中成药是我国药品组成的重要部分,尤其是新中国成立以来使用年限较长的已上市中成药,为药品研发与应用等多领域提供了经验和依据.已上市中成药老品种的有效筛选,是推进以临床价值为导向的中药二次开发、适应证扩大等药品相关政策制定的重要环节.本研究运用层次分析法、专家咨询、文献分析等研究方法,探讨了经典老药的概念及价值优势,明确经典老药是在中医辨证论治思想的指导下,依据方剂的配伍规律研制,临床应用广泛、疗效确切、具有明显特色及优势、不良反应较少、质量优良、现代应用时间较长、经国家药品监督管理部门批准上市的中成药.明确了 3 个维度 11 类遴选要素的遴选体系,包括经典性、有效性和临床应用性3 个维度及使用年限超过 40 年、近5 年临床仍有应用、来源于古代医籍、来源于《伤寒论》《金匮要略》、来源于官修书籍、来源于名医名家、老字号企业生产产品、进入国家级非物质文化遗产名单、进入国家中药保护品种目录、进入国家保密配方的中成药、具有一定的销量等 11 类遴选要素.明确了相关遴选要素的权重及实现路径,并提出加强面向满足临床需求及疗效的经典老药遴选要素优化、基于"三结合"发挥经典老药品种特色及优势、以临床价值为导向明确经典老药的临床定位、加强经典老药品种关键技术质量提升的策略建议,为进一步推进已上市中成药的开发利用提供导向.

目的:探索以决策导向型评价模型（context，input，process and product，CIPP）及柯氏模型为导向的"互联网+中医护理"岗前培训评估体系的行动研究是否有助于提升护理人员培训效果。方法:以广东省中医院2019至2020年211名"互联网+中医护理"护士为研究对象，组建行动小组，综合运用多种方法收集资料并进行分析。根据收集的资料，行动小组构建"互联网+中医护理"培训方案、"互联网+中医护理"编制要求、"互联网+中医护理"流程的案例优化方案和"互联网+中医护理"的评价模型。培训结束后通过成绩比较、发放自制调查问卷，比较护士知识技能和相关态度、对培训项目总的反应和感受，以及主管领导、医护人员、服务对象对护士工作表现的评价。采用SPSS 20.0软件进行统计分析。结果:护士培训后理论成绩为（85.16±6.22）分、案例考核成绩为（81.22±7.03）分，高于培训前理论成绩（61.23±12.90）分、案例考核成绩（59.54±14.41）分，差异均有统计学意义（ P<0.001）。自制调查问卷结果显示，护士培训后理论知识技能、相关态度比较，差异均有统计学意义（ P<0.001）；培训过程中、培训结束时对培训项目的培训内容、培训师资、培训实施、培训保障比较，差异有统计学意义（ P<0.001）；培训后，主管领导、医护人员、服务对象对护士工作表现的评价在知识技能、职业道德、工作过程、学习能力等方面均有改善，改善率具有统计学意义（ P<0.001）。 结论:行动研究是一种有效地持续改善护理培训的研究方法，基于CIPP及柯氏模型通过行动研究构建的"互联网+中医护理"护士优化方案可有效提升培训效果。

目的:探讨认知行为取向团体心理治疗对网络成瘾中学生应对方式、时间管理及家庭功能的影响，为网络成瘾心理治疗体系提供理论依据。方法:依据网络成瘾量表(internet addiction test，IAT)评分筛选70名网络成瘾中学生，按随机数字表法分为对照组、试验组。对照组仅给予常规心理及药物治疗，试验组在对照组治疗基础上参加认知行为取向团体心理治疗，对照组32人，试验组33人完成治疗。治疗前后分别以IAT、简易应对方式问卷(coping simplified style questionnaire，SCSQ)、青少年时间管理倾向量表(adolescent time management disposition scale，ATMD)、家庭功能评定量表(family assessment device scale，FAD)对两组中学生评估。结果:治疗前两组网络成瘾中学生各量表评分差异无统计学意义(均 P>0.05)；试验组干预后在积极应对[(1.89±0.51)分]、消极应对[(1.55±0.51)分]、时间监控感[(58.39±12.10)分]、时间价值[(26.64±4.48)分]、时间效能[(30.42±5.18)分]及家庭功能中沟通[(18.85±2.40)分]、角色[(24.18±3.77)分]、行为控制[(18.82±2.57)分]、总的功能[(24.79±3.90)分]方面与对照组[分别为(1.62±0.44)分、(1.84±0.55)分、(52.09±11.72)分、(19.34±3.96)分、(21.91±6.13)分、(21.16±2.63)分、(26.09±3.75)分、(20.59±2.54)分、(28.69±3.68)分]及干预前[分别为(1.46±0.48)分、(1.97±0.56)分、(48.73±13.46)分、(18.27±4.84)分、(20.00±5.79)分、(21.76±2.72)分、(26.58±3.86)分、(19.76±2.96)分、(29.27±4.76)分]相比差异有统计学意义(均 P<0.05)，试验组干预后FAD中解决问题[(12.67±2.50)分]、情感反应[(14.03±3.73)分]评分与干预前[(14.15±2.83)分、(14.61±3.66)分]相比差异有统计学意义(均 P<0.05)；对照组SCSQ各分项、ATMD各分项治疗前后差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:认知行为取向团体心理治疗能优化网络成瘾中学生的应对方式并提高其时间管理能力，对家庭功能的角色、沟通、行为控制及总的功能有显著改善。

