异尖线虫(Anisakis)是一类人兽共感染寄生虫,广泛分布于全球各大海域,成虫主要寄生于海豚、海豹、鲸类等海洋哺乳动物中,幼虫主要寄生于鱼类、头足类等小型海洋动物体内.异尖线虫幼虫被人误食可引起人异尖线虫病,危害健康.传统的形态学分类方法无法对异尖线虫进行准确的鉴定,阻碍了异尖属线虫种群的深入研究.近年来随着分子生物技术的发展和应用,异尖线虫的研究取得了许多重要的进展.本文主要从分类学的角度,综述异尖线虫生活史、宿主偏好、成虫和幼虫形态学分类、分子生物学分类、全球分布情况等方面的研究进展.

[目的]初步探究海洋线虫与微生物的相互作用对碳、氮循环的影响.[方法]利用16S rRNA和18S rRNA基因高通量测序方法,对33个近岸沉积物样品中细菌、古菌和真核生物的多样性进行调查;对海洋线虫与细菌、海洋线虫与古菌的共现性进行网络分析,并采用Spearman统计学方法,识别出与海洋线虫共现性呈显著相关性的微生物种类.[结果]在夏季,红树林和潮间带泥滩样品中线虫OTU平均相对丰度基本呈随深度增加而递减趋势;冬季的红树林样品中发现相类似变化规律,只有在冬季潮间带泥滩样品中线虫OTU平均相对丰度在深层较高于表层.相对丰度最高的海洋线虫隶属于单宫目(47％)、色矛目(19％)、刺嘴目(16％)和垫刃目(9％),它们与热源体古菌、深古菌、γ-和6-变形菌等微生物有显著正/负相关关系.[结论]在香港米埔湿地沉积物中,与相对丰度最高的5种线虫显著相关的几大类微生物均在碳、氮、硫等元素循环方面起十分重要的作用,暗示海洋线虫与微生物潜在的相互作用对元素地球化学循环具有重要影响.研究结果有助于深入了解线虫在生态系统中未被揭示的生态功能,有助于更清晰地认识海洋线虫在底栖生态系统中所扮演的角色.

目的 研究海洋贝类象拔蚌多肽提取物(Panopea generosa protein hydrolyzate;PgPH)的抗氧化作用.方法 通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除实验检测PgPH的体外抗氧化活性,利用HepG2细胞氧化应激模型验证PgPH的抗氧化活性并检测对细胞抗氧化酶活力的影响,利用模式动物秀丽线虫氧化应激模型探讨PgPH的体内抗氧化活性.结果 PgPH对DPPH自由基具有较好的清除能力,在质量浓度为1.0 mg/mL时DPPH清除率近60％,当浓度高于4.0 mg/mL时清除率达到90％.PgPH能缓解H2O2对HepG2细胞的氧化损伤,同时提高细胞超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等抗氧化酶活力.PgPH还能显著提高在百草枯氧化损伤下秀丽线虫的存活率.结论 PgPH不仅具有缓解细胞氧化性损伤的潜力,还具有提高秀丽线虫在百草枯氧化胁迫条件下存活率的能力.这些结果为象拔蚌相关产品的开发提供了实验基础.

目的 了解辽宁省市售海洋鱼类异尖线虫感染情况,并对异尖线虫Ⅲ期幼虫进行分子鉴定,确定感染异尖线虫虫种.方法 采用直接剖检法从市售海鱼中检出异尖线虫Ⅲ期幼虫后,在显微镜下观察形态进行初步鉴定;提取异尖线虫虫体总DNA,采用通用引物扩增异尖线虫核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列,并对其ITS1和ITS2序列进行序列比对和进化分析.结果 采集222份市售海鱼样品进行剖检,共有70份检出异尖线虫幼虫,检出率为31.53％,其中小黄花鱼和带鱼的检出率较高,感染度最高为233条/份.测序结果经序列比对和进化分析,结果显示检出的异尖线虫幼虫分别为异尖线虫属和宫脂线虫属的5种异尖线虫,包括简单异尖线虫(Anisakis simplex)、派氏异尖线虫(Anisakis pegreffii)、典型异尖线虫(Anisakis typical)、内弯宫脂线虫(Hysterothylcaium aduncum)和厦门宫脂线虫(Hysterothylacium amoyense).结论 辽宁省市售海洋鱼类异尖线虫感染情况较严重,且感染的异尖线虫种类多样,其感染优势种为派氏异尖线虫.

