近年来,我国心血管疾病发病率和病死率仍在升高,疾病负担下降的拐点尚未出现.经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)技术是治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的有效手段,其中药物洗脱支架及药物涂层球囊是目前临床中最常用的2种PCI器械,但仍存在再狭窄及晚期血栓事件的问题.如何在保护内皮细胞活性的同时抑制血管平滑肌细胞增殖,进而既抑制再狭窄又抗血栓形成,是研究的热点及难点.中药单体及提取物尤其是中药单体组合涂层具有多靶点潜力,是对人工合成化合物涂层的重要补充.该文综述了应用于PCI器械药物涂层的中药单体(三氧化二砷、紫杉醇、水蛭素、川芎嗪、大黄素、苦参素、姜黄素等)、中药单体组合(紫杉醇/水蛭素、栀子苷/黄芩苷)、中药提取物(莪术提取物、昆明山海棠提取物),并对其中存在的问题及未来发展进行讨论,以期为研发新的PCI器械提供参考.

1型糖尿病肾病可由于其初始血糖高,进展迅速,其治疗侧重控制血糖和蛋白尿,以延缓肾脏损伤进展.全小林院士将糖尿病肾病病因病机归纳为"虚、瘀、浊",虚是始动因素,瘀是全程表现,浊是最终结局,并指出"瘀"贯穿整个糖尿病肾病全过程,在治疗时应"全程通络".本验案患者从2017年确诊糖尿病肾病Ⅲ期后,于仝小林院士门诊规律就诊,从2020年11月至今,患者24h尿蛋白定量稳定在100mg/24h以下,未再升高到异常值.治疗过程中,仝小林院士根据患者病情的变化调整方剂,补气活血通络,缓解微血管损伤.现将总结医案,望对1型糖尿病肾病的治疗提供参考.

[目的]探究疏血通及其主要成分水蛭素对Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响及机制.[方法]体外成熟7 d的CGNs分为存活对照组(用含K+浓度为25 mmol/L的培养基,即25 K组)、凋亡组(用含K+浓度为5 mmol/L的培养基,即5 K组)、以1/50、1/40、1/30、1/20、1/10浓度(稀释50、40、30、20、10倍)疏血通注射液处理组(25 K以及5 K合并疏血通处理组)以及对应不同浓度(2 U/mL、2.5 U/mL、3.34 U/mL、5 U/mL、10 U/mL)水蛭素处理组(25 K以及5 K合并水蛭素处理组),用Hoechst染色法观察并统计凋亡率.在蛋白印迹实验中,在25 K和5 K条件下用1/50、1/10浓度疏血通注射液以及对应2 U/mL、10 U/mL浓度水蛭素处理细胞,用West-ern blot法检测Cleaved Caspase-3、Bim、VEGF的表达水平.[结果]核染色结果显示,与25 K存活对照组比较,5 K凋亡组凋亡率增加;与25 K存活对照组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率无明显变化;与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率下降,且随着浓度的升高,凋亡率下降越明显.Western blot结果显示,与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通与水蛭素处理细胞后Cleaved Caspase-3、Bim蛋白表达水平均下降,VEGF蛋白表达水平升高.[结论]疏血通及其主要成分水蛭素通过抑制Bim表达,进而抑制线粒体依赖的小脑颗粒神经元凋亡.

