目的:对活禽市场家禽中分离的H5N6禽流感病毒(avian influenza virus, AIVs)进行遗传进化和分子特征分析。方法:2018年12月于乌鲁木齐市活禽市场采集家禽双腔拭子和环境样本，通过接种鸡胚、血凝试验和RT-PCR等方法分离鉴定AIVs，以甲型流感病毒通用引物扩增病毒全基因组并测序，利用BLAST、Clustal W、MEGA-X和DNAStar等软件进行序列比对、系统进化和分子特征分析。结果:从家禽样品中分离到6株H5N6亚型AIVs，其各基因之间的一致性较高(99.4%～100.0%)，为同一来源。BLAST分析显示除 NP基因与苏州家禽中分离的H5N6毒株一致性最高(99.7%)，其余7个基因片段均与2017—2018年广东环境中分离的H5N6毒株一致性最高，在99.0%～100.0%之间。遗传进化分析显示分离株的 HA属于Clade2.3.4.4.C分支， HA、 NA、 PB1、 PA、 NP、 MP这6个基因均与2018年自华东地区水貂中分离的H5N6病毒株聚在同一分支， PB2和 NS均与2017—2018年于广东环境中分离的H5N6病毒株聚在一起。分离株HA的裂解位点含多个连续的碱性氨基酸，为高致病性AIV， HA的S137A和T160A突变可增强病毒与人源受体SAα2，6-Gal的结合。另外， NA茎部缺失、 PB2的L89V、G309D、R477G、I495V、I504V、D391E和A661E以及 NS1的P42S、D92E和80～84位氨基酸缺失等突变均可增强病毒对哺乳动物的毒力和致病力。 结论:分离的6株高致病性H5N6 AIVs与2017—2018年分离自华东地区水貂和广东环境的H5N6 AIVs的遗传关系较近，存在的多个突变可增强病毒对哺乳动物的致病性，存在较大的公共卫生风险。

目的:对新疆乌鲁木齐市活禽市场家禽中分离的H5N8亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)进行遗传进化和分子特征分析。方法:2016年于乌鲁木齐市某活禽市场采集家禽咽和泄殖腔拭子，经接种鸡胚、血凝试验和RT-PCR等方法分离鉴定AIV，以AIV通用引物扩增病毒基因并进行全基因组测序，利用BLAST、Clustal W、MEGA-X和DNAStar等软件进行序列比对、系统进化和分子特征分析。结果:从家禽双腔拭子样品分离到5株H5N8 AIVs，其各基因的一致性在99.70%~100.00%之间，说明5株病毒为同一来源，统一命名为XJ-H5N8/2016。系统进化分析表明，该病毒株血凝素基因( HA)、 PB2和 NS均与2016—2017年湖北、山西和三门峡等地迁徙天鹅以及印度水鸭中分离的H5N8 AIVs聚在一起，同时，3个基因还与国内水貂中分离的H5N6 AIVs以及福建首例人感染H5N6 AIVs聚在一起；神经氨酸酶基因( NA)与2016年印度水鸭中分离的H5N8 AIVs聚在同一终末分支； PB1、 MP、 PA和 NP均与2017年自埃及、喀麦隆、乌干达、刚果等非洲国家野鸟和家禽中分离的H5N8 AIVs聚在一起。XJ-H5N8/2016的HA裂解位点均含5个连续的碱性氨基酸，为高致病性，病毒基因发生的多个突变可增强病毒对哺乳动物的毒力和致病力。 结论:从活禽市场分离的5株H5N8 AIVs呈高致病性，与2016—2017年湖北、山西、三门峡等地区以及非洲和印度等地迁徙候鸟和家禽中分离的H5N8 AIVs进化关系密切，部分基因还与国内水貂中分离以及感染人的H5N6 AIVs的遗传关系较近，其多个突变可增强AIV对哺乳动物的感染力和致病力，潜在感染人类和威胁公共卫生安全的风险。

[背景]开发、筛选优良益生菌菌种是当下畜牧业的研究热点,益生菌的潜在功能也被广为挖掘.[目的]分离、筛选具有良好耐受性且高产胞外蛋白酶的菌株,研究其生物学特性和酶学性质,为后续微生物蛋白酶的制备和微生态制剂的开发提供菌种资源.[方法]采集健康水貂新鲜粪便,配制酪蛋白培养基初筛和优化Folin-酚法复筛,对筛选菌进行生物学特性研究,获得产蛋白酶能力较强、耐受性较优的菌株,并进行常规鉴定和分子生物学鉴定,最后对蛋白酶酶学性质进行研究.[结果]筛选得到一株高产蛋白酶、耐受性较优的芽孢杆菌,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),编号为 3.在初始发酵培养基条件下,酶学性质研究结果表明,该蛋白酶的最适反应温度为 70℃,最适反应pH值为 9.0,最佳金属离子激活剂为K+,Cu2+和Fe2+对酶活力有明显的抑制作用,在 20%浓度的有机溶剂作用时蛋白酶未变性失活.[结论]从水貂粪便中分离获得一株具有良好的生物学特性、酶学性质和碱性蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌,为该菌株在实际生产应用中提供了基础保障.

