目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-182通过靶向特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白2(SATB2)基因对结直肠癌细胞增殖迁移的作用，探讨其对SATB2/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nox4)通路的调节机制。方法:对数期生长人结肠癌细胞(HT-29)细胞，采用脂质体转染法将si-miR-182、Control-si转至HT-29细胞，分别设为Si-miR-182组、N-miR-182组，另取不做任何处理细胞为对照组。测定3组细胞中miR-182基因表达、增殖和迁移、SATB2、nox4、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA和蛋白表达。重复计量资料比较采用重复测量方差分析，两两样本比较采用LSD- t检验。 结果:Si-miR-182组miR-182基因相对表达量(0.35±0.05)低于对照组(1.24±0.26)和N-miR-182组(1.20±0.25)，差异均有统计学意义( t＝7.517、7.455， P<0.05)；Si-miR-182组培养24、48、72 h MTT试验吸光度( A)值均低于对照组和N-miR-182组，差异均有统计学意义(24 h： t＝2.667、2.664；48 h： t＝4.559、4.524；72 h： t＝7.257、6.981； P<0.05)；与培养24 h比较，3组培养48、72 h MTT试验 A值均升高(48 h： t＝5.507、5.092、3.741；72 h： t＝11.330、10.637、9.229； P<0.05)，且72 h MTT试验 A值高于48 h，差异均有统计学意义( t＝7.411、6.941、5.214， P<0.05)。Si-miR-182组细胞迁移率[(53.90±3.19)%]低于对照组[(81.66±5.92)%]和N-miR-182组[(80.35±5.40)%]，差异均有统计学意义( t＝9.231、9.430， P<0.05)；Si-miR-182组细胞SATB2、E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和N-miR-182组(SATB2： t＝10.930、11.158；E-cadherin： t＝9.288、9.369； P<0.05)，nox4、Vimentin mRNA和蛋白相对表达量低于对照组和N-miR-182组，差异均有统计学意义(nox4： t＝8.955、7.590；Vimentin： t＝6.543、6.644； P<0.05)。 结论:沉默miR-182基因可显著抑制结直肠癌细胞增殖及迁移能力，可能通过激活SATB2、E-cadherin的表达、抑制nox4、Vimentin的表达、参与SATB2/nox4通路共同调控。

目的 基于特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白(SATB)2/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nox)4 信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用.方法 收集经手术切除的结肠癌及癌旁组织各 43 例,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析癌组织及癌旁组织中miR-182-5p与SATB2 相对表达,分析miR-182-5p与SATB2 在结肠癌中的相关性.SW480 细胞分为对照组、NC-mimics 组、miR-182-5p-mimics 组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC 组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2 组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组并进行相应转染.TargetScanHuman预测、双荧光素酶报告基因检测、染色质免疫共沉淀分析miR-182-5p与SATB2 的靶向调节关系.噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖、迁移能力;qRT-PCR、Western印迹法检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞SATB2、nox4、E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA与蛋白表达情况.体内异种移植实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2 组肿瘤发展能力,免疫组化检测肿瘤SATB2、nox4 表达情况.结果 与癌旁组织相比,结肠癌组织miR-182-5p表达量明显升高,SATB2 表达量明显降低(P<0.05),miR-182-5p与SATB2 水平呈负相关(P<0.001).miR-182-5p与SATB2 存在结合位点,过表达SATB2 导致miR-182-5p与SATB2 的结合能力明显下降.与对照组、NC-mimics组、NC-inhibitor组相比,miR-182-5p-mimics组细胞增殖能力明显加强,迁移率明显升高,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显下降,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖能力明显降低,迁移率明显下降,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显升高,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显下降(P<0.05).与对照组、NC-mimics组相比,miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组肿瘤体积、质量明显更大,SATB2 表达量明显降低,nox4 表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2 组肿瘤体积、质量明显更小,SATB2 表达量明显上升,nox4 表达量明显下降(P<0.05).结论 miR-182-5p对结肠癌细胞的增殖和迁移能力具有促进作用,能够降低SATB2 表达并影响SATB2/nox4 信号通路及其相关蛋白,SATB2 能够反向调控miR-182-5p表达.