目的:研发一款一体化呼吸道合胞病毒(RSV)分型即时检验(point-of-care testing，POCT)检测试剂并评估其性能。方法:以RSV A和B亚型及ON1和BA9基因型的基因组保守序列设计特异性的引物和探针，优化PCR反应体系和条件，整合试剂玻璃化技术和多重检测平台，开发RSV分型POCT检测试剂，并对该产品的敏感度、特异度、重复性和临床性能进行评估。结果:一体化RSV分型POCT检测试剂敏感度可达500拷贝/ml，特异度好，与临床上表现相似的病原体无交叉反应，试剂批间和批内重复性Ct值的变异系数均<5%，具有较好的重复性，检测试剂应用于53例临床样本测试，检测结果与对比试剂具有较高的一致性和符合率，阳性符合率高达98.11%。结论:本研究开发的一体化RSV分型POCT检测试剂集成了"核酸提取-纯化-检测"，实现了"样本进，结果出"，操作简单，检测结果准确、可靠、稳定，可用于RSV A和B亚型的分型即时检验，为RSV的防控和诊疗提供助力。

目的:基于多重聚合酶链式反应（PCR）与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）联用的高通量检测技术，构建不同菌种的特征性单核苷酸多态性图谱以建立血流感染病原菌快速、准确、高灵敏的诊断方法。方法:选取血流感染常见的大肠埃希菌等7种病原菌作为检测对象，优化多重PCR条件，采用MALDI-TOF MS检测各目标菌特征峰，建立多重PCR联合质谱检测体系；分别设计普通引物对及中部同序引物对，分析引物二聚体的形成情况；采用模拟的细菌感染血液样本，测定上述建立体系的特异度及灵敏度；收集2020年6—9月解放军总医院检验科疑似菌血症患者血液样本150份，并将上述体系的鉴定结果与临床应用的传统鉴定方法结果使用χ2检验进行比较。结果:本研究设计的中部同序引物对的引物二聚体循环阈值（Ct）值在38以上，比普通引物对延迟出现6~10个循环；建立的联合质谱检测体系可同时检测分为两组的7种细菌，目标菌均可检测到特异的产物峰，除目标菌外的临床菌株只有引物峰，所有图谱无非特异的杂峰；大肠埃希菌的灵敏度可以达到50 CFU/ml，其余各菌的检测限为100 CFU/ml；对150例患者的血液样本进行检测，传统方法鉴定出阳性46例，阳性检出率为30.67%（46/150），包括2例混合感染，联合质谱方法鉴定出阳性48例，阳性检出率为32.0%（48/150），包括3例混合感染；阴性符合率为100%（101/101），核酸质谱敏感度为97.82%（45/46），特异度为97.11%（101/104），一致性检验Kappa=0.938（ P=0.625），2种方法检测一致性良好。 结论:所建立的检测体系不仅能快速、准确地鉴定引起血流感染的7种常见病原菌，有效缩短传统培养鉴定所需时间，还可检测多重细菌混合感染，弥补混合感染漏检可能。该方法也可用于其他病原菌的鉴定。

目的:为了完善放射性核素 14C的监测方法，估算 14C对人体造成的内照射剂量，保护 14C暴露行业职工和公众的身体健康。 方法:用湿法氧化法对尿样进行前处理。分析时用过硫酸钾作为氧化剂把尿素氧化分解为二氧化碳，并用1 mol/L氢氧化钠吸收后，使吸收液转化为碳酸钙沉淀，碳酸钙粉末悬浮法制样，低本底液体闪烁计数仪检测计数并计算分析结果。结果:用尿素作为载体优化后的反应时间为1 h，对于80 ml尿样，过硫酸钾的使用量为10 g，方法回收率可达到97.15% ~ 102.09%，测量时间300 min时，方法检测下限为0.22 Bq/L。实际检测的4个尿样中， 14C活度浓度分别为0.32、0.60、0.86和0.74 Bq/L。 结论:优化后的方法稳定性好，准确度高，能够满足放射卫生工作中 14C日常检测的需求。尿样中 14C定量方法的建立进一步完善了 14C监测的方法体系。

