[目的]建立流苏石斛中3种木脂素类成分的含量测定方法.[方法]应用高效液相色谱-电喷雾-离子肼质谱(HPLC-ESI-MSn)联用技术以及高效液相色谱(HPLC)保留时间定位结合紫外吸收光谱(UV)比对鉴定流苏石斛中的木脂素类成分.采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.8 mL·min-1,柱温为35℃,质谱使用ESI离子源,负离子模式下采集数据.HPLC含量测定采用与MS分析相同的色谱柱,流动相甲醇+乙腈(V/V=1∶1)-0.01 mol/L乙酸铵溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,柱温40℃,检测波长为215 nm.[结果]从流苏石斛中鉴定出丁香树脂酚双葡萄糖苷、丁香树脂酚单葡萄糖苷、丁香树脂酚,含量测定结果显示丁香树脂酚双葡萄糖苷、丁香树脂酚单葡萄糖苷、丁香树脂酚线性范围分别为0.1701～3.4020、0.1020～2.0400、0.0403～0.8060 μg(r≥0.9995),平均加样回收率范围在97.71%～101.67%,相对标准偏差(RSD)均小于3.0%.10批样品丁香树脂酚双葡萄糖苷、丁香树脂酚单葡萄糖苷、丁香树脂酚的含量分别为0.7779～1.3852、0.0734～0.1966、0.0295～0.1882 mg·g-1.[结论]本研究方法可为流苏石斛的质量评价提供参考依据.

雄全异株是自然界罕见的繁育系统.通过野外观察和人工授粉实验对雄全异株植物流苏树传粉生物学特征及繁育系统进行研究.结果表明:流苏树的雄花与两性花的雄蕊发育过程基本一致,均能产生功能花粉粒.两性花的两个心皮原基愈合分化形成雌蕊,雄花的两个心皮原基愈合后形成一个空室并停止发育至整体退化.雌蕊先熟,柱头可授期长,花粉在花药开裂后具有活力,室温下,活力维持在10％以上约2周.流苏树靠风和昆虫(主要是蓟马和食蚜蝇)传粉.控制授粉30 d后,自然对照结实率为34.36％;两性花不存在无融合生殖现象,自交亲和,但自发自交的结实率仅10.70％;人工授粉下杂交结实率显著高于自交(同株异花);有性生殖受到传粉者限制;是混合交配系统.证实流苏树是木犀科又一功能性的雄全异株,其依靠雄株增加异交花粉的数量和质量,避免自交衰退;同时两性花的自交亲和保障生殖成功.流苏树雄花的雌蕊退化,从另一个角度证明木犀科的雄全异株是两性株向雌雄异株进化的过渡状态.

本研究先采用单因素试验确定5个影响因素的浓度区域,然后进一步进行正交试验筛选各因素最优水平,通过两种实验方法相结合,优化、建立流苏树属(Chionanthus)SSR-PCR反应体系,最后检测其稳定性.研究结果表明,优化后的20μL流苏树属SSR-PCR反应体系为:10×Buffer 2μL,DNA模板2.0 ng/μL,Mg2+2.5 mmol/L,Taq酶2.5 U,dNTPs 250 μmol/L,引物0.3 μmol/L(正反引物各0.15 μmol/L),ddH2O补足.用4份材料对反应体系进行验证均可得到多态性丰富、清晰稳定的条带,证明该反应条件可用于流苏树属的遗传多样性分析,可为流苏树属的遗传多样性研究、遗传变异分析、亲缘关系探讨及种质资源的科学保护奠定坚实的基础提供基础数据.

为流苏树属不同种之间的分类研究及杂交育种提供依据,以流苏树和美国流苏为试验材料,观察自然状态下叶片和花的形态差异,并使用扫描电镜对叶片和花粉进行解剖学和孢粉学的比较研究.试验结果为:(1)流苏树与美国流苏在形态学特征上存在一定差异,两者的叶长、叶宽、叶柄长及花瓣长均呈显著性差异.(2)流苏树和美国流苏的叶表面均具蜡质纹饰,气孔器均为无规则型、单层外拱盖.流苏树的气孔较小,栅栏组织2层,海绵组织较疏松;美国流苏的气孔较大,栅栏组织3层,海绵组织紧凑.(3)流苏树和美国流苏均为单粒花粉,具雕刻网状纹饰.流苏树花粉呈圆球形,外壁平滑;美国流苏花粉呈近扁球形,外壁纹饰相对复杂、不规则.流苏树和美国流苏均具抗旱能力,美国流苏抗旱能力更强;流苏树比美国流苏更原始.