目的 水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法.方法 针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病毒(CDV)的RNA模板进行了多重PCR扩增和扩增条件优化.结果 PCR可同时扩增出601 bp(ADV)、205 bp(MEV)和451 bp(CDV)的特异性目的条带,敏感性试验表明最低核酸检出量为ADV每微升2.67×104拷贝、MEV每微升3.02×104拷贝和CDV每微升1.72×105拷贝.临床样品检测结果表明多重PCR和单一PCR检测结果一致.结论 建立的多重PCR检测方法可快速地检测ADV、MEV和CDV单一或混合感染的临床样品.

为给碧流河下游农田土壤的可持续利用提供参考依据,基于实验测试数据,采用单因子污染指数法、内梅罗综合污染指数法及潜在生态危害指数法,对碧流河下游水貂养殖区的农田土壤重金属污染状况进行分析评价.结果表明:碧流河下游农田土壤重金属元素Cr、Ni、Zn、Cu、As和Pd含量的平均值均超出辽宁省土壤背景值;6种重金属元素的单因子污染指数依次为Ni>Zn>Cu>Cr>As>Pd;农田土壤重金属内梅罗综合污染指数为3.99,农田土壤整体处于重污染水平;6种重金属元素的潜在生态危害指数依次为Ni>As>Cu>Pd>Zn>Cr,潜在生态危害综合指数为49.4—196.6,平均值为132.6,农田土壤整体表现为轻微生态危害.农田土壤中Ni、Cr和Cu的累积可能主要来源于碧流河流域的工、农业排放物和水貂养殖业貂笼清除物,Pd的累积可能主要来源于沿岸居民倾倒和焚烧的生活垃圾,以及不合理的农业经营活动.

为了快速鉴别饲料中的狐狸、水貂、貉子和狗源性成分,根据线粒体16S rDNA种间保守序列,设计合成针对狐狸、水貂、貉子和狗的特异性引物和探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了多重实时荧光PCR方法,在同一PCR反应体系中可以同时完成4种动物源性成分检测.通过对15种其他物种的源性成分的检测,结果表明所设计的引物和探针具有很好的物种特异性,且灵敏度高,狐狸、水貂、貉子和狗的DNA检出限为0.01ng.对40份样品检测,其中5份检测出貉子、狐狸和水貂源性成分.结果表明,该方法可以有效地鉴别出饲料中狐狸、水貂、貉子和狗源性成分,同时适用于相关动物产品中.

目的 探讨水貂肠炎细小病毒(mink enteritis virus,MEV)和犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)灭活后的联合免疫效果.方法 用甲醛灭活MEV-L和CDV-L弱毒株,固定MEV-L的血凝效价为26,与CDV-L病毒液(CDV-L TCID50 10-529/mL)分别按1∶1(Ⅰ组)、1∶2(Ⅱ组)、1∶3(Ⅲ组)的量混合,加入10％氢氧化铝胶,充分混匀后免疫大鼠,均为1 mL/只.分别于免疫前及免疫后第7、14、30、60、90天采血,分离血清,采用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验和间接ELISA检测血清MEV抗体效价,血清中和试验和间接ELISA检测血清CDV抗体效价.结果 大鼠在免疫后7d时产生MEV和CDV抗体,30 d时抗体效价最高,随后下降,90 d时抗体效价仍较高;Ⅰ组CDV抗体效价较其他两组高.结论 3组不同比例的CDV和MEV联合免疫大鼠均可产生较高的抗体水平,其中以1∶1比例的免疫效果最佳.

为了探究水貂季节性睾丸退化的分子机制,本研究利用HE染色技术对不同退化时期的水貂睾丸组织进行了组织学研究,同时利用荧光定量PCR技术对不同退化时期的水貂睾丸组织中TGFB家族生长因子及其受体基因表达量变化进行了研究.结果发现在水貂睾丸退化期间,其直径逐渐缩短到原来的1/2,重量逐渐降低到原来的1/8.HE染色结果发现,4～7月水貂睾丸经历了严重退化,而且曲细精管的管腔逐渐消失,同时曲细精管的直径减小到其最大尺寸的1/3.荧光定量PCR结果发现TGFB3、INHBA、TGFBR1、ACVR2A、ACVR2B、SMAD2、SMAD4基因相对表达量在水貂睾丸退化期间都呈下降趋势.本研究表明TGFB信号通路可能在水貂睾丸退化期间发挥了重要功能.

