目的:对比猪膀胱脱细胞基质(UBM)和猪脱细胞真皮基质(ADM)对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面促愈合效果的差异。方法:将36只10周龄雄性2型糖尿病BKS db/db小鼠按照随机数字表法分为UBM组和ADM组，每组18只，术前非空腹血糖物质的量浓度大于16.6 mmol/L，于每只小鼠背部制作直径6 mm圆形全层皮肤缺损创面，相应植入猪UBM和猪ADM支架。术后即刻及7、14、28 d，行创面大体观察。术后7、14和28 d，每组各取小鼠6只计算创面上皮化率，计算后处死相应小鼠，取创面组织制作切片。收集2组小鼠术后7与14 d各6张切片行苏木精-伊红(HE)染色、术后7与28 d各6张切片行Masson染色，观察组织病理学变化及支架降解情况。收集2组小鼠术后7、14 d各24张切片，采用免疫组织化学法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和CD31阳性表达量，以分别反映肌成纤维细胞(Fb)、新生血管生长情况；观察巨噬细胞的分布和活化。取2组小鼠术后7、14 d创面组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子β 1(TGF-β 1)mRNA含量。上述指标每组各时间点样本数为6。对数据行析因设计方差分析、 t检验及Bonferroni校正。 结果:(1)大体观察显示，UBM组小鼠创面术后大部分时间点与UBM支架融合佳，ADM组小鼠创面术后大部分时间点与ADM支架融合差；术后28 d，ADM组小鼠创面支架表面部分区域仍未形成表皮，UBM组小鼠创面完全上皮化。术后7、14和28 d，UBM组小鼠创面上皮化率分别为(22.4±6.4)%、(68.6±12.4)%、100.0%，均明显高于ADM组[(4.5±2.2)%、(23.6±4.6)%、(64.2±13.2)%， t＝7.427、9.665、7.655， P<0.01]。(2)HE染色和Masson染色显示，术后7 d，UBM组小鼠创面支架出现大量细胞；术后14 d，细胞占据UBM支架的全部区域；术后28 d，创面形成与正常皮肤结构类似的真皮组织，并且UBM支架原有的纤维形态消失。术后7 d，ADM组小鼠创面支架内部仅出现少量细胞；术后14 d，细胞散布于ADM支架之中；术后28 d，ADM支架原有粗大的胶原纤维形态仍清晰可见。(3)术后7 d，UBM组小鼠创面支架底层出现大量聚集的肌Fb，出现新生血管；术后14 d，UBM支架上层出现均匀分布的肌Fb、新生血管，并且大部分血管实现灌注。术后7、14 d，ADM组小鼠创面支架中仅散在分布肌Fb，无或少量未明显灌注的新生管腔结构。术后7、14 d，UBM组小鼠创面支架中α-SMA阳性表达量明显高于ADM组( t＝25.340、6.651, P<0.01)，CD31阳性表达量也明显高于ADM组( t＝34.225、10.581, P<0.01)。(4)术后7 d，UBM组小鼠创面支架底层出现大量巨噬细胞；术后14 d，巨噬细胞迁入UBM支架内部，发生M2型极化、无M1型极化。术后7 d，ADM组小鼠创面支架底部出现少量巨噬细胞；术后14 d，ADM支架内部巨噬细胞稀少，未发生M2型或M1型极化。(5)术后7、14 d，UBM组小鼠创面组织中FGF-2、VEGF、PDGF和TGF-β 1的mRNA表达量均明显高于ADM组( t＝7.007、14.770、10.670、8.939，7.174、7.770、4.374、4.501, P<0.01)。 结论:猪UBM支架通过诱导肌Fb和巨噬细胞迁入、促血管新生与促愈合生长因子的表达，促进糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面的修复和真皮重建，效果优于猪ADM。

