目的:探讨H 2S诱导胃黏膜细胞(gastric mucosal epithelial cells，GES-1)凋亡的作用机制。 方法:在不同浓度的H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)抑制剂炔丙基甘氨酸(propargylglycine，PAG)的作用下，外源性H 2S供体NaHS(400 μmol/L)作用于胃黏膜细胞GES-1。通过AnnexinV-PE/7-AAD双标染色法利用MUSE细胞状态分析仪检测细胞凋亡率，蛋白质印迹检测Caspase-3表达。 结果:与对照组比较，NaHS组GES-1细胞凋亡率增高( P<0.001)、Caspase-3激活( P<0.001)；与NaHS组比较，NaHS-PAG 100 μmol/L组的早期凋亡率降低( P<0.001)，Caspase-3断裂带(相对分子质量约为17×10 3)表达降低( P<0.001)；而NaHS-PAG 500 μmol/L组及NaHS-PAG 1 000 μmol/L组细胞晚期凋亡率都增高( P均<0.001)，Caspase-3断裂带表达都增加( P＝ 0.003、 P<0.001)，差异有统计学意义。 结论:PAG双向调控NaHS诱导胃黏膜细胞GES-1凋亡。

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide，H 2S)诱导胃黏膜上皮细胞-1(gastric mucosal epithelial-1，GES-1)的免疫反应机制。 方法:分别设立对照组、炔丙基甘氨酸(propargylglycine, PAG)浓度组(PAG分别为100 μmol/L，PAG 500 μmol/L，PAG 1000 μmol/L)和NaHS(NaHS 400 μmol/L)作用组(NaHS组，NaHS-PAG 100 μmol/L组，NaHS-PAG 500 μmol/L组，NaHS-PAG 1000 μmol/L组)。在不同浓度H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)抑制剂PAG(100 μmol/L，500 μmol/L，1000 μmol/L)作用下，通过添加400 μmol/L外源性NaHS作用于胃黏膜细胞GES-1进行研究。Calcein/PI细胞活性与细胞毒性实验检测NaHS对GES-1细胞膜渗透性的影响；酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞内的CSE的活性及H 2S、白细胞介素(interleukin，IL)-1β和IL-18含量；DCF(DCFH-DA)/ Hoechst33342双标染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。 结果:Calcein/PI细胞活性与细胞毒性实验结果显示，PAG和NaHS不破坏GES-1细胞膜完整性，PAG 500 μmol/L、PAG 1000 μmol/L及NaHS 400 μmol/L抑制细胞增殖，抑制率分别为(48.11±2.29)%、(60.87±2.42)%、(59.83±2.3)%。100 μmol/LPAG阻碍了NaHS的增殖抑制作用，抑制率为(47.80±2.65)%，PAG 500 μmol/L和PAG1000 μmol/L促进了NaHS的增殖抑制作用，抑制率分别为(65.16±1.02)%、(70.90%±1.30)%; ELISA结果显示，NaHS作用GES-1细胞后，与对照组相比，细胞内CSE的活性明显增高[U/mL：(23.33±0.77)比(6.55±1.84)]、H 2S含量[μmol/L：(13.27±0.83)比(1.39±0.29)]，炎性因子IL-1β水平增加[ μg/L：(3.48±0.26)比(0.77±0.11)]，IL-18水平降低[ng/L：(1.15±0.36)比(3.19±0.90)]，差异均有统计学意义( P值分别为0.00，0.00，0.00，0.02)，镜下观察显示ROS含量增加。PAG 100 μmol/L弱化NaHS的作用，差异均具有统计学意义( P值均<0.05)，而PAG 500 μmol/L和PAG 1000 μmol/L增强NaHS的作用，差异均具有统计学意义( P值均<0.05)。此外，IL-18表达与IL-1β的表达呈负相关( r＝－0.49， P<0.05)。 结论:PAG双向调节H 2S诱导胃黏膜细胞GES-1免疫反应。

