地黄为我国传统的常用大宗中药材,具有清热凉血、养阴生津之功效.环烯醚萜苷是地黄药材的主要活性成分,环烯醚萜氧化酶是环烯醚萜苷生物合成途径的关键限速酶.该研究基于转录组数据,筛选到 1 条环烯醚萜氧化酶基因RgIO,对其进行了系统的生物信息学、表达特性和亚细胞定位分析.结果表明,RgIO的编码区为 1 536 bp,编码 511 个氨基酸,相对分子质量 58 258.01.RgIO的蛋白序列包含细胞色素P450 氧化酶的保守结构域和基序,与列当科 3 个植物独脚金、黄独脚金和大花胡麻草的同源蛋白序列一致性最高,与长春花CrIO的序列一致性也高达 77.28%.RgIO在地黄的叶中特异性高表达,而且响应茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导,MeJA处理3、6 h,在叶和块根中其表达量分别增加了 3.15、1.3 倍.亚细胞定位结果显示RgIO分布在内质网上.利用根癌农杆菌介导法在地黄叶片中瞬时表达RgIO,梓醇的含量较瞬时表达空载体的对照增加了 0.82倍.该研究为地黄梓醇的分子调控和生物合成提供了关键的靶基因,也为完整解析地黄梓醇的生物合成途径奠定了基础.

目的:探讨微寒中药玄参及其拆分组分对左甲状腺素钠片所致热证大鼠物质与能量代谢的影响.方法:除空白组外,各组分每日灌胃给予120mg/kg左甲状腺素钠片,造模1小时后灌胃给予玄参总提物水煎液及各拆分组分的水煎液,给药体积为10ml/kg,空白组和模型组给予等体积蒸馏水,连续灌胃15天后处死,测定肝脏葡萄糖激酶(GCK)、6-磷酸果糖激酶1(PFK-1)、丙酮酸激酶(PK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)、柠檬酸合成酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(ICD),肝脏和肌肉糖原合成酶激酶-3(GSK-3)、磷酸化酶(PYGL),肌肉中脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL),肝脏中琥珀酸-细胞色素C还原酶(CCR)、细胞色素C氧化酶(COX)、ATP合酶(ATPase)、腺苷激酶(ADK).结果:与模型对照组相比,玄参总提取物1.350g/kg和大极性环烯醚萜1.205g/kg组GCK、PK、CS、ICD、CCR、COX和ADK值明显降低,玄参总提物1.350g/kg组肝脏中的PYGL含量明显降低,玄参总提物1.350g/kg、苯丙素提取物0.028g/kg组和大极性环烯醚萜1.205g/kg组的ATGL含量显著升高.结论:玄参对热证模型大鼠的物质与能量代谢有抑制作用.

目的 从滇龙胆叶片中克隆单萜合成关键酶环烯醚萜氧化酶(GrIDO)基因及其启动子序列,并进行序列分析.方法 根据滇龙胆转录组GrIDO基因序列设计基因特异性引物,使用RT-PCR方法克隆GrIDO基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,基于在线软件对GrIDO基因序列进行生物信息学分析.同时,根据GrIDO基因ORF序列,设计特异性引物,采用PCR法对该基因启动子序列进行扩增,并进行序列分析.结果 GrIDO基因(GenBank登录号KP722034)ORF全长l 557 bp,编码518个氨基酸;GrIDO蛋白相对分子质量58 920,理论等电点8.40,属于细胞色素P450超家族成员,可能定位于叶绿体;无信号肽,为亲水不稳定蛋白,主要由α-螺旋(51.07％)和环(42.69％)构成;GrIDO蛋白与长春花CrIDO蛋白具有较高的相似性(85.83％),且亲缘关系较近.GrIDO基因启动子(GenBank登录号KT428570)长720 bp,具有TATA-box和CAAT-box,还具有参与脱落酸和茉莉酸甲酯应答的顺式作用元件、光应答元件和MYB结合位点.结论 GrIDO基因表达受多种因素调控.克隆了GrIDO基因ORF及其启动子,为GrIDO基因的功能验证奠定基础.