食品安全地方标准是食品安全国家标准的重要组成部分,是食品安全国家标准的补充.流苏(Chionanthus retusus Lindl.et Paxt)为木犀科流苏树属植物,落叶小乔木或灌木,国家二级保护植物.《山西树木志》记载:流苏主要分布于黄河中下游及其以南地区,集中分布于山西省中条山、垣曲、阳城、翼城、沁水以及太行山、太岳山、吕梁山等地,占全国资源分布的40％以上.

附生维管植物是热带森林中重要的特征性组分,研究附生维管植物对宿主树的选择性对热带森林生物多样性及生态系统保护有重要意义.该研究以海南热带雨林国家公园霸王岭片区热带云雾林中的附生维管植物为研究对象,通过设置21个20 m×20 m的固定样地,调查样地内所有胸径＞1 cm的乔、灌木的数量、种类、胸径、植株高、基质类型及其上生长的附生维管植物的数量、种类,用混合线性模型、单因素方差、附生选择性指数分析附生维管植物分布与宿主树种、胸径、高度、基质类型(裸树皮、苔藓、凋落物及土壤)的关系.结果表明:在热带云雾林8 400 m2样地内,附生维管植物共计51种2 650株,附生兰科植物和附生蕨类植物为优势类群,附着在10.6％的个体木上;附生维管植物多度和丰富度与宿主树胸径显著正相关;多度较大的琼崖石韦(Pyrrosia eberhardtii)、流苏贝母兰(Coelogyne fimbriata)、阴石蕨(Davallia repens)、蔓九节(Psychotria serpens)对宿主树种表现出一定的选择性,显著偏好1-4个树种;附生维管植物对轻基质类型(苔藓植物)也存在显著偏好,70％以上的附生维管植物生存在苔藓基质上.

以河南、江苏、山东三个种源流苏树3年生播种苗为试材,测定不同淹水程度(CK、T1、T2、T3,分别表示对照、轻度渍害、渍害和涝害)对三个种源流苏树的生理影响,并结合隶属函数值对供试材料的耐涝性进行综合评价.结果显示:在淹水胁迫期间,各种源流苏树的相对电导率(REC)、丙二醛(MDA)含量、可溶性糖(SS)和可溶性蛋白(SP)含量、超氧化物岐化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性总体呈上升趋势;叶绿素含量(Chl)、净光合速率(Pn)、胞间二氧化碳浓度(Ci)、气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Tr)总体呈下降趋势.流苏树的11个单指标的主成分分析结果与隶属函数值合成的综合指数表明:三个种源流苏树抗淹水能力由强到弱的顺序为:河南种源(0.78)>江苏种源(0.66)>山东种源(0.51).

该研究采用常规染色体制片技术,对分布于山东省的流苏树5个自然地理居群的染色体核型进行观察分析,以揭示不同居群的流苏树核型特征、差异及其系统亲缘关系,为进一步探明流苏树的系统进化关系奠定细胞学基础.结果表明:(1)流苏树5个居群的染色体数目稳定,均为2n=2x=46;染色体以小型染色体为主;核型主要有中部着丝粒(m)、亚中部着丝粒(sm)组成,其中中部着丝粒居多,有1B、2B两种类型.(2)5个居群的流苏树核型公式分别为:B 居群 2n=2x=43m+3sm、T 居群 2n=2x=46m、S 居群 2n=2x=45m+sm、WS 居群 2n=2x=44m+2sm、Z居群2n=2x=45m+sm,这或许与其所处环境有关.(3)5个居群的流苏树核型不对称系数在54.29％～58.00％之间,各居群进化程度相对大小依次为B＞S＞WS＞Z＞T.(4)聚类分析结果显示,当遗传距离为1时,T和WS居群、B和S居群分别优先聚为一类,表明二者相互间的亲缘关系相对最近.研究认为,B居群和S居群进化程度较高,T居群相对原始,且T居群(泰山罗汉崖的流苏树居群)保护相对最好.