近年来,我国心血管疾病发病率和病死率仍在升高,疾病负担下降的拐点尚未出现.经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)技术是治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的有效手段,其中药物洗脱支架及药物涂层球囊是目前临床中最常用的2种PCI器械,但仍存在再狭窄及晚期血栓事件的问题.如何在保护内皮细胞活性的同时抑制血管平滑肌细胞增殖,进而既抑制再狭窄又抗血栓形成,是研究的热点及难点.中药单体及提取物尤其是中药单体组合涂层具有多靶点潜力,是对人工合成化合物涂层的重要补充.该文综述了应用于PCI器械药物涂层的中药单体(三氧化二砷、紫杉醇、水蛭素、川芎嗪、大黄素、苦参素、姜黄素等)、中药单体组合(紫杉醇/水蛭素、栀子苷/黄芩苷)、中药提取物(莪术提取物、昆明山海棠提取物),并对其中存在的问题及未来发展进行讨论,以期为研发新的PCI器械提供参考.

1型糖尿病肾病可由于其初始血糖高,进展迅速,其治疗侧重控制血糖和蛋白尿,以延缓肾脏损伤进展.全小林院士将糖尿病肾病病因病机归纳为"虚、瘀、浊",虚是始动因素,瘀是全程表现,浊是最终结局,并指出"瘀"贯穿整个糖尿病肾病全过程,在治疗时应"全程通络".本验案患者从2017年确诊糖尿病肾病Ⅲ期后,于仝小林院士门诊规律就诊,从2020年11月至今,患者24h尿蛋白定量稳定在100mg/24h以下,未再升高到异常值.治疗过程中,仝小林院士根据患者病情的变化调整方剂,补气活血通络,缓解微血管损伤.现将总结医案,望对1型糖尿病肾病的治疗提供参考.

糖尿病肾病是常见的慢性疾病之一,临床目前缺乏有效的针对性治疗手段.柳红芳教授中西医融会贯通,根据数十年临床经验,将"平治于权衡,去宛陈莝"理论应用于糖尿病肾病的治疗,以病统证审查病机,治疗全过程紧扣该病"精损络痹"的核心病机.临证运用熟地黄-黄芪-山茱萸角药填精补肾、平衡阴阳以平治于权衡,辨证审因使用黄连-金银花-鬼箭羽、川芎-鸡血藤-水蛭、佩兰-茯苓-泽泻、土茯苓-萆薢-大黄等角药多层次多途径通络除痹以去宛陈莝,达到全程延缓疾病进展、缓解患者临床症状的目的.

[目的]探究疏血通及其主要成分水蛭素对Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响及机制.[方法]体外成熟7 d的CGNs分为存活对照组(用含K+浓度为25 mmol/L的培养基,即25 K组)、凋亡组(用含K+浓度为5 mmol/L的培养基,即5 K组)、以1/50、1/40、1/30、1/20、1/10浓度(稀释50、40、30、20、10倍)疏血通注射液处理组(25 K以及5 K合并疏血通处理组)以及对应不同浓度(2 U/mL、2.5 U/mL、3.34 U/mL、5 U/mL、10 U/mL)水蛭素处理组(25 K以及5 K合并水蛭素处理组),用Hoechst染色法观察并统计凋亡率.在蛋白印迹实验中,在25 K和5 K条件下用1/50、1/10浓度疏血通注射液以及对应2 U/mL、10 U/mL浓度水蛭素处理细胞,用West-ern blot法检测Cleaved Caspase-3、Bim、VEGF的表达水平.[结果]核染色结果显示,与25 K存活对照组比较,5 K凋亡组凋亡率增加;与25 K存活对照组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率无明显变化;与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率下降,且随着浓度的升高,凋亡率下降越明显.Western blot结果显示,与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通与水蛭素处理细胞后Cleaved Caspase-3、Bim蛋白表达水平均下降,VEGF蛋白表达水平升高.[结论]疏血通及其主要成分水蛭素通过抑制Bim表达,进而抑制线粒体依赖的小脑颗粒神经元凋亡.

糖尿病肾脏病为本虚标实之证,本虚为气阴两虚,标实为瘀血、痰浊,治疗宜益气养阴通络,益气用黄芪、党参、太子参,养阴用生地黄、熟地黄、铁皮石斛、黄精等补络脉之不足,行络脉之气血.气阴亏虚于内,水不涵木,则易生风动风,此为内风;本虚于内,易受外邪侵扰,此为外风.外风宜散,内风宜熄,临床常用僵蚕、生龙骨、生牡蛎平熄内风;穿山甲、乌梢蛇、海风藤、牛蒡子等散外风.祛痰通络用半夏、瓜蒌、白芥子以消肾络之痰浊.散结通络常用醋鳖甲、醋莪术等通络消积.络病日久,瘀血阻滞络脉,凝聚成形,络熄成积,痼结难解,此时单用草木之品难以奏效,常配伍虫类药以搜剔化瘀通络,常在丹参、川芎的基础上配伍地龙、全蝎、水蛭等虫类药.益气养阴药配伍祛风通络药、祛痰通络药、散结通络药以及化瘀通络药,有益气养阴、通畅肾络之效.

刘佃温教授认为慢性便秘病程长,病久则气血运行不畅,病邪由经入络,故刘教授提出应以"久病入络"为理论治疗慢性便秘.以活血通络为基本治法,辨证辅以行滞化瘀、润肠通便等,并基于"久病入络"理论总结出五组角药.临证中常用桃仁-红花-赤芍活血化瘀、当归-生地-牛膝补虚润肠、柴胡-枳实-厚朴疏利气机、黄芪-白术-大黄补气健脾通便、地龙-虻虫-水蛭搜风入络,引经报使,并在此基础上注重患者日常养护,临床疗效显著.

