目的:对比猪膀胱脱细胞基质(UBM)和猪脱细胞真皮基质(ADM)对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面促愈合效果的差异。方法:将36只10周龄雄性2型糖尿病BKS db/db小鼠按照随机数字表法分为UBM组和ADM组，每组18只，术前非空腹血糖物质的量浓度大于16.6 mmol/L，于每只小鼠背部制作直径6 mm圆形全层皮肤缺损创面，相应植入猪UBM和猪ADM支架。术后即刻及7、14、28 d，行创面大体观察。术后7、14和28 d，每组各取小鼠6只计算创面上皮化率，计算后处死相应小鼠，取创面组织制作切片。收集2组小鼠术后7与14 d各6张切片行苏木精-伊红(HE)染色、术后7与28 d各6张切片行Masson染色，观察组织病理学变化及支架降解情况。收集2组小鼠术后7、14 d各24张切片，采用免疫组织化学法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和CD31阳性表达量，以分别反映肌成纤维细胞(Fb)、新生血管生长情况；观察巨噬细胞的分布和活化。取2组小鼠术后7、14 d创面组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子β 1(TGF-β 1)mRNA含量。上述指标每组各时间点样本数为6。对数据行析因设计方差分析、 t检验及Bonferroni校正。 结果:(1)大体观察显示，UBM组小鼠创面术后大部分时间点与UBM支架融合佳，ADM组小鼠创面术后大部分时间点与ADM支架融合差；术后28 d，ADM组小鼠创面支架表面部分区域仍未形成表皮，UBM组小鼠创面完全上皮化。术后7、14和28 d，UBM组小鼠创面上皮化率分别为(22.4±6.4)%、(68.6±12.4)%、100.0%，均明显高于ADM组[(4.5±2.2)%、(23.6±4.6)%、(64.2±13.2)%， t＝7.427、9.665、7.655， P<0.01]。(2)HE染色和Masson染色显示，术后7 d，UBM组小鼠创面支架出现大量细胞；术后14 d，细胞占据UBM支架的全部区域；术后28 d，创面形成与正常皮肤结构类似的真皮组织，并且UBM支架原有的纤维形态消失。术后7 d，ADM组小鼠创面支架内部仅出现少量细胞；术后14 d，细胞散布于ADM支架之中；术后28 d，ADM支架原有粗大的胶原纤维形态仍清晰可见。(3)术后7 d，UBM组小鼠创面支架底层出现大量聚集的肌Fb，出现新生血管；术后14 d，UBM支架上层出现均匀分布的肌Fb、新生血管，并且大部分血管实现灌注。术后7、14 d，ADM组小鼠创面支架中仅散在分布肌Fb，无或少量未明显灌注的新生管腔结构。术后7、14 d，UBM组小鼠创面支架中α-SMA阳性表达量明显高于ADM组( t＝25.340、6.651, P<0.01)，CD31阳性表达量也明显高于ADM组( t＝34.225、10.581, P<0.01)。(4)术后7 d，UBM组小鼠创面支架底层出现大量巨噬细胞；术后14 d，巨噬细胞迁入UBM支架内部，发生M2型极化、无M1型极化。术后7 d，ADM组小鼠创面支架底部出现少量巨噬细胞；术后14 d，ADM支架内部巨噬细胞稀少，未发生M2型或M1型极化。(5)术后7、14 d，UBM组小鼠创面组织中FGF-2、VEGF、PDGF和TGF-β 1的mRNA表达量均明显高于ADM组( t＝7.007、14.770、10.670、8.939，7.174、7.770、4.374、4.501, P<0.01)。 结论:猪UBM支架通过诱导肌Fb和巨噬细胞迁入、促血管新生与促愈合生长因子的表达，促进糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面的修复和真皮重建，效果优于猪ADM。