目的 基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨益气通脉散(人参、丹参、三七、水蛭、土鳖虫、大黄)抗脑缺血再灌注损伤(CIRI)的作用机制.方法 (1)通过TCMSP、TCMID、ETCM数据库筛选益气通脉散各中药活性成分及其作用靶点;通过GeneCards、OMIM、TTD疾病数据库筛选CIRI疾病相关靶点;通过Venny 2.1 在线平台获得上述靶点的交集靶点,即益气通脉散治疗CIRI的潜在作用靶点.通过Cytoscape 3.7.1 软件构建"药物-活性成分-靶点"网络,并筛选出益气通脉散治疗CIRI的潜在活性成分.通过STRING 11.0 数据库进行潜在作用靶点的蛋白互作(PPI)分析,筛选核心靶点.通过Metascape数据库对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析.采用AutoDockTools 1.5.7 软件对关键活性成分与核心靶点进行分子对接验证.(2)采用大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)术建立CIRI大鼠模型.将SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、益气通脉散低剂量组(0.27 g·kg-1)、益气通脉散高剂量组(1.08 g·kg-1)、尼莫地平组(30 mg·kg-1),每组 10 只.造模前 3 d开始预给药,每日 1 次,连续 7 d.采用改良神经功能缺损程度评分(mNSS)法对MCAO/R大鼠的神经功能缺损进行评估;TTC染色法检测脑梗死体积;尼氏染色法观察脑组织神经元受损情况;ELISA法检测大鼠血清炎症因子及氧化应激相关指标;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡情况;Western Blot法检测脑组织中Bax、Bcl-2 蛋白表达水平.结果 (1)共得到益气通脉散的 46 个有效活性成分,178 个益气通脉散治疗CIRI的潜在作用靶点.分析出槲皮素、毛地黄黄酮、山柰酚、缬氨酸、尿嘧啶等关键活性成分;TNF、IL-6、STAT3、VEGFA、AKT1、IL-1β、CASP3、TP53、MAPK3、EGFR等核心靶点;潜在作用靶点参与炎症反应、氧化应激、细胞增殖分化、细胞凋亡等生物过程,涉及cAMP、NF-κB、PI3K-Akt等信号通路.主要活性成分槲皮素、毛地黄黄酮、山柰酚、缬氨酸与TNF、IL-6、STAT3、VEGFA等靶蛋白有较好的结合活性.(2)与模型组比较,各给药组大鼠的神经功能缺损评分明显降低(P＜0.05,P＜0.01),脑梗死面积均显著缩小(P＜0.01),脑组织缺血坏死区病理变化得到改善,脑组织缺血区神经元数量显著增加(P＜0.01),神经细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及MDA含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),SOD、GSH-Px活性显著升高(P＜0.05,P＜0.01),脑组织中Bax蛋白表达显著下调(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达显著上调(P＜0.01).结论 益气通脉散可能通过通过减轻炎症及氧化应激反应,抑制细胞凋亡,发挥抗CIRI的作用.

目的 探讨重组水蛭素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化血脂水平和粥样斑块的影响.方法 高脂饲料喂养雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组和重组水蛭素低、中、高剂量给药组,正常饮食的C57BL/6J小鼠作为正常对照组.连续给药 8 周后,检测血脂水平;HE染色以及Masson 染色观察主动脉血管病理学改变;CD68、α-SMA免疫组织化学染色分别观察重组水蛭素对粥样斑块中巨噬细胞浸润和平滑肌肌动蛋白的影响.结果 与模型组比较,重组水蛭素各剂量给药组的血清总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平均有不同程度的降低(P<0.05);各给药组与模型组的高密度脂蛋白胆固醇的差异无统计学意义(P>0.05);Masson染色显示模型组主动脉血管胶原异常增生,而各给药组胶原含量均有不同程度减少;CD68、α-SMA免疫组织化学染色显示,模型组主动脉粥样斑块处有大量CD68 表达和少量α-SMA表达,而重组水蛭素各给药组粥样斑块处CD68 表达减少(表示巨噬细胞浸润减少)、α-SMA表达增加(P<0.05).结论 重组水蛭素能降低ApoE-/-小鼠血清血脂水平,延缓平滑肌细胞凋亡,抑制血管胶原增生,从而抑制动脉粥样硬化的发展.

目前水蛭及相关制剂在缺血性脑卒中的临床治疗中运用广泛,除单用水蛭外,临床常与益气活血类中药配伍使用,其复方制剂发展和运用也愈加广泛.本文就近年来活血化瘀类中药水蛭及常用药对和复方制剂对缺血性脑卒中治疗的研究进展进行综述,总结归纳了相关临床疗效评价和作用机制研究,梳理了水蛭及常用药对和相关制剂在缺血性脑卒中的防治及在抗凝抗血栓、抗炎抗氧化、抗凋亡等各方面效用,以期为今后水蛭及相关制剂防治缺血性脑卒中的临床运用和科学研究提供参考.

目的 探讨水蛭对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠的保护作用及潜在机制.方法 将雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组和水蛭低、高剂量组(0.45、0.9 g/kg),每组10只;另取同周龄野生型雄性C57BL/6J小鼠10只,作为对照组.对照组小鼠以基础维持饲料喂养,其余各组小鼠以高脂饲料喂养12周以建立NAFLD模型.第13周,各药物组小鼠灌胃相应药液,每天1次,连续8周.末次给药后,测定各组小鼠的体重、肝脏质量,并计算肝脏指数;检测其血清核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;观察其肝组织病理形态学变化,并检测肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达情况.结果 与对照组比较,模型组小鼠肝组织可见较多的脂肪空泡和炎症细胞浸润,并有明显的脂质堆积;其体重、肝脏质量及肝脏指数和血清NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、TC、TG、LDL-C水平均显著升高,血清HDL-C水平和肝组织中PPARγ、SIRT1蛋白的表达水平均显著降低(P＜0.01).与模型组比较,水蛭低、高剂量组小鼠肝组织病理改变均有所缓解;其体重、肝脏质量及肝脏指数和血清NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、TC、TG、LDL-C水平均显著降低,血清HDL-C水平和肝组织中PPARγ、SIRT1蛋白的表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 水蛭可能通过激活PPARγ、SIRT1蛋白的表达来调节肝脏脂质代谢、抑制炎症反应,从而发挥对NAFLD的改善作用.

