目的 研究橄榄苦苷对人骨肉瘤MG-63细胞的活性的影响.方法 PBS溶解配置不同浓度的橄榄苦苷(0、25、50、100、200、400 μg/mL)处理MG-63细胞24 h或48 h,CCK8、克隆形成实验分析细胞的活性及增殖能力的变化;Annexin-V/PI双染法分析细胞的凋亡水平.结果 橄榄苦苷处理后,MG-63细胞活性及增殖能力显著降低,且凋亡水平显著增加(P＜0.05),48 h的IC50低于24 h的IC50,对肿瘤细胞的抑制作用与橄榄苦苷的浓度和处理时间成正比(P＜0.05).结论 橄榄苦苷对人骨肉瘤细胞株MG-63的活性和增殖能力具有抑制能力,能够诱导MG-63的凋亡.

目的 观察橄榄苦苷对子宫内膜癌化疗耐药性的影响以及RhoA/ROCK信号通路发挥的作用.方法 体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa,建立Ishikawa细胞顺铂(DDP)耐药细胞株,设对照组、DDP组、橄榄苦苷-L+DDP组、橄榄苦苷-M+DDP组、橄榄苦苷-H+DDP组;CCK8实验检测各组Ishikawa/DDP细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组Ishikawa/DDP细胞凋亡率;RT-PCR实验检测各组Ishikawa/DDP细胞RhoA、ROCK1 mRNA水平;Western Blot实验检测各组Ishikawa/DDP细胞RhoA、ROCK1、Cleaved-Caspase3/Cas-pase3、基质金属蛋白酶2(MMP2)、Ki67蛋白水平.结果 与对照组比较,DDP组Ishikawa/DDP细胞各指标无显著性差异(P＞0.05),橄榄苦苷-L、M、H+DDP组Ishikawa/DDP细胞RhoA、ROCK1 mRNA水平、RhoA、ROCK1、MMP2、Ki67蛋白水平均显著性降低,增殖抑制率、凋亡率、Cleaved-Caspase3/Caspase3水平显著性升高,呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 橄榄苦苷可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路提高子宫内膜癌耐药细胞株Ishikawa/DDP对DDP的敏感性,减轻子宫内膜癌DDP化疗耐药性.

目的 初步探讨橄榄苦苷(Ole)调节白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路对肺癌细胞恶性生物学行为的影响.方法 MTT法检测细胞增殖抑制率,筛选Ole最佳干预浓度;将A549细胞分为对照组、Ole低、中、高剂量组、rIL-6组(Ole高剂量+IL-6/STAT3通路激活剂).A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡依次用EdU染色、Transwell、流式细胞术检测;增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)及IL-6/STAT3信号通路蛋白表达用Western Blot法检测;构建肺癌移植瘤模型,测定移植瘤的体积和质量,免疫组化检测移植瘤中Ki-67、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,TUNEL染色检测肿瘤组织细胞凋亡.结果 与对照组比较,Ole低、中、高剂量组EdU阳性细胞率、迁移与侵袭细胞数、PCNA、MMP-2、IL-6、p-STAT3/STAT3表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3表达显著升高(P＜0.05);IL-6/STAT3通路激活剂rIL-6减弱了 Ole对A549恶性生物学行为抑制作用(P＜0.05);体内实验表明,Ole显著降低移植瘤质量、体积及Ki-67、MMP-9、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达,升高肿瘤细胞凋亡率(P＜0.05).结论 Ole在体内体外可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路,进而抑制A549细胞的恶性生物学行为.

目的 探讨橄榄苦苷(OL)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜炎症的影响.方法 采用改良的Hulth法构建KOA大鼠模型,并随机分为Model组、低剂量OL组(20 mg/kg)、高剂量OL组(40 mg/kg)、高剂量OL+VT103组(40 mg/kg+10 mg/kg YAP/TAZ抑制剂),每组12只,另取12只大鼠作为正常对照组(NC组).观察各组大鼠的情况,Lequesne MG评分对各组大鼠行为学进行评估;ELISA试剂盒检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的表达;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织的病理损伤;qRT-PCR法检测滑膜组织中YAP和TAZ mRNA的表达;Western blot检测大鼠滑膜组织中YAP、磷酸化YAP(p-YAP)、磷酸化TAZ(p-TAZ)、TAZ、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与NC组比较,Model组大鼠Lequesne MG评分升高、血清中 TNF-α 和 IL-6 的表达增加、YAP 和 TAZ mRNA 表达增加、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax 蛋白表达升高(P＜0.05);与 Model组比较,低剂量、高剂量OL组大鼠Lequesne MG评分降低、血清中TNF-α和IL-6的表达减少、YAP和TAZ mRNA表达减少、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax蛋白表达降低(P＜0.05);VT103可明显减弱OL对KOA大鼠滑膜组织的保护作用(P＜0.05).结论 OL可能通过激活YAP/TAZ信号通路减轻膝骨关节炎大鼠滑膜炎症.