目的:利用膀胱脱细胞基质(BAM)和膀胱上皮细胞构建组织工程管状移植物(TETG)，在兔模型上验证其进行尿流改道的可行性。方法:选取雄性新西兰大白兔48只，将其分为对照组和实验组，各24只，首先制作兔的BAM，体外培养扩增兔膀胱上皮细胞，观察上皮细胞在BAM上的生长情况。将复合物包绕尿管制作成长为4 cm、长径为0.8 cm的TETG，使膀胱上皮细胞位于管腔内面，将TETG移植到兔模型上验证其进行尿流改道的可行性。分别于尿流改道术后1、2、4、8周进行组织学、免疫组化检查，术后12周进行静脉尿路造影(IVU)检查流出道的通畅情况。结果:BAM行HE检测染色显示未见细胞生长；膀胱上皮细胞种植到BAM上的生长曲线结果显示细胞生长良好。将TETG移植到动物体内进行尿流改道，结果显示，实验组均存活，取材时发现移植物与盆腔脂肪轻度粘连，未见明显尿瘘、狭窄及严重的肾积水。组织学检查揭示了有管腔上皮的生长。免疫组化检查也证实了管腔内上皮的再生情况，TETG移植到体内，随时间增长，内腔覆盖多层的成熟上皮细胞，并可见新生血管形成。术后12周行IVU和膀胱镜检未见梗阻发生。相反，对照组术后1个月内均死亡，尸体解剖见流出道有瘢痕形成、闭锁及双肾重度积水。结论:利用种植有尿路上皮细胞的BAM制作成TETG，并用于动物体内进行尿流改道是可行的，能使流出道的内腔有成熟上皮覆盖，具有防止尿外渗的功能。

目的:研究膀胱平滑肌细胞与膀胱脱细胞基质(BAM)的生物相容性。方法:分离培养兔膀胱平滑肌细胞，采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行鉴定。将以1×10 5个/mL的单细胞悬液均匀接种于制备BAM支架上，通过与单独培养的膀胱平滑肌细胞作对照，绘制两组细胞生长曲线图，对比观察两条生长曲线的差异性。 结果:第4代兔膀胱平滑肌细胞形态为典型的"长梭样"，免疫荧光显示α-SAM表达阳性。膀胱平滑肌细胞能够在BAM上很好地黏附生长，两组细胞生长曲线基本相似。结论:膀胱平滑肌细胞与BAM生物相容性好，可用膀胱平滑肌细胞作为种子细胞，以BAM作为支架材料构建组织工程化尿路移植物。

目的:探讨猪膀胱脱细胞基质（UBM）对小鼠骨髓源巨噬细胞的运动和极化情况的影响，为临床创面修复中支架的合理选用提供依据。方法:采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察猪UBM和可吸收敷料的微观结构。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察2种支架浸提液的蛋白质分布。取6只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠（小鼠周龄、性别、品系下同）并提取骨髓源细胞后诱导原代巨噬细胞并鉴定。取3批次巨噬细胞，均分为猪UBM浸提液组和可吸收敷料浸提液组，加入含有相应浸提液的DMEM/F12培养基培养，行划痕试验检测并计算划痕后1、3、7 d的细胞迁移率；行Transwell实验检测培养12、24 h的细胞迁移数量；培养24 h，采用流式细胞仪检测CD206或CD86阳性细胞百分比。以上细胞实验样本数均为3。取12只小鼠，于每只小鼠背部左右两侧各制作1个切口，左侧切口纳入猪UBM组、右侧切口纳入可吸收敷料组，分别植入相应支架。术后7、14 d，行苏木精-伊红染色观测支架中浸润的炎症细胞数量，采用免疫组织化学法观测支架中F4/80、转化生长因子β 1（TGF-β 1）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）阳性细胞数量和Ⅰ型胶原蛋白沉积情况，采用免疫荧光染色检测F4/80、CD86、CD206阳性细胞百分比。以上动物实验样本数均为6。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、独立样本 t检验。 结果:猪UBM的一面为致密的基底膜结构，另一面为含有纤维结构的多孔固有层。可吸收敷料的两面均呈三维多孔结构。在（50~70）×10 3的分子量区间，猪UBM浸提液的泳道出现多条非Ⅰ型胶原蛋白条带，可吸收敷料浸提液的泳道中未出现明显条带。经鉴定，小鼠骨髓源细胞已被成功诱导为巨噬细胞。划痕后1、3、7 d，猪UBM浸提液组细胞迁移率均明显高于可吸收敷料浸提液组（ t值分别为15.31、19.76、20.58， P<0.05）。培养12、24 h，猪UBM浸提液组细胞迁移数量均明显多于可吸收敷料浸提液组（ t值分别为12.20、33.26， P<0.05）。培养24 h，猪UBM浸提液组细胞中CD86阳性细胞百分比为（1.27±0.19）%，明显低于可吸收敷料浸提液组的（7.34±0.14）%（ t=17.03， P<0.05）；猪UBM浸提液组细胞中CD206阳性细胞百分比为（73.4±0.7）%，明显高于可吸收敷料浸提液组的（32.2±0.5）%（ t=119.10， P<0.05）。术后7、14 d，猪UBM组支架中浸润的炎症细胞数量均明显多于可吸收敷料组（ t值分别为6.58、10.70， P<0.05）；猪UBM组支架中F4/80、TGF-β 1、VEGF和MMP-9阳性细胞数量均明显多于可吸收敷料组（ t值分别为46.11、40.69、13.90、14.15，19.79、32.93、12.16、13.21， P<0.05）；猪UBM组支架中Ⅰ型胶原蛋白沉积较可吸收敷料组更显著；猪UBM组支架中CD206阳性细胞百分比均明显高于可吸收敷料组（ t值分别为5.05、4.13， P<0.05），CD86阳性细胞百分比均明显低于可吸收敷料组（ t值分别为20.90、19.64， P<0.05），猪UBM组支架中可见更多的M2型巨噬细胞、可吸收敷料组支架中可见更多的M1型巨噬细胞。 结论:猪UBM可增强小鼠巨噬细胞运动，诱导其发生M2型极化和发挥旁分泌功能，营造含有TGF-β 1等生长因子和MMP-9组织重塑分子的微环境，促进组织新生和细胞外基质重塑。