目的 克隆获得水蛭Hirudo nipponia 弹性蛋白酶抑制剂(guamerin)基因HnGUA,并对其进行生物信息学分析、蛋白原核表达、时空表达模式等研究,以期为揭示水蛭抗凝类小分子物质生物合成途径、分子调控机理机制奠定基础.方法 以日本医蛭为研究对象,基于前期转录组数据,采用cDNA末端快速扩增方法(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)获取HnGUA基因全长,并进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET32a-HnGUA,并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,诱导重组蛋白的表达;通过实时荧光定量检测了水蛭不同吸食阶段4个组织的HnGUA基因表达模式.结果 HnGUA基因cDNA全长507 bp(GenBank登录号OP490295),开放阅读框(Open reading frame,ORF)231 bp,编码76个氨基酸,蛋白分子量和理论等电点分别为8.17 kDa和4.44,包含一段长19个氨基酸的信号肽序列.多重比对分析结果显示,HnGUA蛋白与其他蛭类抑制剂基因编码蛋白具有较高的同源性.原核表达分析结果显示,构建的pET32a-HnGUA载体能在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,SDS-PAGE结果显示,诱导的重组表达蛋白相对分子质量在6 kDa左右,与预测大小一致.实时荧光定量PCR结果表明,HnGUA基因存在时空表达差异,其主要在皮肤和嗉囊组织中表达.结论 该研究首次在日本医蛭中克隆得到HnGUA基因,使其重组蛋白在大肠杆菌中成功表达,并且进一步研究了该基因的时空表达模式,为后续深入研究该基因功能奠定基础,同时对于不依赖于水蛭药材直接生产活性成分,加快实现中药现代化进程具有重要的理论和实践意义.

川蛭通络胶囊是由鲁南厚普制药有限公司生产的用于脑卒中患者恢复期治疗的中成药,由水蛭、川芎、丹参、黄芪4味中药组方而成,具有活血化瘀、益气通络的功效,用于中风病中经络(脑梗死)恢复期血瘀气虚证,症见半身不遂、口舌歪斜、语言謇涩或不语、偏身麻木、气短乏力、口角流涎,手足肿胀等.川蛭通络胶囊源自古方补阳还五汤的加减,诸药配伍使气旺血行、祛瘀通络,抗凝、抗血栓作用强,可显著改善血流状态及微循环障碍,有效预防脑梗死的发生.

目的 基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨益气通脉散(人参、丹参、三七、水蛭、土鳖虫、大黄)抗脑缺血再灌注损伤(CIRI)的作用机制.方法 (1)通过TCMSP、TCMID、ETCM数据库筛选益气通脉散各中药活性成分及其作用靶点;通过GeneCards、OMIM、TTD疾病数据库筛选CIRI疾病相关靶点;通过Venny 2.1 在线平台获得上述靶点的交集靶点,即益气通脉散治疗CIRI的潜在作用靶点.通过Cytoscape 3.7.1 软件构建"药物-活性成分-靶点"网络,并筛选出益气通脉散治疗CIRI的潜在活性成分.通过STRING 11.0 数据库进行潜在作用靶点的蛋白互作(PPI)分析,筛选核心靶点.通过Metascape数据库对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析.采用AutoDockTools 1.5.7 软件对关键活性成分与核心靶点进行分子对接验证.(2)采用大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)术建立CIRI大鼠模型.将SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、益气通脉散低剂量组(0.27 g·kg-1)、益气通脉散高剂量组(1.08 g·kg-1)、尼莫地平组(30 mg·kg-1),每组 10 只.造模前 3 d开始预给药,每日 1 次,连续 7 d.采用改良神经功能缺损程度评分(mNSS)法对MCAO/R大鼠的神经功能缺损进行评估;TTC染色法检测脑梗死体积;尼氏染色法观察脑组织神经元受损情况;ELISA法检测大鼠血清炎症因子及氧化应激相关指标;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡情况;Western Blot法检测脑组织中Bax、Bcl-2 蛋白表达水平.结果 (1)共得到益气通脉散的 46 个有效活性成分,178 个益气通脉散治疗CIRI的潜在作用靶点.分析出槲皮素、毛地黄黄酮、山柰酚、缬氨酸、尿嘧啶等关键活性成分;TNF、IL-6、STAT3、VEGFA、AKT1、IL-1β、CASP3、TP53、MAPK3、EGFR等核心靶点;潜在作用靶点参与炎症反应、氧化应激、细胞增殖分化、细胞凋亡等生物过程,涉及cAMP、NF-κB、PI3K-Akt等信号通路.主要活性成分槲皮素、毛地黄黄酮、山柰酚、缬氨酸与TNF、IL-6、STAT3、VEGFA等靶蛋白有较好的结合活性.(2)与模型组比较,各给药组大鼠的神经功能缺损评分明显降低(P＜0.05,P＜0.01),脑梗死面积均显著缩小(P＜0.01),脑组织缺血坏死区病理变化得到改善,脑组织缺血区神经元数量显著增加(P＜0.01),神经细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及MDA含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),SOD、GSH-Px活性显著升高(P＜0.05,P＜0.01),脑组织中Bax蛋白表达显著下调(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达显著上调(P＜0.01).结论 益气通脉散可能通过通过减轻炎症及氧化应激反应,抑制细胞凋亡,发挥抗CIRI的作用.

"随证施量"是"辨证论治"之后重要的一环,考虑患者体质、年龄、病程等个体化差异,是中医个体化治疗的体现.总结现代医家关于附子、大黄、水蛭、天花粉、淫羊藿五味常用中药在"随证施量"过程中超剂量用药情况,不同剂量针对疾病的轻重程度和相关指标的改善情况,希望能够拓宽药物临床剂量使用范围,为临床提供理论依据.