目的:探讨猪膀胱脱细胞基质（UBM）对小鼠骨髓源巨噬细胞的运动和极化情况的影响，为临床创面修复中支架的合理选用提供依据。方法:采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察猪UBM和可吸收敷料的微观结构。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察2种支架浸提液的蛋白质分布。取6只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠（小鼠周龄、性别、品系下同）并提取骨髓源细胞后诱导原代巨噬细胞并鉴定。取3批次巨噬细胞，均分为猪UBM浸提液组和可吸收敷料浸提液组，加入含有相应浸提液的DMEM/F12培养基培养，行划痕试验检测并计算划痕后1、3、7 d的细胞迁移率；行Transwell实验检测培养12、24 h的细胞迁移数量；培养24 h，采用流式细胞仪检测CD206或CD86阳性细胞百分比。以上细胞实验样本数均为3。取12只小鼠，于每只小鼠背部左右两侧各制作1个切口，左侧切口纳入猪UBM组、右侧切口纳入可吸收敷料组，分别植入相应支架。术后7、14 d，行苏木精-伊红染色观测支架中浸润的炎症细胞数量，采用免疫组织化学法观测支架中F4/80、转化生长因子β 1（TGF-β 1）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）阳性细胞数量和Ⅰ型胶原蛋白沉积情况，采用免疫荧光染色检测F4/80、CD86、CD206阳性细胞百分比。以上动物实验样本数均为6。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、独立样本 t检验。 结果:猪UBM的一面为致密的基底膜结构，另一面为含有纤维结构的多孔固有层。可吸收敷料的两面均呈三维多孔结构。在（50~70）×10 3的分子量区间，猪UBM浸提液的泳道出现多条非Ⅰ型胶原蛋白条带，可吸收敷料浸提液的泳道中未出现明显条带。经鉴定，小鼠骨髓源细胞已被成功诱导为巨噬细胞。划痕后1、3、7 d，猪UBM浸提液组细胞迁移率均明显高于可吸收敷料浸提液组（ t值分别为15.31、19.76、20.58， P<0.05）。培养12、24 h，猪UBM浸提液组细胞迁移数量均明显多于可吸收敷料浸提液组（ t值分别为12.20、33.26， P<0.05）。培养24 h，猪UBM浸提液组细胞中CD86阳性细胞百分比为（1.27±0.19）%，明显低于可吸收敷料浸提液组的（7.34±0.14）%（ t=17.03， P<0.05）；猪UBM浸提液组细胞中CD206阳性细胞百分比为（73.4±0.7）%，明显高于可吸收敷料浸提液组的（32.2±0.5）%（ t=119.10， P<0.05）。术后7、14 d，猪UBM组支架中浸润的炎症细胞数量均明显多于可吸收敷料组（ t值分别为6.58、10.70， P<0.05）；猪UBM组支架中F4/80、TGF-β 1、VEGF和MMP-9阳性细胞数量均明显多于可吸收敷料组（ t值分别为46.11、40.69、13.90、14.15，19.79、32.93、12.16、13.21， P<0.05）；猪UBM组支架中Ⅰ型胶原蛋白沉积较可吸收敷料组更显著；猪UBM组支架中CD206阳性细胞百分比均明显高于可吸收敷料组（ t值分别为5.05、4.13， P<0.05），CD86阳性细胞百分比均明显低于可吸收敷料组（ t值分别为20.90、19.64， P<0.05），猪UBM组支架中可见更多的M2型巨噬细胞、可吸收敷料组支架中可见更多的M1型巨噬细胞。 结论:猪UBM可增强小鼠巨噬细胞运动，诱导其发生M2型极化和发挥旁分泌功能，营造含有TGF-β 1等生长因子和MMP-9组织重塑分子的微环境，促进组织新生和细胞外基质重塑。

目的 探讨生物补片在杂交技术切口疝修补术中的安全性和有效性.方法 回顾性分析2012年1月1日至2016年6月31日在中山大学附属第一医院应用生物补片做杂交技术切口疝修补术(即开腹联合腹腔镜辅助下的切口疝修补术)的14例患者临床和随访资料.术中采用生物补片为美国Cook公司生产的Biodesign Surgisis切口疝补片(猪小肠黏膜下层脱细胞基质补片),补片大小9 cm×15 cm～20 cm×25 cm,术中根据所需大小进行必要的修剪,确保补片覆盖缺损边缘超过5 cm.结果 14例患者中男性4例,女性10例;年龄(67.7±11.6)岁,体质指数(25.5±1.7)kg/m2.腹部手术史:行胃肠肿瘤手术7例,阑尾手术2例,上腹部白线疝修补术1例,子宫切除术1例,胆囊切除术1例,脾切除术加门脉断流术1例,右肾、右侧输尿管全切除加膀胱壁部分切除术1例.腹部手术后出现切口感染10例.本次切口疝发生病程为1～180(中位数8)个月.2例难复性疝,1例嵌顿性疝,其余11例为可复性疝;切口疝发生位置:右侧腹壁4例、左侧腹壁1例、脐上正中切口2例、脐下正中切口4例、脐周正中3例.中切口疝3例,大切口疝5例,巨大切口疝6例.全组患者均顺利完成手术,手术时间120～390(202.5±72.9)min,术中测量疝环缺损的长径为(10.9±4.3)cm,短径为(9.3±3.9)cm.清洁手术11例,潜在污染手术2例,污染手术1例.术中出血量(15.0±4.8)ml.术后24 h疼痛数字评分法(NRS)疼痛评分为5.1±0.9,术后第3天为4.2±0.7,术后第7天为3.7±0.9;术后早期首次肛门排气时间为(2.5±0.9)d,早期进流质饮食时间(3.8±1.2)d.全组无围手术期死亡病例,住院时间(21.5±12.0)d;8例患者术后发生并发症,其中术后发热(≥38.5℃)4例,腹腔感染4例,术后伤口并发症8例;术后肠梗阻4例,术后补片下积液5例,肺部感染2例,急性心肌梗死1例.术后Clavien-Dindo并发症分级:0级3例,Ⅰ级3例,Ⅱ级6例,Ⅲ级1例,Ⅳ级1例.全组共13例患者获得随访,随访时间为18.2～61.0(33.2±12.3)月;1例患者因脑梗死于术后38个月死亡;术后出现腹壁不适或慢性疼痛4例,术后疝复发5例,复发时间为(11.0±8.3)月.结论 生物补片能安全有效地用于杂交技术切口疝修补术中,但术后并发症发生率和复发风险较高,其长期疗效有待进一步观察.