随着组织工程技术的进步，关于泌尿系组织工程的研究日益增加，然而组织工程移植物的血管化仍是目前亟待解决的问题。对支架材料进行优化设计，能为促进组织工程膀胱的血管化提供先决条件。研究表明，支架材料的成分、表面特征、孔径和孔隙率是影响移植物血管化的主要因素。此外，实验证明，复合材料如支架材料联合促血管生长因子、血管内皮细胞、带血管蒂的脱细胞基质支架、富含血管网的组织等亦是促进血管化的一种策略。本文就影响尿路组织工程支架血管化因素的最新进展进行综述。

目的:应用自行设计的灌注脱细胞系统制备全膀胱脱细胞基质(BAM)，并探讨采用脂肪干细胞(ADSCs)构建组织工程膀胱的可行性。方法:本研究于2020年10月至2021年4月进行。采用自行设计的膀胱灌注脱细胞系统，按照灌注液流动方向和不同脱细胞液作用时间的不同，制订4种不同的脱细胞方案(分别为A、B、C、D组)。其中A组和B组均以膀胱组织的尿道口作为灌注液的流出道，C组和D组剪去膀胱顶部部分组织以膀胱顶部开口作为灌注液的流出道。A组和C组采用1% Triton X-100作用6 h，1%十二烷基硫酸钠(SDS)作用2 h；B组和D组采用1% Triton X-100作用7 h，1% SDS作用1 h。另设正常膀胱组作为对照，其组织为直接取材的天然膀胱组织，不需要灌注和冷冻保存。通过HE、DAPI、Masson三色染色和阿尔新蓝染色，以及试剂盒定量分析以筛选出快速且高效的脱细胞方案，制备全膀胱支架。以制备的BAM为支架材料，ADSCs为种子细胞构建组织工程膀胱，HE和DAPI染色观察ADSCs在BAM上的分布情况。结果:HE和DAPI染色结果显示C组未见明显的细胞核残留，Masson三色染色和阿尔新蓝染色结果表明C组的胶原结构和糖胺聚糖得到较好保留。C组膀胱壁厚度与正常膀胱组[(975.44±158.62)μm与(1 064.49±168.52)μm]差异无统计学意义( P>0.05)。C组DNA含量[(43.59±4.59) ng/mg ]明显低于正常膀胱组、A组、B组和D组[分别为(532.50±26.69)、(135.17±6.99)、(182.49±13.69)、(84.00±4.38)ng/mg]，差异均有统计学意义( P< 0.05)。C组胶原含量[(10.98±0.29)μg/mg]和糖胺聚糖含量[(2.30±0.18)μg/mg]与正常膀胱组[(11.69±0.49) μg/mg和(2.36±0.09)μg/mg]比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。扫描电镜检查结果显示A~D组制备的BAM表面可见大量的孔隙结构，利于细胞黏附。分离培养ADSCs，流式细胞术鉴定证实CD90和CD29阳性表达，CD45和CD106阴性表达。活/死细胞双染色法和CCK-8检测证实C组制备的BAM无细胞毒性。以C组BAM为支架材料构建组织工程膀胱，HE和DAPI染色可见大量ADSCs分布于组织工程膀胱的表面和内部。 结论:采用自行设计的灌注脱细胞系统制备的全膀胱形态BAM可作为膀胱组织工程的支架材料，构建的组织工程膀胱可用于膀胱修复重建，为进一步临床转化研究提供实验基础。