本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术，并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间，于陆军军医大学第一附属医院检验科，针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC?ACC）、rpoB531（CAC?TAC）和rpsL43（AAG?AGG），分别设计锁式探针（padlock probe，PLP）、引物和捕获探针，构建了基于磁珠的固相RCA恒温扩增反应体系，并进行了实验参数的优化。通过多色荧光探针（Cy3/Cy5/ROX）对RCA产物精准捕获与信号放大，实现了对3种突变基因的单管多重检测。进一步对该方法的灵敏度、特异性与线性范围等分析性能进行验证，结果显示同一反应体系中katG315的响应范围为1.0 pmol/L至0.1 nmol/L，rpoB531和rpsL43的响应范围为1.0 pmol/L至50.0 pmol/L和1.0 pmol/L至20.0 pmol/L，且该方法具有较好的特异度与灵敏度，在混合靶标中可精确识别单碱基突变，最低检出限低至1.0 pmol/L；在模拟血清样本的回收实验中，回收率可达95.0%~105.2%。综上，本研究构建的恒温扩增型多重检测方法可快速实现3种耐药突变位点的单管多重检测，该技术成本低廉、简便快速、不依赖大型设备，为病原体耐药基因检测提供了一种新的分析方法。

目的:在国内建立胰岛素自身抗体（IAA）的电化学发光检测法，并初步评价其应用价值。方法:胰岛素原采用磺基吡啶钌衍生物（Sulfo-tag）和生物素标记后，与血清IAA孵育结合。Meso Scale Discovery（MSD）链霉亲和素电化学发光平板捕获标记的抗原抗体复合物后，采用MSD电化学发光仪进行检测，以IAA指数≥0.005作为阳性阈值。通过优化检测条件后，采用微量平板放射免疫法比较两种方法的相关性和一致性。选取2016至2018年于中南大学湘雅二医院代谢内分泌科门诊或住院的新诊断1型糖尿病（T1DM）患者（55例）及其一级亲属（216名），以及健康志愿者（健康对照组，413名）为研究对象，检测其血清样本，初步评价电化学发光法检测IAA的临床应用价值。结果:优化条件包括：（1）生物素标记的胰岛素原和磺基吡啶钌衍生物标记的胰岛素原的最适浓度均为800 ng/ml；（2）酸化血清的方式为水浴30℃静置孵育45 min；（3）在反应体系中先加入35 μl稀释后的抗原，再加入15 μl Tris-HCl缓冲液，然后与酸化血清混匀孵育过夜能获得更高的信噪比（S/N）。电化学发光法间隔3个月重复检测22例样本，IAA指数差异无统计学意义（ P=0.095），阴/阳性判定完全一致；与微量平板放射免疫法检测IAA的一致率为93.7%（119/127）（Kappa值为0.858），指数呈正相关（相关系数 r=0.749， P<0.001）。电化学发光法受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.764（95 %CI：0.669~0.858）。电化学发光法检测T1DM患者IAA的阳性率为52.73%（29/55），明显高于健康对照组的0.76%（2/263）（ P<0.001）；检测T1DM一级亲属组的阳性率为0.93%（2/216），与健康对照组相比差异无统计学意义（ P=0.854）。 结论:电化学发光法检测IAA有较高的灵敏度和特异度，操作简便无放射污染，具有很好的临床应用价值。

目的:探讨环介导等温扩增(LAMP)技术在免疫功能低下患儿耶氏肺孢子菌(PC)快速病原检测中的应用价值。方法:收集2020年5月至2021年5月在上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心治疗的免疫功能低下、根据临床表现高度怀疑耶氏肺孢子菌肺炎(PCP)患儿的肺泡灌洗液或深部痰液，应用聚合酶链反应(PCR)及LAMP方法检测PC。根据PC基因保守区域合成LAMP引物，并对LAMP反应体系及反应条件进行优化，评价其敏感性与特异性，将其与PCR检测病原体结果进行比较。结果:本研究所建立的PC LAMP检测技术特异性和敏感性均较高，1h即可出检测结果。LAMP技术与PCR检测临床高度怀疑PCP患儿12份临床标本，阳性10例，阴性2例，二者符合率100%。结论:LAMP技术可快速高效检测PC，较普通PCR检测效率高，可为临床快速诊断PCP提供良好的技术手段。

目的:建立基于SYBR Green I颜色判定的检测新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）ORF1ab基因的逆转录环介导等温扩增方法（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP），为诊断SARS-CoV-2提供简便、快速和准确可靠的工具。方法:基于GenBank中SARS-CoV-2 ORF1ab基因序列保守区设计引物，经引物筛选和RT-LAMP反应体系优化后进行灵敏度和特异性评价，并与实时荧光定量RT-PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）方法进行比较。结果:基于颜色判定的RT-LAMP方法可在65℃45 min内完成SARS-CoV-2的快速检测，检测限为3 copies/reaction，与qRT-PCR的敏感度一致。RT-LAMP检测人冠状病毒OC43、人冠状病毒NL63和乙型流感病毒核酸样本结果为阴性，具有较好的特异性。经SARS-CoV-2临床样本验证，RT-LAMP与qRT-PCR的检测符合率达100%。结论:基于颜色判定的RT-LAMP方法灵敏度高、特异性强，适用于SARS-CoV-2的快速可视化检测，具有应用于SARS-CoV-2样本的初筛及基层卫生医疗机构和现场推广的潜力。