呕吐是一种临床常见的病证,长期剧烈的呕吐会严重降低患者的生活质量,需要给予止吐药进行干预.传统中医药治疗呕吐历史悠久、疗效显著,具有多组分、多靶点、多系统协同拮抗的优点,但是由于其药效物质基础不清,作用机制不明,亟需采用国际公认的呕吐模型系统评价其呕吐特点、阐明其作用机制,为临床更好的应用提供参考依据.因此,该文系统介绍了目前国内外应用较多的几种呕吐动物模型,并结合笔者的实验体会,重点介绍了大、小鼠异食癖模型,以供相关科研人员参考.其中雪貂是目前国际公认的理想的呕吐动物模型,是评价镇吐药物作用的金标准;钱鼠是目前具有与人相似呕吐现象的体质量最小的哺乳动物呕吐模型;啮齿类动物虽然没有呕吐反射,但是研究证明其异食行为等同于其他种属动物的呕吐行为,因其动物易得、操作方便,目前已在中国大陆地区推广应用;贵州小型猪是我国自主研发的可用于呕吐的中型哺乳动物模型,具有与人解剖结构相似且呕吐反应敏感的特性,值得推广应用.总之,不同呕吐模型各有特点,研究时需根据实验目的和样品情况优化选择.

背景 呕吐是临床多种疾病的常见症状,可引起水电解质紊乱.化疗药物毒副作用最痛苦的症状之一即是呕吐,而传统抗呕吐药对癌症放化疗后呕吐的治疗疗效差,且常需联合用药.化学制剂止吐药5-羟色胺3受体拮抗剂和神经激肽1(NK1)受体拮抗剂等适于放化疗后的呕吐治疗,但仍存在作用靶点单一、不良反应大的问题.因此,寻找天然、低毒、广谱的止吐药物成为亟待解决的问题.目的 研究莲子与姜辣素组合物(莲姜组合物)的抗癌及对化疗呕吐的抑制作用.方法 研究时间为2017年.选取昆明种SPF级雄性小鼠96只、健康成年黑色CL级雄性水貂72只为实验动物.在每只小鼠右腋窝皮下接种0.2 ml(含瘤细胞2×106个)瘤细胞悬液(S180肉瘤、艾氏腹水瘤).接种次日将小鼠随机分4组,每组12只.正常对照组给予蒸馏水0.5 ml灌胃;环磷酰胺组给予环磷酰胺20 g/kg腹腔注射;姜辣素组给予姜辣素10 g/kg(相当于含生药量)灌胃;莲姜组合物组给予莲姜组合物10 g/kg(相当于含生药量)灌胃;连续给药10 d.比较各组小鼠肿瘤质量,并计算相应的肿瘤抑制率.同时期,将72只水貂随机分为3组,分别用于研究莲姜组合物对顺铂(顺铂呕吐组)、阿扑吗啡(阿扑吗啡呕吐组)、硫酸铜(硫酸铜呕吐组)3种药物引起的呕吐的影响,每组24只;再将顺铂呕吐组水貂随机分为正常对照、阳性对照、姜辣素、莲姜组合物亚组,即正常对照亚组1、阳性对照亚组1、姜辣素亚组1、莲姜组合物亚组1,每组6只;阿扑吗啡呕吐组、硫酸铜呕吐组的亚组分组同上,每个亚组6只.顺铂呕吐组中,正常对照亚组1给予5 ml0.9％氯化钠溶液灌胃;阳性对照亚组1给予盐酸昂丹司琼注射液2 mg/kg腹腔注射;姜辣素亚组1给予姜辣素10 g/kg(相当于含生药量)灌胃;莲姜组合物亚组1给予莲姜组合物10 g/kg(相当于含生药量)灌胃;除空白对照组外,其余水貂在预处理30 min后给予顺铂腹腔注射.阿扑吗啡呕吐组、硫酸铜呕吐组的各亚组给药方法同上,除空白对照组外,其余水貂在预处理30 min后分别给予相应的阿扑吗啡、硫酸铜腹腔注射.6 h后记录并比较顺铂呕吐组、阿扑吗啡呕吐组、硫酸铜呕吐组的各亚组水貂呕吐发生率、呕吐潜伏期、干呕次数、呕吐次数.结果 环磷酰胺组、姜辣素组、莲姜组合物组小鼠S180肉瘤、艾氏腹水瘤肿瘤质量轻于正常对照组(P<0.05).环磷酰胺组、姜辣素组、莲姜组合物组小鼠S180肉瘤、艾氏腹水瘤肿瘤抑制率分别为65.5％、31.9％、53.4％及64.7％、26.7％、54.5％.顺铂呕吐组中,阳性对照亚组1、姜辣素亚组1、莲姜组合物亚组1水貂呕吐潜伏期长于正常对照亚组1,干呕次数、呕吐次数少于正常对照亚组1(P<0.05).阿扑吗啡呕吐组中,阳性对照亚组2、姜辣素亚组2、莲姜组合物亚组2水貂呕吐潜伏期长于正常对照亚组2,干呕次数、呕吐次数少于正常对照亚组2(P<0.05).硫酸铜呕吐组中,阳性对照亚组3、姜辣素亚组3、莲姜组合物亚组3水貂呕吐潜伏期长于正常对照亚组3,干呕次数、呕吐次数少于正常对照亚组3(P<0.05).结论 莲姜组合物可抑制小鼠S180肉瘤、艾氏腹水瘤,抑制顺铂、阿扑吗啡、硫酸铜所致呕吐,有抗癌、止吐减毒增效作用.