目的 探讨生物补片在杂交技术切口疝修补术中的安全性和有效性.方法 回顾性分析2012年1月1日至2016年6月31日在中山大学附属第一医院应用生物补片做杂交技术切口疝修补术(即开腹联合腹腔镜辅助下的切口疝修补术)的14例患者临床和随访资料.术中采用生物补片为美国Cook公司生产的Biodesign Surgisis切口疝补片(猪小肠黏膜下层脱细胞基质补片),补片大小9 cm×15 cm～20 cm×25 cm,术中根据所需大小进行必要的修剪,确保补片覆盖缺损边缘超过5 cm.结果 14例患者中男性4例,女性10例;年龄(67.7±11.6)岁,体质指数(25.5±1.7)kg/m2.腹部手术史:行胃肠肿瘤手术7例,阑尾手术2例,上腹部白线疝修补术1例,子宫切除术1例,胆囊切除术1例,脾切除术加门脉断流术1例,右肾、右侧输尿管全切除加膀胱壁部分切除术1例.腹部手术后出现切口感染10例.本次切口疝发生病程为1～180(中位数8)个月.2例难复性疝,1例嵌顿性疝,其余11例为可复性疝;切口疝发生位置:右侧腹壁4例、左侧腹壁1例、脐上正中切口2例、脐下正中切口4例、脐周正中3例.中切口疝3例,大切口疝5例,巨大切口疝6例.全组患者均顺利完成手术,手术时间120～390(202.5±72.9)min,术中测量疝环缺损的长径为(10.9±4.3)cm,短径为(9.3±3.9)cm.清洁手术11例,潜在污染手术2例,污染手术1例.术中出血量(15.0±4.8)ml.术后24 h疼痛数字评分法(NRS)疼痛评分为5.1±0.9,术后第3天为4.2±0.7,术后第7天为3.7±0.9;术后早期首次肛门排气时间为(2.5±0.9)d,早期进流质饮食时间(3.8±1.2)d.全组无围手术期死亡病例,住院时间(21.5±12.0)d;8例患者术后发生并发症,其中术后发热(≥38.5℃)4例,腹腔感染4例,术后伤口并发症8例;术后肠梗阻4例,术后补片下积液5例,肺部感染2例,急性心肌梗死1例.术后Clavien-Dindo并发症分级:0级3例,Ⅰ级3例,Ⅱ级6例,Ⅲ级1例,Ⅳ级1例.全组共13例患者获得随访,随访时间为18.2～61.0(33.2±12.3)月;1例患者因脑梗死于术后38个月死亡;术后出现腹壁不适或慢性疼痛4例,术后疝复发5例,复发时间为(11.0±8.3)月.结论 生物补片能安全有效地用于杂交技术切口疝修补术中,但术后并发症发生率和复发风险较高,其长期疗效有待进一步观察.

目的 研究兔膀胱脱细胞基质(BAMG)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖及分化能力的影响,并探讨其构建膀胱修复材料的可行性.方法 采用正常人骨髓体外分离培养原代hBMSCs.用兔膀胱构建BAMG,制备BAMG浸泡液培养基,并以BAMG浸泡液培养基为基础配制成骨、成脂、成平滑肌分化的诱导剂.将hBMSCs分别用正常培养液、正常诱导液、BAMG浸泡液及BAMG诱导液培养.采用苏木素-伊红(HE)与Masson三色染色法进行组织形态鉴定.采用流式细胞术及活细胞荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记法检测BAMG浸泡液培养基对hBMSCs的生长毒性;分别观察以BAMG浸泡液为基础的诱导剂对hBMSCs成骨、成脂、成平滑肌的分化能力的影响.结果 成功构建BAMG标本,与未处理的膀胱组织相比,已去除绝大多数细胞核,组织结构更加疏松、多孔.BAMG浸泡液与正常培养基对hBMSCs增殖无差异.诱导后的hBMSCs仍能高效分化为成骨、成脂、成平滑肌细胞.结论 BAMG不影响hBMSCs的增殖和分化能力,可作为支架材料,应用于膀胱组织工程中.

