目的:评价磷酸甘油酸变位酶5 (PGAM5)在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与线粒体质量的关系。方法:SPF级健康雄性SD大鼠，6~8周龄，体重200~220 g，采用腹腔注射1%链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液60 mg/kg的方法制备大鼠1型糖尿病模型。糖尿病造模成功后继续饲养8周，取1型糖尿病大鼠72只，采用随机数字表法分为4组( n＝18)：糖尿病假手术组(DS组)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DIR组)、糖尿病心肌缺血再灌注+AAV9-PGAM5 shRNA组(DIR+PGAM5 shRNA组)和糖尿病心肌缺血再灌注+AAV9-GFP组(DIR+GFP组)。糖尿病建模后8周，采用结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注2 h的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。DIR+PGAM5 shRNA组和DIR+GFP组缺血前3周尾静脉缓慢注射AAV9-PGAM5 shRNA和AAV9-GFP 2×10 12 μg/kg。AAV9-PGAM5 shRNA组再灌注2 h时记录左心室收缩压(LVSP)和左心室收缩压上升和下降最大速率(±dp/dt max)，随后采集右颈动脉血样，采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB和LDH水平，随后处死大鼠取心脏，双重染色法确定心肌梗死面积，HE染色法观察心肌组织病理学结果，Western blot法检测PGAM5、自噬相关蛋白LC3B、p62、动力相关蛋白1 (Drp1)及线粒体自噬受体蛋白FUNDC1的表达。 结果:与DS组比较，DIR组和DIR+GFP组LVSP和±dp/dt max降低，血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高，心肌梗死面积增加，PGAM5、LC3B、Drp1和FUNDC1表达上调，p62表达下调( P<0.05)；与DIR组比较，DIR+PGAM5 shRNA组LVSP和±dp/dt max升高，血清cTnI、CK-MB和LDH水平降低，心肌梗死面积减小，PGAM5、LC3B、Drp1和FUNDC1表达下调，p62表达上调( P<0.05)，DIR+GFP组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:PGAM5参与了糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程，与降低线粒体质量有关。

目的:从中药组分中筛选2,3-二磷酸甘油酸(BPG)变位酶(BPGM)的激活剂,以提高红细胞的缺氧耐受性.方法:以红细胞胞浆蛋白BPGM为受体,常用中药成分数据库为配体,经过里宾斯基五规则类药性筛选后,采取刚性对接(LibDock)和半柔性对接(CDOCKER)进行虚拟筛选;提取红细胞胞浆蛋白,验证筛选出来的化合物对红细胞胞浆中BPGM亲和力的影响;最后,体外孵育红细胞,建立红细胞缺氧模型,并验证化合物对红细胞缺氧模型中BPGM活性的影响.结果:通过刚性对接和半柔性对接优选出与BPGM结合能前十的化合物.用这十种化合物孵育胞浆蛋白,与空白对照组比较,迷迭香酸甲酯各剂量组、二氢姜黄素大剂量组、八氢姜黄素中剂量组和阿魏酸松柏酯大剂量组可以进一步激活BPGM,从而显著增加常氧红细胞中的2,3-BPG含量(均P<0.05);四氢姜黄素小剂量组、橙黄胡椒酰胺大剂量和小剂量组、六氢姜黄素各剂量组和N-p-香豆酰-羟色胺中剂量组常氧红细胞2,3-BPG含量有增加的趋势(均P>0.05).缺氧红细胞在加入中剂量迷迭香酸甲酯、中剂量八氢姜黄素、大剂量六氢姜黄素和中剂量N-p-香豆酰-羟色胺后,2,3-BPG含量显著增加(均P<0.05).结论:迷迭香酸甲酯、八氢姜黄素、六氢姜黄素和N-p-香豆酰-羟色胺可以激活BPGM从而提高缺氧红细胞中2,3-BPG含量.

目的 探讨健脾益气化瘀祛痰法防治血脂异常的可能有效机制.方法 将24只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化瘀祛痰方组(13.846 mg·kg-1·d-1),每组8只.模型组、化瘀祛痰方组采用高脂饲料喂养建立高脂血症模型,造模8周后灌胃给药,化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方进行灌胃,空白组及模型组给予相应体积的生理盐水灌胃.4周后通过全自动生物化学分析仪检测甘油三酯(triglyceride,TG),总胆固醇(total cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;HE染色观察肝脏组织病理变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝脏组织中活性氧(ROS)、醌氧化还原酶[NAD(P)H quinone dehydrogenase-1,NQO-1]和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的含量;Western blotting 法与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝脏组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1),核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf2),去磷酸化线粒体凋亡诱导因子 1(apoptosis indu-cing factor mitochondria associated 1,AIFM1),磷酸甘油酸变位酶 5(phosphoglycerate mutase5,PGAM5)蛋白及 mRNA 的表达.结果 与空白组相比,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P＜0.05或P＜0.01);肝脏脂肪变性脂肪空泡布满视野,肝细胞体积变大;肝脏组织中ROS含量显著升高,NQO-1和HO-1含量显著下降(P＜0.01);肝脏组织中Keap1、AIFM1及PGAM5蛋白和mRNA的表达显著升高、Nrf2蛋白和mRNA的表达显著降低(P＜0.01).化瘀祛痰方可使TC、TG、LDL-C含量显著降低,HDL-C含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01);脂肪变性程度明显缓解,肝细胞脂肪空泡明显减少;肝脏组织中ROS含量显著降低,NQO-1和HO-1含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01);肝脏组织中Keap1、AIFM1及PGAM5蛋白和mRNA的表达显著降低、Nrf2蛋白和mRNA的表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 健脾益气化瘀祛痰法可能通过降低Keap1/PGAM5/AIFM1介导的氧死亡相关通路的表达而减轻脂质沉积及肝脏损伤,从而防治血脂异常.