目的:观察水蛭对局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)模型大鼠足细胞损伤的影响.方法:44只大鼠随机分为正常组、模型组、水蛭组3组,采用单侧肾切除术后尾静脉注射阿霉素法建立大鼠FSGS模型,水蛭组给予水蛭悬浊液0.9 g/(kg·d)灌胃,正常组、模型组予等量生理盐水灌胃,共8周.分别于给药后4周、8周末测定大鼠血清三酰甘油(TG),免疫荧光法、Western Blot法检测肾组织线粒体融合蛋白2(Mfn2)蛋白表达,PCR法检测Mfn2 mRNA表达.结果:水蛭组大鼠血TG水平较模型组降低(P＜0.05);肾组织Mfn2蛋白和Mfn2 mRNA表达较模型组大鼠增多(P＜0.05).结论:水蛭可以降低FSGS大鼠TG水平,提高Mfn2蛋白及mRNA表达水平,减少足细胞损伤.

目的:观察抵当汤及其拆方对DVT大鼠高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法:将150只Wistar雄性大鼠随机分为5组,抵当汤组、大黄桃仁组、水蛭地龙组、模型组、假手术组,每组30只.采用Reyers法建立下腔静脉结扎模型,术后第1、3、7天灌胃2 h后,腹腔麻醉开腹,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质免疫印迹法检测高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠下腔静脉的病理变化,免疫荧光(IF)、实时逆转录PCR(Realtime RT-PCR)检测大鼠下腔静脉中的HMGB1表达.结果:模型组下腔静脉内皮细胞损伤严重并大量脱落,细胞肿胀明显,形成血栓,内膜形态不规则、管壁组织肿胀,胶原纤维增生,伴有炎症细胞浸润,抵当汤组、大黄桃仁组、水蛭地龙组等用药组内皮细胞不同程度损伤和炎症细胞浸润;模型组HMGB1荧光表达较假手术组明显增多,其余用药组HMGB1荧光表达不同程度减少;与假手术组比较,模型组大鼠的高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)血清水平、高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、蛋白表达、mRNA表达明显升高(P＜0.01).与模型组比较,抵当汤组、大黄桃仁组、水蛭地龙组等用药组HMGB1、IL-6、TNF-α血清水平、蛋白表达、mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).抵当汤组、大黄桃仁组、水蛭地龙组等用药组比较,HMGB1、IL-6、TNF-α血清水平、高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、蛋白表达、mRNA表达比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),术后第1、3、7天比较,HMGB1、IL-6、TNF-α血清水平、蛋白表达、mRNA表达比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:抵当汤及其拆方通过降低DVT大鼠的HMGB1、IL-6、TNF-α表达,发挥对DVT的治疗作用.

目的:探讨水蛭素治疗单钠尿酸盐(MSU)引起的痛风性关节炎的作用机制.方法:用 250 μg/mL MSU诱导RA-HFLs细胞炎症模型,将细胞分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(1 μmol/L)组及水蛭素低(1 U/mL)、中(2 U/mL)、高(4 U/mL)浓度组.CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清中炎症因子水平;Real-time PCR检测各组细胞中纤维化相关基因表达;Western Blot检测各组细胞中TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型组RA-HLFs细胞凋亡率及IL-1β、TNF-α、NF-κB水平显著升高,细胞活力显著降低,α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA及TGF-β1 蛋白表达和p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3 水平显著升高(P<0.05).与模型组比较,水蛭素各浓度组RA-HFLs细胞凋亡率及IL-1β、TNF-α、NF-κB水平显著降低,细胞活力显著升高,α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA及TGF-β1 蛋白表达和p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3 水平显著降低(P<0.05).水蛭素的作用呈浓度依赖性.结论:水蛭素能促进RA-HFLs细胞增殖,抑制细胞凋亡、炎症反应和纤维化,其作用机制可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关.