目的:建立HPLC法同时测定二十味沉香丸中紫丁香苷、松果菊苷、连翘酯苷、橄榄苦苷的含量.方法:采用Sunfire-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈-0.1%醋酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为 280、330 nm;柱温为 30℃,进样量为 20 μL,测定 8 批二十味沉香丸中上述 4 个成分的含量.结果:紫丁香苷、松果菊苷、连翘酯苷、橄榄苦苷分别在 19.110～229.321 μg/mL(r=0.9999)、2.506～30.067 μg/mL(r =0.9998)、21.785～261.426 μg/mL(r=0.9999)、30.151～361.817 μg/mL(r=0.9999)的浓度范围内与峰面积的线性关系良好,平均加样回收率分别为 99.42%、98.90%、98.37%、100.06%,RSD 分别为 2.39%、2.20%、2.78%、2.87%.结论:该研究建立的方法简便、准确,重复性好,可为二十味沉香丸的质量控制提供参考.

目的 探讨龙胆苦苷通过过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)通路对胆汁淤积性肝损伤的影响及作用机制.方法 ①48只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组、模型组[α-萘基异硫氰酸酯(ANIT),灌胃]、熊去氧胆酸组(200 mg/kg,灌胃)以及龙胆苦苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg,灌胃),每组8只.各组小鼠连续给予相应干预措施7 d.第5天给药6 h后,正常组灌胃给予空白橄榄油溶液,其余各组小鼠灌胃给予ANIT诱导胆汁淤积性肝损伤.给药结束后,观察小鼠体质量变化;记录肝脏质量,计算肝脏指数;检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBil)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测肝组织PPAR-α、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;Western blot法检测小鼠肝脏中PPAR-α、细胞色素P4503A4(CYP3A4)、肉碱棕榈酰转移酶2(CPT2)以及组成型雄甾烷受体(CAR)蛋白表达.②采用L02人肝细胞进行体外实验,建立牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDC)胆汁淤积性肝细胞损伤模型,采用10、50、100 μmol/L龙胆苦苷进行干预.测定细胞上清液中AST、ALT、TBA的含量;RT-qPCR法验证肝细胞中PPAR-α、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA表达;Western blot法检测肝细胞中PPAR-α、CYP3A4、CPT2以及CAR蛋白表达.③另在TCDC胆汁淤积性肝细胞损伤模型基础上,采用PPAR-α激动剂(非诺贝特)和抑制剂(GW6471)进行PPAR-α拮抗实验.Western blot法检测肝细胞中PPAR-α、CYP3A4、CPT2、CAR蛋白表达.结果 ①龙胆苦苷可下调胆汁淤积性肝损伤小鼠血清中AST、ALT、TBA、TBil含量(P<0.05),并改善小鼠肝脏病变情况.②龙胆苦苷可上调胆汁淤积性肝损伤模型小鼠肝组织和模型细胞中PPAR-α mRNA水平,降低促炎细胞因子NF-κB、TNF-α、IL-1β的mRNA水平.③龙胆苦苷能上调胆汁淤积性肝损伤小鼠肝组织PPAR-α、CYP3A4、CPT2蛋白水平,降低CAR蛋白水平.④PPAR-α抑制剂可降低龙胆苦苷对胆汁淤积性肝损伤细胞中PPAR-α的上调作用,并进一步影响PPAR-α对于CYP3A4、CPT2、CAR蛋白的调控作用.结论 龙胆苦苷可通过上调PPAR-α蛋白调控胆汁酸相关蛋白CYP3A4、CPT2、CAR表达,进而降低NF-κB、TNF-α、IL-1β等促炎细胞因子水平,从而发挥抗胆汁淤积性肝损伤的作用.

目的 该研究的目的是探究植物来源的橄榄苦苷对GDM小鼠的作用及相关机制.方法 构建GDM小鼠模型,腹腔注射橄榄苦苷(10 mg·kg-1·d-1),记录体质量和血糖水平.通过ELISA和RT-qPCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平来评估GDM小鼠的炎症水平,通过Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的活化,通过比较产仔数和出生体质量来分析妊娠结局.结果 橄榄苦苷可以减轻GDM小鼠体质量的升高,并有效降低血糖,恢复胰岛素敏感性.橄榄苦苷治疗还可以降低氧化应激和炎症水平,激活GDM小鼠肝脏组织中的AMPK信号通路,并且橄榄苦苷治疗显著改善了小鼠妊娠结局.结论 橄榄苦苷可以有效缓解GDM症状并改善模型小鼠的妊娠结局,这种效果是通过减弱由AMPK信号通路介导的氧化应激和炎症来实现的.

