犬复孔绦虫(Dipylidium caninum ,Linnaeus,1758)属复孔科,复孔属,常寄生于犬、猫等动物肠道中.当终宿主犬、猫舔毛时病蚤中的似囊尾蚴得以进入,在其小肠内释出发育为成虫.偶可感染人体,引起犬复孔绦虫病.人体感染常因与犬、猫接触时误食病蚤引起.在我国四川、安徽、海南、山东等地均有人体感染病例报告[1-4],其中大部分为 4 岁以下婴幼儿,但本例患者为 25 岁成年女性,较为罕见[5-7].

患儿,女,17个月,云南省腾冲市荷花镇人.2019年4月29日在患儿粪便中发现2条白色、似面条样的虫体,可蠕动,长约0.6 cm,至腾冲市人民医院就诊.查体:身高79 cm,体质量9 kg,饮食、睡眠正常,余无异常;血常规:白细胞9.2×109/L,中性粒细胞31.2％,淋巴细胞57.2％,嗜酸粒细胞4.1％,单核细胞6.8％,嗜碱粒细胞0.7％,红细胞4.6×1012/L,血红蛋白139 g/L.诊断为带绦虫感染(未分型),给予肠虫清(阿苯达唑,西安杨森制药有限公司,生产批号为180614643)口服,100 mg/d×2d.

目的 建立一种新的敏感、特异且能快速检测细粒棘球绦虫G1的重组酶介导扩增技术(Recombinase aided isothermal amplification,RAA). 方法 以细粒棘球绦虫G1(E.granulosus G1,EgG1)线粒体基因序列(GenBank No.AF297617)作为靶序列设计合成引物,以EgG1 DNA为模板进行RAA扩增,反应产物预期大小为284 bp.以聚合酶链式反应(PCR)作为平行对照,应用RAA扩增不同稀释浓度的基因组DNA及梯度稀释的含目的基因片段不同拷贝数的pMD19-T(Simple)克隆质粒,以评价RAA检测方法的检测灵敏度;应用此方法检测多房棘球绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、贾第鞭毛虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA,以评价方法的特异性.方法优化后用于检测感染EgG1的动物组织标本(10份)、模拟现场阳性犬粪标本(3份)以及现场阳性犬粪标本(5份),以验证该项检测技术的可靠性和实用性. 结果 建立的RAA法可在40 min内特异性扩增EgG1的目的基因片段,最低可检测量为10 pg;以重组质粒为模板,RAA法最低检出质粒拷贝数为104个.用建立的RAA法检测其他寄生虫(包括多房棘球绦虫)结果均为阴性.用优化的RAA方法检测感染EgG1的动物组织标本以及阳性粪便标本(包括模拟现场粪便标本),结果均为阳性,且与PCR检测结果一致. 结论 建立的针对EgG1的RAA方法,其具有简便快捷、检测灵敏度与特异性均较好的特点,可望用于细粒棘球绦虫虫种的鉴定以及棘球蚴病基因诊断.

目的 建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA). 方法 以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法.分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05、0.01 ng/μl棘球绦虫基因组DNA及105、104、103、102、10个拷贝/μl的pMD19-T (Simple)克隆质粒,评价mRAA方法的敏感性;分别以牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板,评价mRAA方法的特异性.采用优化后的mRAA方法,分别对3份EgG1和Em混合模拟犬粪样、19份现场采集的棘球绦虫感染动物肝脏组织(10份EgG1感染、9份Em感染)、7份现场采集的棘球绦虫阳性犬粪(5份EgG1感染、2份Em感染)进行检测,验证mRAA方法的可靠性和实用性. 结果 建立的mRAA方法可特异性扩增EgG1和Em线粒体基因片段,长度分别约为250 bp、500 bp.mRAA方法对EgG1和Em基因组DNA的最低检测限为2 pg/μl,对EgG1和Em重组质粒的最低检测限为200个拷贝/μl.mRAA方法对牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA的扩增结果均为阴性.mRAA方法成功检出所有EgG1和Em混合模拟犬粪样、棘球绦虫感染动物肝脏组织、棘球绦虫阳性犬粪样,且检测结果与mPCR一致. 结论 建立的mRAA方法可用于EgG1和Em DNA的快速检测,敏感性、特异性和可靠性均较好.