于2013-2014年间在海坛岛长江澳沙滩采样,对小型底栖动物的类群组成、丰度及分布,自由生活海洋线虫(简称海洋线虫)群落的优势属、摄食类型、年龄结构及性比、物种多样性等方面进行研究.结果表明:小型底栖动物年平均丰度为(810.87±696.75)个/10 cm2.在鉴定出的16个类群中,海洋线虫的丰度占小型底栖动物总丰度的52.36％,其次为腹毛虫,占21.14％.海洋线虫的年平均丰度为(424.54±400.23)个/10 cm2,季节变化总趋势为夏季((783.45+336.45)个/10 cm2)＞春季((600.67±309.42)个/10 cm2)＞秋季((298.26±424.57)个/10 cm2)＞冬季((113.05±95.79)个/10 cm2).4个季度共鉴定出海洋线虫105种或分类实体,隶属于75个属,26个科.4个季度数量百分比超过5％的优势海洋线虫属有10个,分别是Axonolaimus、Theristus、Metachromadora、Mesacanthion、Rhynchonema、Epacanthion、Microlaimus、Viscosia、Lauratonema和Enoploides,不同季度的优势属存在差异.CLUSTER聚类表明,春、夏、秋季各潮带海洋线虫群落较为相似,与冬季差异较大.海洋线虫4种摄食类型年平均丰度百分比由高到低的顺序是1B (32.19％)＞2A (31.32％)＞2B (31.12％)＞1A (5.37％);春夏季以2A和1B为主导,秋冬季以2B和1B为主导.海洋线虫群落的物种多样性最高值出现在秋季(d=8.45,H'=3.36),最低在冬季(d=7.36,H,=2.92),春季与夏季的多样性相当;周年幼体的数量所占比例为45.47％,成体中雌雄个体比例为1.10∶1.

分别于2011年6月和11月,搭载“东方红2号”科学调查船在渤海海域(37.0°-40.0°N,118.0°-122.0°E)进行了小型底栖动物的取样,对小型底栖动物类群组成、丰度、生物量、空间分布及其与环境因子的关系进行了研究.结果 表明:研究海域小型底栖动物分布不均匀,表现为黄河口附近及近岸海域小型底栖动物丰度显著低于其他海域.小型底栖动物6月平均丰度高于11月,分别为(1012.7±519.1)个/10 cm2和(829.5±385.8)个/10 cm2,6月平均生物量低于11月,分别为(570.8±307.6) μg干重/10 cm2和(661.3±310.9)μg干重/10 cm2.两个航次共鉴定出18个小型底栖动物类群,其中自由生活海洋线虫为最优势类群,分别占小型底栖动物总丰度的95.0％和90.3％,占小型底栖动物总生物量的67.4％和45.3％.其他数量上较重要的类群还有底栖桡足类、多毛类、动吻类和双壳类等.其中,多毛类丰度具有显著的季节差异,其11月丰度高于6月.两个航次分别有93.6％(6月)和91.1％(9月)的小型底栖动物分布在0-5 cm的表层沉积物内,没有表现季节性垂直迁移.对小型底栖动物生物数据与环境因子的相关分析结果显示,小型底栖动物的丰度与沉积物中值粒径、含水率呈显著负相关,与有机质含量呈极显著负相关,表明这三个因子是决定研究海域小型底栖动物分布的重要因素.小型底栖动物群落组成与环境因子的BIOENV相关分析表明,水深、有机质含量的组合能够最好地解释小型底栖动物群落结构的差异.与渤海海域30年来的小型底栖动物研究比较发现,在过去30年里,渤海小型底栖动物(包括海洋线虫)丰度逐渐增加,而其中的底栖桡足类丰度却在逐渐减少.沉积环境的变化以及人类干扰是引起渤海海域小型底栖动物丰度变化的重要因素.

该文设计9种分离培养基,采用稀释涂布法从14份真红树植物的46份组织样品中分离纯化内生细菌.并基于菌株形态学特征和16S rRNA基因序列确定分离菌株的种属及分析其物种多样性,采用秀丽隐杆线虫模型筛选菌株延缓衰老活性.结果表明:(1)通过基因序列去重复后从46份真红树植物组织样品中获得32株海洋细菌,基于菌株16S rRNA基因序列信息分析,覆盖12科17属,其中芽孢杆菌属(Bacillus)为优势菌属,并获得1株疑似橙单胞菌属(Aurantimonas)新种,16S rRNA基因序列相似性低于97％;(2)经过秀丽隐杆线虫粗筛发现3株海洋细菌具有显著延缓线虫衰老的活性(P<0.05).以上结果表明海南西海岸真红树内生细菌具有物种多样性,部分菌株具有延缓线虫衰老活性.