目的 研究龙胆苦苷对大鼠肝纤维化中肝脏中的转化生长因子(TGF)-β1 和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1表达水平的影响.方法 80 只雄性SD大鼠正常喂养 2 w后随机分成 4 组,正常组 5 只,模型组、秋水仙碱组、龙胆苦苷组各 25 只.各组均普通饲料喂养.模型组、秋水仙碱组和龙胆苦苷组每周腹腔注射 2 次 40%四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液(1 ml/kg),正常组和模型组每周灌胃 10 ml/kg的生理盐水 3 次,龙胆苦苷组每周灌胃龙胆苦苷(100 mg/kg)3 次,秋水仙碱组每周灌胃秋水仙碱(0.12 mg/kg)3 次,龙胆苦苷与秋水仙碱均溶于生理盐水中,按 10 ml/kg灌胃.实验中实时监测大鼠体质量变化.在第 3、5、7 周各处死 1 只大鼠,取肝组织,进行苏木素-伊红(HE)染色观察肝纤维化程度.第 8 周处死全部大鼠,取肝脏进行HE、Masson、免疫组化染色.结果 HE和Masson染色结果显示:正常组肝组织无纤维化,与正常组相比,模型组肝组织肝小叶结构被破坏,大量纤维间隔形成.与模型组相比较,秋水仙碱组与龙胆苦苷组肝纤维化程度较模型组均显著改善(P<0.05);秋水仙碱组与龙胆苦苷组的治疗效果相比较无显著性差异(P>0.05).经免疫组化检测结果显示:TGF-β1 和TIMP-1在正常组肝组织中无表达,在模型组中表达强阳性,在秋水仙碱组、龙胆苦苷组中的表达量较模型组显著下降(P<0.05);秋水仙碱组与龙胆苦苷组表达相比较无显著性差异(P>0.05).结论 龙胆苦苷可能通过降低大鼠肝组织中TGF-β1和TIMP-1表达水平,降低肝纤维化程度,从而实现对大鼠肝脏纤维化的预防治疗作用.

目的 研究橄榄苦苷对胃癌细胞AGS细胞的生物学行为的影响和机制.方法 将AGS细胞分别为对照组、橄榄苦苷低剂量组、橄榄苦苷中剂量组、橄榄苦苷高剂量组、miR-NC组、miR-4792 组、橄榄苦苷+anti-miR-NC组、橄榄苦苷+anti-miR-4792 组.运用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验检测AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力.实时定量PCR检测miR-4792 表达.结果 与对照组比较,橄榄苦苷低、中、高剂量组AGS细胞克隆形成数、侵袭数量、划痕愈合率、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)表达量显著降低,增殖抑制率、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达、miR-4792表达量显著升高(P＜0.05).与miR-NC组比较,miR-4792 组AGS细胞克隆形成数、侵袭数量、划痕愈合率、N-cadherin蛋白表达显著降低,增殖抑制率、E-cadherin蛋白表达显著升高(P＜0.05).与橄榄苦苷+anti-miR-NC组比较,橄榄苦苷+anti-miR-4792 组AGS细胞克隆形成数、侵袭数量、N-cadherin蛋白表达、划痕愈合率显著增加,增殖抑制率、E-cadherin蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 橄榄苦苷可抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭,这种抗肿瘤活性可能是通过上调miR-4792 表达介导的.

目的:分析酒制对女贞子饮片中主要化学成分含量的影响,为完善女贞子及酒女贞子饮片的质量标准提供实验依据.方法:采用HPLC,流动相乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长224 nm,柱温35℃,对女贞子及酒女贞子饮片中主要化学成分进行定量分析.结果:与相同企业或同一企业同一批次女贞子饮片比较,酒女贞子饮片中特女贞苷和橄榄苦苷的含量均明显降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量有不同程度的升高;其中红景天苷、酪醇及羟基酪醇的质量分数分别升高了200％,5％,40％以上.结论:酒制后女贞子饮片化学成分含量的变化主要是由于特女贞苷在高温及水蒸气的作用下会水解生成红景天苷,红景天苷进一步水解生成酪醇;橄榄苦苷在高温下不稳定,同样发生水解,生成羟基酪醇;从而导致特女贞苷和橄榄苦苷的含量显著降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量增高.