目的:探讨 18F－DEVD－Cys(StBu)－PPG(CBT)－AmBF 3( 18F－1；其中DEVD：天冬氨酸－谷氨酸－缬氨酸－天冬氨酸，Cys：半胱氨酸，StBu：叔丁硫基，PPG：炔丙基甘氨酸；CBT：2－氰基苯并噻唑；AmBF 3：2－叠氮乙基－ N， N－二甲基氨基甲基－三氟硼酸盐)PET显像在三阴性乳腺癌(TNBC)早期放疗反应监测中的应用潜力。 方法:构建MDA－MB－231荷瘤裸鼠模型10只，通过随机抽样法分为放疗组与未放疗组(各5只)，放疗组行单次照射法放疗(8 Gy)。2组均行 18F－1 microPET显像，分析注射后不同时间点(注射后2.5~57.5 min，间隔5 min)2组肿瘤和肌肉的摄取情况，并通过放射自显影、HE染色及免疫荧光染色等验证探针在凋亡细胞中的特异性摄取。采用重复测量方差分析、单因素方差分析处理数据。 结果:18F－1 microPET显像示，放疗组肿瘤与肌肉摄取差异有统计学意义( F＝20.27， P＝0.011)，注射后7.5 min放疗组肿瘤摄取最高，为(4.64±0.35)每克组织百分注射剂量率(%ID/g)。未放疗组肿瘤与肌肉摄取差异无统计学意义( F＝1.81， P＝0.215)。放疗组肿瘤/肌肉(T/M)比值高于未放疗组( F＝31.95， P＝0.005)，其中注射后47.5 min最高，为2.49±0.46。放射自显影示放疗组肿瘤放射性高于放疗组肌肉、未放疗组肿瘤及肌肉( F＝116.79， P<0.001)。HE染色及免疫荧光染色表明， 18F－1能特异性检测放疗后肿瘤细胞内激活的胱天蛋白酶－3(caspase－3)的活性。 结论:18F－1能够特异性识别TNBC放疗后被激活的caspase－3，通过凋亡PET显像实现分子水平的放疗反应监测。

目的 探讨硫氢化钠(NaHS,硫化氢供体)对兔动脉粥样硬化的调节作用.方法 40只新西兰兔分为正常组、模型组、NaHS组、炔丙基甘氨酸组(PPG,胱硫醚-γ-裂解酶合成酶抑制剂),每组各10只.正常组为普通饲料饲养,其他各组均以高脂饲养(2％胆固醇+10％猪油).12周后检测血脂含量包括三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);亚甲蓝法测定血清中硫化氢(H2S)的含量;比色法检测氧化还原指标超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量;HE染色观察主动脉根部组织病理学变化.结果 相对于模型组,NaHS组兔血清中血脂变化差异无统计学意义;血清中H2S的含量和SOD活性明显上升,MDA含量明显下降;HE染色显示内膜/中层厚度比值,I+M、内膜/中层面积的比值明显下降(P＜0.05).相对于NaHS组,PPG组中H2S含量和SOD活性明显下降,MDA含量明显上升;HE染色显示内膜/中层厚度比值、I+M、内膜/中层面积的比值明显升高(P＜0.05).结论 应用外源性硫化氢可通过改变机体氧化应激状态,抑制动脉粥样硬化的形成.

目的 研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠 2 型糖尿病心肌病(DCM).方法 将小鼠心房肌细胞系HL-1 分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500 μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100 μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚 γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和 N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理 72h组.Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2 相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2 与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用.结果 与对照组比高糖高脂处理HL-1 细胞后CSE、溶质载体家族 7 成员 11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达.高糖高脂组ROS含量高于NaHS组.与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1 与Nrf2 的相互作用增加,Nrf2 泛素化水平明显增加.结论 硫氢化钠减轻Nrf2 的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达.