目的:分析特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白2(SATB2)对结直肠癌细胞增殖和转移能力的影响.方法:收集2014年9月~2016年9月期间在我院住院治疗的120例结直肠腺癌患者癌组织及其对应癌旁组织标本.均行免疫组织化学法检测,细胞培养与转染,采用实时荧光定量检测SATB2 miRNA的表达情况;并采用CCK-8法、细胞划痕实验分析SATB2干扰对SW480、LOVO细胞增殖能力与迁移能力的影响.结果:实时荧光定量PCR检测结果发现结直肠癌组织SATB2 miRNA的表达明显低于对应的癌旁组织;与免疫组织化学检测具有一致性,72.50%的结直肠癌患者癌组织SATB2呈低表达,而76.66%的结直肠癌患者癌旁组织SATB2呈高表达,两者差别有统计学意义.培养24h时,癌组织与癌旁组织中SW480、LOVO细胞的增殖速度比较无明显差异,而48h至72 h结直肠癌患者癌组织中SW480、LOVO细胞的增殖速度显著高于癌旁组织,差异有统计学意义.划痕实验结果显示癌组织SW480、LOVO细胞的细胞迁移能力较癌旁组织明显增强.结论:SATB2基因在结直肠癌癌组织和细胞中呈低表达,与结直肠癌SW480、LOVO细胞增殖和转移能力密切相关,故SATB2基因有可能成为结直肠癌新的治疗靶点.

目的 探讨结直肠癌中靶向调控特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白(SATB)2有关的miR-31和miR-182表达水平,并分析其与SATB2的关系.方法 根据候选miRNAs的预测结果,构建SATB2基因3′UTR突变性和野生型的荧光素酶载体,与miRNA抑制物转染、报告基因检测和miRNA模拟物等技术手段相结合,检验候选miRNA是否对SATB2基因的表达具有靶向调控作用,确定miRNA对调控结直肠癌转移相关基因SATB2的靶效性.结果 miR-31和miR-182是靶向调控SATB2的候选基因.结直肠癌组织中miR-31和miR-182表达明显增高(P<0.05),与未转移比较,结直肠癌转移的miR-31和miR-182表达明显增高(P<0.05).慢病毒感染结直肠癌细胞SW480得到稳定过表达.miR-31和miR-182的结直肠癌细胞株SW480/miR-31和SW480/miR-182的增殖能力明显高于对照SW480/Con(P<0.05).SW480/miR-31和SW480/miR-182细胞形成的克隆较对照SW480/Con细胞明显多(P<0.05),SW480/miR-31,停留在G0/G1期的细胞减少,S期的细胞增多,G2/M期细胞增多,SW480/miR-182,G0/G1期的细胞减少,S期细胞增多,G2/M期细胞增多.与对照SW480/Con细胞比较,SW480/miR-31和SW480/miR-182的细胞内荧光素酶的活性明显降低(P<0.05).SATB2基因转染后,miR-31和miR-182细胞体外增殖能力均明显降低(P<0.05).SATB2基因转染后,SW480/miR-31和SW480/miR-182细胞进入G0/G1期,S期细胞减少,G2/M期细胞减少,SATB2基因转染后,miR-31和miR-182细胞运动能力明显降低(P<0.05).与对照组比较,实验组裸鼠的瘤体积和瘤重量均明显增高(P<0.05).与对照组比较,实验组裸鼠瘤的miR-31和miR-182表达均明显增高(P<0.05).结论结直肠癌中靶向调控SATB2细胞的miR-31和miR-182在结直肠癌中的表达水平高低与癌细胞转移、克隆及预后相关,miR-31和miR-182能反向调控SATB2的表达.

目的 研究结肠癌组织特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白2(SATB2)、沉默信息调节因子1(SIRT1)和同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)表达水平及与预后的关系.方法 选取2014年1月—2016年6月我院102例结肠癌,根据患者预后分为死亡组和存活组,检测2组肿瘤组织SATB2、SIRT1及HOTAIR表达水平,并分析其与患者预后的关系.结果 本组中位随访时间为72个月,102例随访期间死亡67例(65.69％),中位总体生存期(OS)为63个月.死亡组肿瘤最大径和AJCC分期Ⅲ+Ⅳ期患者占比均大于存活组,肿瘤分化程度低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).死亡组SATB2阳性率低于存活组,SIRT1阳性率和HOTAIR mRNA相对表达量高于存活组,差异有统计学意义(P<0.01).多因素Cox回归分析显示,肿瘤低分化、AJCC分期Ⅲ+Ⅳ期、SIRT1阳性和HOTAIR mRNA为结肠癌患者死亡的危险因素,SATB2阳性为结肠癌患者死亡的保护因素(P<0.05,P<0.01).SATB2阳性患者中位OS(69个月)长于SATB2阴性患者(54个月),SIRT1阳性患者中位OS(57个月)短于SIRT1阴性患者(78个月),HOTAIR mRNA≥47.85患者中位OS(57个月)短于HOTAIR mRNA<47.85患者(78个月),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 结肠癌组织SATB2、SIRT1和HOTAIR表达均为影响患者预后的重要因素.