目的 探索玄参及其拆分组分对正常大鼠体内物质与能量代谢的影响,通过其对物质与能量代谢的表达阐释玄参的寒热属性.方法 将SD雄性大鼠随机分组,正常对照组灌胃给予蒸馏水,其余各组分别灌胃给予玄参总提物水煎液及各拆分组分水煎液,连续灌胃15日后取肝脏、肌肉.检测物质代谢糖氧化相关酶:葡萄糖激酶(GCK)、6-磷酸果糖激酶1(PFK-1)、丙酮酸激酶(PK);丙酮酸氧化成Acetyl-CoA相关酶:丙酮酸脱氢酶(PDH)、乙酰辅酶A(Acetyl-CoA);三羧酸循环阶段相关酶:柠檬酸合成酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(ICD);糖原与脂肪代谢相关酶:糖原合成酶激酶-3(GSK-3)、磷酸化酶(PYGL),脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL).同时,对琥珀酸-细胞色素C还原酶(CCR)、细胞色素C氧化酶(COX)、ATP合酶(ATPase)、腺苷激酶(ADK)的能量代谢相关酶进行检测.结果 与正常对照组相比,玄参总提物组CCR值显著性降低(P＜0.05);玄参大极性环烯醚萜苷组PK、CS、CCR、COX、ADK值显著性降低(P＜0.05);玄参小极性环烯醚萜苷组GCK、ADK值显著性降低(P＜0.05).玄参总提取物组PDH、PYGL值的显著性升高(P＜0.05或P＜0.01);苯丙素苷组PDH、AC-COA、ATGL值显著性升高(P＜0.05).小极性环烯醚萜苷组中PYGL的水平显著性升高(P＜0.05).结论 玄参对正常大鼠物质与能量代谢有一定的抑制作用,与其微寒属性相契合.

目的 观察宝乐果(Borojo)提取物8,9-糖基化环烯醚萜苷(GIG)对体外培养的人骨关节炎软骨细胞促进增殖和抑制细胞凋亡的作用.方法 体外培养人骨关节炎软骨细胞,进行软骨细胞鉴定.用不同浓度(25、50、100、200、400 μg/ml)的8,9-糖基化环烯醚萜苷培养人骨关节炎软骨细胞,用硫酸酚嗪甲酯(MTS)法、5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、平板克隆形成实验检测细胞的增殖、流式细胞术观察软骨细胞凋亡,用丙二醛(MDA)法、超氧化物歧化酶(SOD)检测、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测观察软骨细胞氧化酶的活性,用Western bolt法检测凋亡相关蛋白表达.结果 与对照组相比,随GIG浓度增加,细胞活力升高,差异有统计学意义(P＜0.01);细胞核分裂增加,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞克隆数量增多,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期的S期延长,细胞增殖活跃细胞凋亡率减少;MDA含量下降,差异有统计学意义(P＜0.05).SOD含量升高,差异有统计学意义(P＜0.05);GSH-Px含量升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GIG可能对软骨细胞具有增殖的作用,而且在观察浓度内,细胞毒性小,并可抑制细胞凋亡,提示其有潜在能力可能成为治疗骨关节炎的一种策略.

目的:研究栀子蓝色素的化学结构及其对单胺氧化酶B(MAO-B)的抑制活性,为栀子环烯醚萜类资源性化学成分的合理利用及价值提升寻求潜在可行途径.方法:采用纤维素酶催化水解栀子环烯醚萜苷类化合物得到其苷元,经与氨基酸反应,D101型大孔树脂柱色谱及制备液相色谱分离纯化,获得栀子蓝色素单体,综合运用核磁共振波谱和质谱技术鉴定其结构;以苯甲胺为MAO-B反应底物,与栀子蓝色素单体体外孵育,采用高效液相色谱法检测苯甲胺的代谢产物苯甲醛生成量,以甲醇(A)-50 mmol·L-1磷酸钾缓冲液(B,pH 3.2)(2∶3)为流动相,检测波长245 nmn,以评价栀子蓝色素化合物对MAO-B的抑制效果.结果:合成并鉴定了8种栀子蓝色素(栀子蓝色素A～H).在MAO-B抑制试验中,与栀子苷比较,栀子蓝色素D,E的抑制活性明显增强(P＜0.05);与6β-羟基京尼平苷比较,栀子蓝色素G,H的抑制活性明显增强(P＜0.05,P＜0.01),这4种栀子蓝色素均表现出比原型化合物更好的MAO-B抑制活性.结论:栀子蓝色素为一分子氨基酸与一分子环烯醚萜形成的简单化合物,部分栀子蓝色素具有比原型化合物更好的MAO-B抑制活性,不同底物生产出的栀子蓝色素存在活性差异,可基于试验优选制备高价值栀子蓝色素,扩展栀子蓝色素的应用范围,丰富栀子环烯醚萜类成分的综合利用途径.