目的 探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对高氧肺损伤新生大鼠肺损伤的作用及机制.方法 将80只新生SD大鼠随机分为对照组、高氧组、硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)+高氧组、H2S释放抑制剂炔丙基甘氨酸(propargylglycine,PPG)+高氧组4组,每组20只.NaHS+高氧组入组时腹腔注射1次NaHS 90 μmol/kg,PPG+高氧组注射PPG 50 mg/kg,对照组和高氧组给予等量0.9％ NaCl腹腔注射.对照组在空气中饲养,其余3组均置于自制氧箱中并保持氧浓度≥95％.7d后留取肺组织标本,观察肺组织形态学改变,检测肺组织匀浆H2S含量及肺湿重/干重(wetweight/dry weight,W/D)比值,测定肺组织匀浆丙二醛(malondialdehyde,MDA)、诱生型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)活性、一氧化氮(nitricoxide,NO)含量及iNOS mRNA表达.多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 与对照组相比,高氧组肺泡腔内有少量红细胞外渗及炎性细胞渗出,肺泡间隔炎症细胞浸润并增宽,NaHS+高氧组较高氧组病变程度轻,PPG+高氧组较高氧组病变程度重.高氧组肺组织H2S含量[(117.6 ±20.4) μmol/L]低于对照组[(184.3 ±13.7) μmol/L]和NaHS+高氧组[(247.3 ±32.4) μmol/L],高于PPG+高氧组[(89.2±8.3)μmol/L];高氧组W/D[(5.81±0.22)]、MDA含量[(1.69 ±0.14) nmol/ml]、iNOS活性[(2.24 ±0.19) U/mg prot]、NO含量[(22.37 ±3.04)×10-3μmol/g prot]、iNOS mRNA表达量[(1.43±0.09)]高于对照组[W/D:(5.06±0.15),MDA:(0.78±0.08)nmol/ml,iNOS:(1.18 ±0.18) U/mg prot,NO:(7.49±1.91)×10.μmol/g prot,iNOS mRNA:(0.90±0.08)]和NaHS+高氧组[W/D:(5.59±0.19),MDA:(1.44±0.11) nmol/ml,iNOS:(1.84±0.27) U/mg prot,NO:(14.23±2.00)×10-3 μmol/g prot,iNOS mRNA:(1.28±0.10)],低于PPG+高氧组[W/D:(6.18 ±0.26),MDA:(1.99 ±0.19) nmol/ml,iNOS:(2.66±0.23) U/mg prot,NO:(30.94±3.31)×103 μmol/g prot,iNOS mRNA:(1.73±0.06)],差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 外源性H2S可能通过下调肺组织iNOS mRNA的表达降低iNOS活性、减少NO生成,从而发挥对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用.

目的 探讨内源性硫化氢(H2S)对乙酸诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响.方法 健康昆明小鼠40只,随机分为4组:对照组、模型组、硫氢化钠(NaHS)组、DL-炔丙基甘氨酸(PAG)组.小鼠禁食12 h后,模型组、NaHS组及PAG组给予单次8%的乙酸0. 15 mL灌肠建立小鼠溃疡性结肠炎模型.灌肠后24 h,NaHS组、PAG组分别腹腔注射H2S供体NaHS(50 μmol/kg)及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)抑制剂PAG(10 mg/kg),并对小鼠的疾病活动指数(disease activity index, DAI)进行评估. 3 d后处死小鼠,取结肠组织进行大体和病理学损伤评分,生化法检测病变结肠组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽( GSH)及血清H2S,ELISA法检测结肠组织血红素加氧酶1(HO-1)、醌NADH脱氢酶1(NQO1),Western印迹法检测结肠组织CSE的表达.结果 与对照组相比,模型组、NaHS组、PAG组的DAI及大体、病理学损伤评分和病变结肠组织MDA含量均增高( P＜0. 05),NaHS组较模型组降低(P＜0. 05),PAG组则高于NaHS组及模型组( P＜0. 05). PAG组血清H2S含量及结肠CSE表达量均低于其他3组(P＜0. 05).相较于对照组及NaHS组,模型组血清H2S含量降低( P＜0. 05),结肠CSE表达量升高(P＜0. 05).模型组结肠组织HO-1、NQO-1、GSH含量和SOD活力均低于对照组( P＜0. 05),NaHS组则显著高于对照组(P＜0. 05),PAG组低于NaHS组及模型组(P＜0. 05).结论 在乙酸诱导的溃疡性结肠炎模型中,H2S可抑制小鼠的肠黏膜损伤,其机制可能与H2S上调抗氧化酶有关.

