目的 研究尼古丁诱导口腔癌前病变细胞中E26转录因子1(E26 transformation specific 1,Ets1)与过氧化物还原酶1(peroxiredoxin 1,Prx1)的相互作用,探讨尼古丁在口腔癌前病变中作用的分子机制.方法 培养口腔癌前病变细胞株(dysplastic oral keratinocyte,DOK),实验分为尼古丁组、对照组、敲低组和敲低对照组,尼古丁组、敲低组和敲低对照组DOK细胞用1μmol/L尼古丁处理7d,对照组不作任何处理.分别采用蛋白质印迹法、免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)和染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)法检测尼古丁组和对照组DOK细胞中Prx1和Ets1的蛋白表达量、Prx1和Ets1蛋白结合量以及Ets1与过氧化物还原酶1基因(PRDX1)启动子区的结合情况.分别利用siRNA干扰和慢病毒感染技术敲低Ets1和Prx1,蛋白质印迹法检测敲低组和敲低对照组DOK细胞中Prx1和Ets1的蛋白表达变化.结果 尼古丁诱导Prx1和Ets1蛋白表达显著增加,尼古丁组Prx1和Ets1蛋白相对表达量分别为0.71±0.02和0.12±0.01,均显著高于对照组中二者的表达(Prx1和Ets1蛋白分别为0.53±0.06和0.01±0.01,P=0.009,P=0.000).Co-IP结果显示,Prx1能与Ets1形成蛋白复合体,尼古丁组Prx1和Ets1蛋白结合量高于对照组.ChIP检测发现,尼古丁可显著上调Ets1与PRDX1基因启动子区的结合,尼古丁组富集倍数(80.9±19.7)显著高于对照组(13.8±1.2)(P=0.004).在DOK细胞中,成功敲低了Ets1和Prx1蛋白的表达,敲低组Ets1和Prx1蛋白相对表达量分别为0.60±0.06和0.48±0.03,敲低对照组分别为0.83±0.08和0.80±0.06 (P=0.016,P=0.002).敲低核转录因子Ets1可显著抑制Prx1蛋白表达(P=0.002);反之,敲低Prx1亦可显著降低Ets1蛋白的表达(P=0.000).结论 在口腔癌前病变细胞中,Ets1可直接调控Prx1的表达,与Prx1蛋白存在相互作用;尼古丁可能通过放大Ets1与Prx1之间的正反馈调控信号,促进口腔癌前病变的发生和发展.

过氧化物还原酶4(PRDX4)是过氧化物还原酶家族成员,是一种细胞内源性抗氧化剂,可锚定在内质网调节蛋白质氧化折叠,也可分泌到细胞外基质发生抗氧化作用.在女(雌)性生殖系统,氧化应激影响卵巢的功能状态,定位在颗粒细胞及卵母细胞的体细胞型PRDX4(PRDX4s)通过抗氧化应激机制促进卵泡发育成熟、抑制卵母细胞老化,并参与多囊卵巢综合征(PCOS)和卵巢功能减退的病理过程.在睾丸组织内同时表达两种PRDX4亚型,PRDX4s和睾丸特异型PRDX4(PRDX4t).PRDX4通过抑制内质网应激、清除胞质和细胞外基质活性氧簇(ROS)保护睾丸组织结构与细胞功能,参与调节精子发生和精子形成,抑制生精细胞凋亡.综述PRDX4的结构与功能,及其在调节配子发生中的作用.

脑出血后产生的免疫风暴可导致神经元及其支持细胞死亡,红细胞裂解释放的血红蛋白、血红素和铁离子等细胞毒性物质也具有促进神经细胞死亡的作用.神经细胞死亡后释放的损伤相关分子模式(DAMP)激活固有免疫反应,导致炎症反应-细胞死亡-DAMP释放-炎症反应的恶性循环,是脑出血后继发性脑损伤的重要机制.本文旨在对目前开展的一系列探讨DAMP在脑出血继发性脑损伤中作用的研究进展进行概述,以为进一步的基础研究与临床转化研究提供参考.

背景与目的:幽门螺旋杆菌(HP)在人类胃部的定植是引起胃癌发生较明确的危险因素,且研究发现,HP感染后胃癌细胞的氧化应激水平有明显改变,但机制尚未明确.因此,本研究探讨HP引起胃癌细胞氧化应激的潜在机制和作用.方法:用HP感染胃癌细胞SNU-1后,分别用DCF-DA荧光法和CCK-8法检测的活性氧(ROS)水平和增殖能力的变化;用高通量测序和siRNA筛选鉴定HP感染后引起SNU-1细胞氧化应激增强的关键基因,随后通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统鉴定引起胃癌细胞SNU-1氧化应激的关键上游miRNA,同时结合功能获得与功能缺失实验验证.结果:SNU-1细胞感染HP后,ROS水平升高,增殖能力增强,但同时使用氧化应激抑制剂乙酰半胱氨酸处理,SNU-1细胞的以上变化被取消(均P＞0.05).siRNA筛选结果发现,敲低过氧化氢酶2(PRDX2)时HP感染的SNU-1细胞ROS水平升高,增殖能力增强,而过表达PRDX2后则相反(均P＜0.05),同时Western blot验证显示,HP感染后SNU-1细胞中PRDX2的表达下调.HP感染后,SNU-1细胞中PRDX2的启动子活性没有变化(P＞0.05),但PRDX2的mRNA水平下降(P＜0.05).分析结果显示,HP感染的SNU-1细胞中miR-650的表达水平上升(P＜0.05),且miR-650靶向PRDX2 mRNA的3'端非编码区.验证结果显示,SNU-1细胞过表达miR-650后,PRDX2的表达下调、ROS水平升高、增殖能力增强,敲低miR-650后则呈反向变化(均P＜0.05);HP感染的SNU-1细胞同时敲低miR-650或同时过表达PRDX2,细胞的增殖能力无明显变化(均P＞0.05).结论:HP感染增加胃癌细胞氧化应激水平的机制和作用可能是其上调miR-650的表达,后者靶向PRDX2 mRNA的3'端非编码区抑制PRDX2 mRNA与蛋白表达,导致ROS水平升高,从而促进胃癌细胞的增殖.