背景:采用膀胱无细胞基质作为游离移植物修复尿道缺损,诱导尿道再生取得一定的成果,但该方法仍未能从根本上解决移植物血管再生不足的问题.目的:观察复合血管内皮生长因子的异种膀胱脱细胞基质修复兔尿道缺损的效果.方法:将30只成年新西兰大白兔随机分为5组,每组6只,模型组、对照组、实验组均制作尿道缺损模型,随后对照组、实验组分别采用猪膀胱脱细胞基质、复合血管内皮生长因子的猪膀胱脱细胞基质进行修复,同时设立正常组、假手术组.术后4,12周分批处死动物,进行尿道造影、尿流率及免疫组织化学检测.结果与结论:①实验组术后4,12周的平均尿流率高于模型组、对照组(P<0.05),与正常组、假手术组比较无差异;②术后12周尿道造影显示,实验组尿路线条流畅;模型组、对照组尿路线条欠流畅;③苏木精-伊红染色显示,模型组胶原纤维细胞较多,纤维排列紊乱,有较多淋巴细胞浸润;实验组胶原基质基本降解,新生胶原纤维排列规律,其间血管较多,未见血管瘤等;对照组见团块状胶原沉积,视野内血管较少;④术后12周Masson染色显示,实验组胶原组织沉积明显少于对照组、模型组(P<0.05),接近正常组和假手术组(P>0.05);⑤术后12周CD31染色显示,实验组新生血管数量明显多于对照组、模型组(P>0.05),接近正常组和假手术组(P>0.05);⑥术后12周a-SMA免疫组织化学染色显示,实验组再生肌肉含量明显高于对照组和模型组(P<0.05),接近正常组和假手术组(P>0.05);⑦结果表明,复合血管内皮生长因子的异种膀胱脱细胞基质修复兔尿道缺损,可促进移植物局部血管新生,提高再生尿道肌肉含量,加速局部胶原降解,改善尿道再生微环境,促进尿道更好地再生.

背景:膀胱修补术是目前临床上治疗膀胱缺损的主要方法之一,同源性组织因各种因素的影响来源较少,组织工程膀胱脱细胞基质受到人们越来越多的关注.猪膀胱脱细胞外基质来源广泛,具备天然的细胞外支架结构,成为组织工程膀胱替代材料研究的热点.目的:研究脱细胞猪膀胱作为组织工程支架材料的可行性.方法:取新鲜的猪膀胱,联合液氮冻融、十二烷基硫酸钠、胰蛋白酶脱细胞方法制猪膀胱无细胞基质.按不同脱细胞方法分组:①正常对照组:不做任何处理;②实验组:0.6％胰蛋白酶+5％十二烷基硫酸钠(pH 8.0);③脱细胞对照组:分别用0.75％胰蛋白酶(pH 8.0)、1％胰蛋白酶(pH 8.0)、5％十二烷基硫酸钠(pH 7.6)或10％十二烷基硫酸钠(pH 7.6)处理.通过苏木精-伊红染色和VG染色、DNA定量、α-Gal抗原检测,观察猪膀胱脱细胞效果.结果与结论:苏木精-伊红染色显示实验组猪膀胱细胞成分已基本去除;VG染色显示实验组完整保留了猪膀胱组织的细胞外基质成分;实验组的DNA残留量仅为(49.84±30.13)μg/g,显著低于几个脱细胞对照组(P<0.05);同时其 α-Gal抗原残留也明显低于脱细胞对照组.提示:应用0.6％胰蛋白酶+5％十二烷基硫酸钠处理猪膀胱,在完整保留猪膀胱组织细胞外基质的同时,可有效去除其细胞成分,为构建脱细胞猪膀胱支架提供一定参考价值.

1 简介脱细胞组织被广泛应用于临床组织修复和再生.一些组织如皮肤、小肠黏膜下层、膀胱,以及来源于人、猪和牛的心包膜,已经可进行脱细胞化并制成商用支架[1].同时,在基础研究和临床前研究中表明,还有大量的其他组织和器官已经经过脱细胞化,并应用于再生医学的各个方面[2].脱细胞化后遗留下的细胞外基质(ECM),作为组织的结构支撑以及细胞内的生物化学和生物物理信号的来源发挥着关键作用.ECM通过这两个角色指导细胞增殖、迁移、分化和行为[3].