目的 研究硫化氢(H2 S)对长期过量饮酒小鼠心肌纤维化的作用.方法 44只实验小鼠随机分成4组:对照组、模型组、硫氢化钠(NaHS)组和DL-炔丙基甘氨酸(PAG)组.除对照组外,其他小鼠采用每日自由饮用4％(Vol/Vol)的乙醇水溶液12 w诱导酒精性心肌纤维化模型.另外,NaHS组小鼠予每日腹腔注射NaHS溶液(50μmol/kg).PAG组小鼠予每日腹腔注射PAG溶液(40 mg/kg).12 w后,用VG染色观察胶原沉积,免疫组化测定心肌中Ⅰ型胶原蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-221的表达水平.结果 模型组小鼠心肌胶原沉积较对照组明显加重,Ⅰ型胶原蛋白表达明显增多,miR-221表达也显著上调(P<0.05).NaHS组上述指标变化均得到明显改善.相反,PAG组上述指标变化进一步明显加重.结论 H2S具有改善长期过量饮酒导致的心肌纤维化的作用,其机制可能与下调miR-221的表达有关.

目的 研究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对脓毒症大鼠心肌损伤的作用,并探讨其作用的可能机制.方法 采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症(cecal ligation and puncture,CLP)模型,将SD大鼠随机分为6组:假手术组、假手术+外源性H2S供体硫氢化钠(NaHS)组、假手术+H2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)抑制剂炔丙基甘氨酸(propargylglycine,PAG)组、CLP组、CLP+ NaHS组、CLP+PAG组,每组各24只大鼠.分别于术后6h、12h、24 h处死各组大鼠(即各组分6h、12h、24 h亚组)取血和心肌标本,检测血清肌钙蛋白I(cTnI)水平,大鼠心肌组织HE染色观察病理变化,测定心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)含量,采用RT PCR方法检测心肌组织CSE mRNA表达,Western blot检测大鼠心肌组织核转录因子NF-κB表达.结果 假手术各组及不同时点各指标差异均无统计学意义.与假手术12 h及24 h组相比,CLP 12 h及24 h组血清cTnI质量浓度以及心肌组织病理评分、心肌组织CSE mRNA、NF-κB表达、TNF-α及IL-10含量均升高(P均＜0.05);与CLP 12 h及24 h组相比,CLP+NaHS 12 h及24 h组血清cTnI质量浓度以及心肌组织病理评分、NF-κB表达和TNF-α含量降低(P均＜0.05),CSE mRNA表达和IL-10含量升高(P均＜0.05);而CLP+ PAG12 h及24 h组血清cTnI质量浓度及心肌组织病理评分、NF-κB表达和TNF-α含量升高(P均＜0.05),CSE mRNA表达和IL-10含量降低(P均＜0.05).结论 H2S在脓毒症所致的心肌损伤中起保护作用,这种保护作用的机制可能是通过抑制心肌组织中NF-κB表达、降低心肌组织TNF-α含量和提高心肌组织CSE mRNA表达、IL-10含量而保护心肌组织.

目的:观察硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠肾脏组织纤维化的影响并探讨其作用机制.方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、糖尿病对照(DC)组、糖尿病+硫氢化钠(DM+NaHS)组和糖尿病+炔丙基甘氨酸(DM+PAG)组,每组8只.采用一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备1型糖尿病大鼠模型.造模成功4周后,DM+NaHS组和DM+PAG组大鼠每天分别腹腔注射56μmol/kg NaHS和40 mg/kg PAG溶液.处理4周后,测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平;Masson染色观察肾脏组织胶原纤维变化,计算胶原容积分数(CVF);透射电镜观察肾脏超微结构;利用试剂盒检测肾组织白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和羟脯氨酸(Hyp)水平;Western blot测肾组织TGF-β1、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)和 Ⅳ 型胶原(col-Ⅳ)的蛋白表达水平.结果:与NC组比较,DC组FBG、BUN、SCr、CVF、IL-1β、IL-6、TNF-α 和Hyp均明显增高,肾脏胶原纤维沉积、超微结构损伤明显加重,TGF-β1、Smad3、p-Smad3、p-Smad3/Smad3和col-Ⅳ 表达均明显增加.与DC组比较,除FBG外,DM+NaHS组中上述指标均明显改善;而DM+PAG组中上述指标损伤均进一步加重.结论:H2S可以减轻糖尿病大鼠肾脏纤维化,其机制可能与减少促炎因子释放,下调TGF-β1/Smad3通路,抑制肾脏col-Ⅳ过量生成相关.