴急性胆管炎的临床应用价值。方法:回顾分析2015年1月至2020年8月多中心CBDS合并胆囊结石伴急性胆管炎397例患者临床资料，包括首都医科大学附属北京朝阳医院西院230例、滨州市第二人民医院95例和日照市中心医院72例。序贯应用保守治疗、PTCD和LC+LCBDE+PDC进行治疗。分析PTCD至LCBDE时间间隔、PTCD后血清总胆红素和丙氨酸氨基转移酶(ALT)下降情况、LC+LCBDE+PDC手术时间、术中出血量等。术后腹腔引流管及PTCD管留置时间、术后住院时间、术后并发症等。结果:入组患者33例，男性15例，女性18例，平均年龄57.5岁。经PTCD引流后，血清总胆红素从(148.3±36.8)μmol/L降至(32.6±5.9)μmol/L，ALT从(172.6±26.9)U/L降至(45.7±7.2)U/L，PTCD至LCBDE时间间隔(25.3±2.6)d。手术时间(95.4±14.2)min，术中出血量(35.2±9.5)ml，术后住院时间(12.4±3.5)d。腹腔引流管和PTCD管留置时间分别为(10.6±2.3)d和(25.8±4.7)d。术后发生胆瘘3例(9.1%)、腹腔出血1例(3.0%)、胆道出血1例(3.0%)、脐部切口感染1例(3.0%)、胆总管下端狭窄2例(6.1%)，均经保守治疗后痊愈。结论:序贯应用保守治疗、PTCD和LC+LCBDE+PDC治疗CBDS合并胆囊结石伴急性胆管炎是一种安全、有效和微创的方式，可作为内镜逆行胰胆管造影的替代，具有推广价值。

目的:评估聚乙二醇干扰素-α2b（PEG-IFN-α2b）治疗骨髓增殖性肿瘤（MPN）的有效性及安全性。方法:前瞻性纳入2019年8月至2022年10月天津医科大学第二医院34例接受PEG-IFN-α2b治疗的MPN患者，其中男9例，女25例，年龄［ M（ Q1， Q3）］为57（19，78）岁。收集患者的临床特征，并进行随访。截至2023年1月30日，随访时间［ M（ Q1， Q3）］为24（16，33）个月。分析治疗后12、24个月的疗效、安全性及免疫细胞、细胞因子水平等变化情况。 结果:随访期间脱落4例，可评估疗效的患者为30例，治疗12、24个月血液学完全缓解率（CHR）分别为57.1%（16/28）、75.0%（18/24），分子学完全缓解率（CMR）+分子学部分缓解率（PMR）分别为27.3%（6/22）、55.0%（11/20），骨髓组织病理总反应率（ORR）分别为34.6%（9/26）、47.6%（10/21）。治疗12、24个月时CD8 +HLA-DR +T细胞、效应T细胞亚群、CD56 bright自然杀伤（NK）细胞、浆细胞样树突状细胞（pDC）比例均较治疗前增加，CD56 dim NK细胞比例较治疗前降低（均 P<0.05）；骨髓中C-X-C基序趋化因子10（CXCL10）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、TNF-β水平均较治疗前增高，血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素（IL）-4水平均较治疗前下降（均 P<0.05）。血液学不良反应中白细胞减少发生率较高，为47%（16/34），非血液学不良反应中乏力、转氨酶升高发生率较高，分别为44.1%（15/34）、32.3%（11/34）。 结论:PEG-IFN-α2b治疗MPN具有较高的血液学、分子学及骨髓组织病理反应率，具有降低恶性克隆负荷、调节免疫微环境等作用，总体安全耐受性较好。

