目的·探究去唾液酸糖蛋白受体 1(asialoglycoprotein receptor 1,ASGR1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的意义及潜在机制.方法·通过R语言分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中ASGR1在肝癌患者中的表达情况并绘制相关生存曲线.利用人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas,HPA)数据库获得人体正常肝组织和肝癌组织的免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)数据来分析ASGR1的蛋白表达情况.利用流体动力学尾静脉注射(hydrodynamic tail vein injection,HTVI)递送方法,在免疫完全的小鼠肝脏中敲除Asgr1探究其在体内的致瘤功能,并通过蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)验证基因敲除效率.利用R语言进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析及相关性分析,利用基因探针富集(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)软件进行 GSEA hallmark相关通路分析,利用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)在小鼠肝癌组织中验证糖酵解关键基因表达水平.结果·ASGR1 在肝癌组织中显著低表达,在肝癌患者中ASGR1的低表达与患者较差的总体生存期(overall survival,OS)、无疾病间隔(disease free interval,DFI)、无进展间隔期(progression free interval,PFI)和疾病特异性生存期(disease specific survival,DSS)相关;肿瘤分级程度越高的肝癌患者ASGR1 基因表达水平越低.人体正常肝组织ASGR1蛋白的表达显著高于肝癌组织.在免疫完全的肝细胞癌小鼠模型中,小鼠内源性Asgr1敲除可增加肝组织中肿瘤结节的大小和数量.TCGA数据库中ASGR1低表达组肝癌患者富集到多条癌症及代谢相关通路,ASGR1 表达与部分糖酵解关键基因表达呈负相关,Asgr1 敲除组的小鼠肝癌组织中糖酵解水平高于对照组,提示ASGR1低表达很可能促进肝癌的生长发展,加强代谢重编程促进肿瘤的合成代谢发展.结论·ASGR1在肝癌患者中表达显著降低,与患者的预后呈正相关;小鼠体内敲除Asgr1可促进肝细胞癌的发生发展;ASGR1 可以作为肝癌预后不良的潜在生物标志物和潜在治疗新靶点.

目的:研究白细胞介素1Ⅱ型受体(IL-1RII)和白细胞介素1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)重组质粒对大鼠实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的作用及其机制.方法:构建体内导入用重组质粒pCAGGS-IL-1RII和pCAGGS-IL-1RAcP,并以pCAGGS-SP(signal peptide)作为对照质粒.将雄性Lewis大鼠分成4组:对照(control)组(未免疫未注射质粒的大鼠,n=5)、EAM+SP组(免疫的大鼠尾静脉注射对照质粒,n=9)、EAM+IL-1RII组(免疫的大鼠尾静脉注射IL-1RII质粒,n=8)和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP组(免疫的大鼠尾静脉注射IL-1RII和IL-1RAcP质粒,n=7).第0天免疫大鼠造模;第6天应用流体动力学方法尾静脉注射重组质粒;第17天处死大鼠进行疗效评估,评估指标包括组织病理学、心脏彩超检测、心脏重量/体重比值、心肌中心衰标志物心房钠尿肽(ANP)和脑钠尿肽(BNP)及炎症因子的表达.构建体外细胞转染用重组质粒pUC19-IL-1RII-actin和pUC19-IL-1RAcP-tub,转染入Cos7细胞获得培养上清液,将含有IL-1RII和IL-1RAcP的培养上清液加至脂多糖(LPS)诱导的H9c2细胞中,RT-qPCR检测炎症因子的表达变化.将构建的重组质粒pEGFP-IL-1RII-actin和pEGFP-IL-1RAcP-tub转染入Cos7细胞,免疫共沉淀(Co-IP)检测目的蛋白的形成.结果:与EAM+SP组相比,EAM+IL-1RII组和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP组大鼠心肌炎症程度均有显著减轻,左心室收缩期内径显著缩小(P<0.05),心肌中ANP、BNP、TNF-α、IL-2、IFN-γ和TGF-β的表达水平显著降低(P<0.01),IL-4的表达水平显著升高(P<0.01).在H9c2细胞中,与LPS组比较,LPS+IL-1RII组和LPS+IL-1RII+IL-1RAcP组TGF-β和IL-6的表达水平显著降低(P<0.01),IL-10的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS+IL-1RII组比较,LPS+IL-1RII+IL-1RAcP组TNF-α和IL-2的表达水平显著降低(P<0.05),IL-13的水平显著升高(P<0.01).Co-IP检测到IL-1RII与IL-1RAcP相互结合并形成了一个新的蛋白,为异源二聚体.结论:IL-1RII和IL-1RAcP重组质粒导入可有效缓解大鼠EAM的炎症损伤,其机制与两者结合形成异源二聚体并强力抑制炎症因子的表达有关.

目的 多形性胶质母细胞瘤(GBM)呈浸润性生长,手术无法完全切除病灶,GBM的精确示踪并识别和清除手术残余病灶仍存在挑战性.文中旨在制备MNP-PEG-Gd纳米粒子并探究其用于脑胶质母细胞瘤磁共振成像和光热治疗的效果. 方法 以黑色素为原料,经过聚乙二醇修饰后再与钆离子(Gd3+)螯合,获得MNP-PEG-Gd纳米粒子.体外表征其理化性质、弛豫率、光热转化率和细胞毒性,并在细胞水平上验证光热治疗效果.体内探究该纳米粒子在裸鼠体内对脑胶质母细胞瘤的成像和光热治疗效果. 结果 制备的MNP-PEG-Gd纳米粒子流体动力学直径约为24nm,表面电荷为(-4.77±1.05)mV,且具有高螯合稳定性和光稳定性.体外磁共振研究得r1值为46.40 mM-1s-1,具有较高的弛豫率.MNP-PEG-Gd的光热转换能力随时间的增加而增强.照射5 min后125、250、500、1000μg/mL的MNP-PEG-Gd水溶液温度最高升至40.1、42.2、49.0和55.0℃,而PBS的温度仅升至30.1℃,有良好的光热转换能力.当MNP-PEG-Gd浓度为250μg/mL时细胞存活率低于89％,当MNP-PEG-Gd浓度为1000μg/mL时细胞存活率仅是30％左右.尾静脉注射该纳米粒子0.5 h后即可显像并可通过肝肾系统清除. 结论 成功制备了MNP-PEG-Gd纳米粒子,其不仅具有良好的生物安全性还具有良好的磁共振成像性能和光热治疗效果,可以为GBM诊疗一体化提供一种新的思路.