为寻找新型抗衰老药物,该文以海南西海岸红树林伴生植物为研究对象,采用9种不同培养基从7种伴生植物21份样品中分离纯化放线菌,通过PCR扩增,16S rRNA基因序列分析已纯化放线菌的多样性,利用秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)模型筛选菌株来进行延缓衰老活性研究.结果表明:(1)从7种伴生植物21份样品中共分离到26株海洋放线菌,隶属于9科15属,分别为拟诺卡菌属、短状杆菌属、短小杆菌属、Demequina、戈登氏菌属、类诺卡氏菌属、Lysinimicrobium、细杆菌属、假诺卡氏菌属、微球菌属、原小单孢菌属、拟无枝酸菌属、Yimella、北里孢菌属和链霉菌属,其中链霉菌属为优势菌属.(2)经秀丽隐杆线虫模型筛选,发现有2株海洋放线菌的发酵粗提物具有延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用.综上结果说明海南西海岸红树林伴生植物中含有丰富多样的药用放线菌资源,为海洋放线菌抗衰老研究奠定了基础.

为更好地开发利用海洋微生物资源积累丰富的放线菌菌种,该文以海南西海岸潮间带区域四种真红树根系土壤为研究对象,分析了红树林根系放线菌物种多样性组成及其代谢产物活性.该研究以9种不同培养基为分离介质,采用纯培养方法和三区划线法分离纯化菌株,结合放线菌形态学特征及其16S rRNA基因序列结果开展多样性分析.放线菌发酵液经乙酸乙酯萃取,利用秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)测试其延缓衰老活性.结果表明:(1)共分离获得22株放线菌,隶属于4目7科9属,其中链霉菌属(Strep-tomyces)为优势菌群,并初步确认IMDGX 6012、IMDGX 6028、IMDGX 6118、IMDGX 6326、IMDGX 61195株放线菌可能为潜在的新物种.(2)发酵产物延缓衰老研究结果表明,8株放线菌的代谢产物可显著延长线虫寿命(P<0.05);其中,IMDGX 6028和IMDGX 6118作为拟无枝酸菌属(Amycolatopsis)和短小杆菌属(Curto-bacterium)的潜在新物种,具有极显著延缓衰老活性(P<0.01),与空白组比较,可分别延长线虫寿命的22.2％和26.6％.综上结果表明海南西海岸真红树根系土壤具有丰富的可培养放线菌资源,具有发现放线菌新物种和延缓衰老活性菌株的潜力.

为了发掘红树林内生放线菌资源和进行新型海洋药物研究,该文选择海南西海岸14种真红树的根、茎、叶、花、胚轴为研究对象,采用9种不同分离培养基[改良的高氏培养基(AGG)、海藻糖-天冬酰胺培养基(M4)、海藻糖-脯氨酸培养基(M5)、改良ISP5培养基(M7)、精氨酸-天冬酰胺培养基(M9)、改良淀粉-水解酪素培养基(M10)、酪氨酸-天冬酰胺培养基(P7)、燕麦培养基(P3)、棉籽糖-组氨酸培养基(M11)],结合稀释涂布法和三线划线法从真红树组织中分离菌株,基于菌株16S rRNA基因序列信息等分子生物学鉴定方法对获得的海洋放线菌进行多样性分析,并使用模式生物秀丽隐杆线虫对所得内生放线菌的延缓衰老活性进行研究.结果表明:(1)从46份真红树组织中共获得24株放线菌,隶属于7科11属,其中9株菌株为链霉菌属(Streptomyces),且IMDGX 6270、IMDGX 6137和IMDGX 6173为3株疑似潜在新菌株.(2)秀丽隐杆线虫模型筛选发现4株放线菌(IMDGX 6157、IMDGX 6182、IMDGX 6248、IMDGX 6360)具有延缓衰老的活性,与空白组比较,生存时间分别延长17.16％、28.11％、29.05％、27.10％.综上结果说明海南西海岸区域真红树植物中可能含有较丰富的放线菌资源,能够为延缓衰老药物的研发提供新来源.