背景:采用膀胱无细胞基质作为游离移植物修复尿道缺损,诱导尿道再生取得一定的成果,但该方法仍未能从根本上解决移植物血管再生不足的问题.目的:观察复合血管内皮生长因子的异种膀胱脱细胞基质修复兔尿道缺损的效果.方法:将30只成年新西兰大白兔随机分为5组,每组6只,模型组、对照组、实验组均制作尿道缺损模型,随后对照组、实验组分别采用猪膀胱脱细胞基质、复合血管内皮生长因子的猪膀胱脱细胞基质进行修复,同时设立正常组、假手术组.术后4,12周分批处死动物,进行尿道造影、尿流率及免疫组织化学检测.结果与结论:①实验组术后4,12周的平均尿流率高于模型组、对照组(P<0.05),与正常组、假手术组比较无差异;②术后12周尿道造影显示,实验组尿路线条流畅;模型组、对照组尿路线条欠流畅;③苏木精-伊红染色显示,模型组胶原纤维细胞较多,纤维排列紊乱,有较多淋巴细胞浸润;实验组胶原基质基本降解,新生胶原纤维排列规律,其间血管较多,未见血管瘤等;对照组见团块状胶原沉积,视野内血管较少;④术后12周Masson染色显示,实验组胶原组织沉积明显少于对照组、模型组(P<0.05),接近正常组和假手术组(P>0.05);⑤术后12周CD31染色显示,实验组新生血管数量明显多于对照组、模型组(P>0.05),接近正常组和假手术组(P>0.05);⑥术后12周a-SMA免疫组织化学染色显示,实验组再生肌肉含量明显高于对照组和模型组(P<0.05),接近正常组和假手术组(P>0.05);⑦结果表明,复合血管内皮生长因子的异种膀胱脱细胞基质修复兔尿道缺损,可促进移植物局部血管新生,提高再生尿道肌肉含量,加速局部胶原降解,改善尿道再生微环境,促进尿道更好地再生.

目的 探讨阳极阻滞电刺激骶神经根对神经源性膀胱逼尿肌超微结构恢复作用.方法 研究纳入新西兰兔24只,随机分为对照组(n=8)、脊髓损伤组(n=8)、电刺激组(n=8),采用脊髓夹闭法建立神经源性膀胱模型,在阳极阻滞电刺激骶神经根重建膀胱功能基础上,累计电刺激骶神经根120 h后取材膀胱逼尿肌,电镜观察膀胱逼尿肌超微结构变化.结果 对照组膀胱逼尿肌细胞呈梭形,细胞饱满且排列整齐有序,走向均匀;细胞间距较小且致密,细胞间充斥着大量的中间连接,偶可见胶原及弹性纤维,细胞基质内可见线粒体、高尔基体、内质网及溶酶体等细胞器且胞内未见空泡状改变.脊髓损伤组表现为逼尿肌细胞外形不规则,大小不一且排列混乱无序,细胞间距增宽且细胞间可见大量的胶原纤维,胞突连接、桥粒连接及缝隙连接明显增多,细胞内细胞器增多且大多呈肿胀、空泡化及脱颗粒状改变,肌细胞内肌丝明显减少且走行排序紊乱,细胞膜周围可见高电子密度物质堆积,凋亡细胞增多,细胞内染色质浓缩,核膜表面凹凸不平,出现核固缩和核溶解;与上述脊髓损伤组细胞的超微结构相比,电刺激组肌细胞形状较为规则,大小相对均匀,凋亡细胞明显减少,染色质着色较浅,核固缩及核溶解消失,细胞基质内细胞器肿胀缓解,肌细胞间间隙减小,仅见少量的胶原纤维,中间连接较多而胞突连接及缝隙连接较少.结论 阳极阻滞电刺激兔骶神经根可以重建神经源性膀胱逼尿肌失神经支配,恢复膀胱逼尿肌超微结构,从而稳定膀胱内环境.