患儿,男,15个月,浙江省嘉兴市海宁市袁花镇红新村人.2020年1月 15日左右,家属在家中发现患儿粪便中有能伸缩运动的乳白色虫体.1月22日 患儿因肺炎于海宁康华医院住院,在住院期间再次发现粪便中有活动虫体,医生怀疑蛲虫感染,未做其他检查,即给予左旋咪唑驱虫治疗,连服5 d后再次于粪便中发现活动虫体.就诊多家医院未被确诊或被误诊为蛲虫.遂至海宁康华医院送检,观察新鲜虫体,呈长条形,大小约4 mm×2 mm,新鲜时颜色为乳白色,干燥时则为黄色,一端略窄;盖玻片轻压后显微镜下可见数量众多的椭圆形储卵囊,每个储卵囊内含1～30个数量不等的虫卵;虫卵呈圆球形,直径25～40μm,双层卵壳,内含六钩蚴.形态符合犬复孔绦虫(Dipylidium caninum)孕节、储卵囊和虫卵特征(图1),诊断为犬复孔绦虫感染.

目的 基于重组酶介导的等温扩增技术(recombinase-aided isothermal amplification assay,RAA)建立一种快速检测多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和石渠棘球绦虫的多重核酸检测方法,并对其检测效果进行初步评价.方法 分别以多房棘球绦虫(GenBank登录号:NC_000928)、细粒棘球绦虫(GenBank登录号:NC_044548)和石渠棘球绦虫(GenBank登录号:NC_009460)线粒体基因组序列为靶序列,依据RAA引物设计基本原则设计、合成3对引物,并进行多重RAA扩增.分别扩增不同浓度3种棘球绦虫基因组DNA和不同浓度含3种靶基因的重组质粒,以评价多重RAA检测方法的敏感性;同时采用该方法检测3种棘球绦虫及多头带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫、犬复孔绦虫、泡状带绦虫、犬弓首蛔虫、肝片形吸虫、豆状带绦虫、中线绦虫和犬隐孢子虫基因组DNA,以评价该方法的特异性.优化建立的多重RAA法的条件,再检测棘球蚴病病变组织样本、模拟犬粪便样本和现场狐狸粪便样本,以评价该方法的应用价值.结果 所建立的多重RAA检测方法可在39℃时40 min内特异性扩增多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和石渠棘球绦虫线粒体基因片段,长度分别约为540、430 bp和200 bp.该多重RAA法对多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和石渠棘球绦虫基因组DNA的最低检测限为2.0、2.5 pg/μL和3.1 pg/μL,对含多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和石渠棘球绦虫靶基因的重组质粒的最低检测限均可达到200拷贝/μL;该多重RAA法可以同时检测出多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和石渠棘球绦虫单一感染和多重感染,对多头带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫、犬复孔绦虫、泡状带绦虫、犬弓首蛔虫、肝片形吸虫、豆状带绦虫、中线绦虫和犬隐孢子虫无扩增.优化后的多重RAA法能够检测出全部棘球蚴病病变组织样本及模拟犬粪样本和现场狐狸粪便样本中的阳性样品,且与单一PCR法检测结果完全一致.结论 成功建立了一种可用于多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和石渠棘球绦虫基因组DNA快速检测的多重RAA法,特异性和敏感性均较高.

该场犬的来源情况复杂,饲养密度大,且时有牛、羊、猫、鸡等畜禽饲放于场内,使寄生虫感染率提高而种类复杂.近两年来发病尤为突出,轻者影响其生长发育,重者造成死亡.1982年11月～1983年5月,作者进行了寄生虫检查,发现寄生虫8种,其中线虫5种,绦虫2种,昆虫1种(表1),分别属于7科7属.危害最严重的是犬食道虫、阔节裂头绦虫、犬复孔绦虫,穿孔疥螨.食道虫常寄生于动脉弓处,使动脉出血而造成突然死亡.绦虫和穿孔疥螨感染率高,临床症状明显,影响犬的生长发育.