胆管探查术(CBDE)是治疗肝内外胆管结石的经典手术方式，胆管内置T管外引流术(TTD)和一期胆管缝合术(PDC)是胆管切开后修复胆管的两种手段。复习早期文献可知，尽管1889年实施的第一例CBDE采用了PDC术式修复胆管，随之，人们也认识到了CBDE后PDC在安全性和微创性方面均优于TTD，疗效方面无明显差异。但直到现在，CBDE后修复胆管仍以TTD为主要手段，PDC并没有像早年预期的那样获得广泛应用，其技术规范尚未确立，PDC和TTD的适应证和禁忌证尚无明晰的界定。本文通过回顾PDC一百三十多年的发展历程，总结其在不同发展阶段的临床应用研究状况，对其未来发展趋势进行展望。

目的:构建并制备表达人CD137L蛋白的5型重组腺病毒（Ad5-CD137L），并初步研究其在小鼠中的抗肿瘤免疫效果。方法:将密码子优化CD137L蛋白的表达基因插入pDC316穿梭质粒,并与pBH-GloxΔE1,3Cre腺病毒骨架质粒，共同转染HEK293细胞，构建Ad5-CD137L种子。扩增并纯化后，对所得Ad5-CD137L重组腺病毒的插入目的基因与蛋白表达情况进行鉴定。检测Ad5-CD137L在C57BL/6小鼠体内的特异性细胞免疫和抗肿瘤免疫水平。结果:成功地构建了Ad5-CD137L，PCR和测序结果表明插入目的基因与构建理论值相符。免疫荧光法鉴定Ad5-CD137L能在HEK293细胞中表达目的蛋白，经Western印迹法鉴定该目的蛋白的相对分子质量约为25 000，与理论值相符。与空腺病毒相比，Ad5-CD137L能显著诱导小鼠特异性IFN-γ（ t=6.315， P=0.003），抗肿瘤免疫效果更显著（ t21 d=8.275， t29 d=4.492； t39 d=5.101， P均<0.001）。 结论:成功构建了Ad5-CD137L，该重组病毒具有特异性细胞免疫原性和抗肿瘤免疫效果。

目的:探讨不同疾病状态下SLE患者外周血髓样树突状细胞（mDC）和浆样树突状细胞（pDC）的频率及肾脏损伤的关系。方法:应用流式细胞术检测102例SLE患者和10名健康对照组外周mDC和pDC的频率，分析与疾病活动度及肾脏损伤的关系。定量资料采用中位数（第25百分位数，第75百分位数）[ M（ P25， P75）]表示，非正态分布的2组计量资料采用Mann-Whitney U检验，2组计量资料的相关性采用Spearman秩相关分析，相关因素分析采用多元线性回归进行统计分析。 结果:102例SLE患者外周血pDC[14.00%（7.92%，19.65%）和24.55%（19.68%，32.90%）， Z=-3.163， P<0.01]和mDC[21.25%（13.28%，32.83%）和34.85%（24.58%，41.93%）， Z=-2.607， P<0.01]频率显著低于健康对照组，12例初发SLE患者pDC[9.09%（7.31%，17.38%）和24.55%（19.68%，32.90%）， Z=-3.033， P<0.01]和mDC[9.40%（7.88%，21.60%）和34.85%（24.58%，41.93%）， Z=-3.231， P<0.01]频率也显著低于健康对照组。校正混杂因素后，多因素分析示SLEDAI水平是影响pDC（ P=0.019）和mDC（ P<0.01）频率的主要因素。活动期LN患者pDC频率[8.02%（1.00%，10.40%）和14.60%（1.73%，38.0%）， P=0.045]及mDC[8.80%（5.20%，13.20%）和13.90%（5.27%，40.20%）， P=0.038]频率均显著低于非LN活动期患者。此外，活动期LN患者pDC[8.02%（2.25%，9.97%）和16.70%（11.80%，24.60%）， Z=-2.490， P=0.015]和mDC[8.80%（5.99%，12.80%）和20.20%（11.20%，42.80%）， Z=-2.226， P=0.029]频率也均显著低于稳定期LN患者。mDC频率与补体C3（ r=0.455， P<0.01）和C4（ r=0.289， P<0.01）水平呈正相关。 结论:SLE患者mDC和pDC频率存在明显异常，并与疾病活动密切相关。另外，pDC和mDC可能参与LN的发生发展。