目的 探索程氏蠲痹汤(JBT)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠治疗的可能机制.方法 将雌性SD大鼠分为正常组、CIA模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、不同剂量JBT组、LY294002(PI3K阻断剂)组.评估JBT对实验大鼠治疗前后足趾肿胀度、关节炎指数测定的影响,HE染色检测滑膜组织病变情况,ELISA检测大鼠滑膜组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.实时定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin-1、P62 的 mRNA 表达水平,Western blot 法检测 AKT、磷酸化的 AKT(p-AKT)、mTOR、磷酸化的 mTOR(p-mTOR)、PI3K、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、P62、beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白表达.结果 与正常组相比,给药前1 h,其余各组大鼠足趾明显肿胀.与给药前1 h相比,高剂量JBT组、MTX组、LY294002组给药30 d后,采血前2 h足趾肿胀明显缓解.JBT能显著减轻大鼠足趾肿胀度、关节炎指数评分、滑膜组织的破坏.高剂量JBT组大鼠滑膜样本IL-1β、TNF-α 水平以及 PI3K、AKT、mTOR、P62 的 mRNA 表达水平降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62 蛋白水平明显降低,beclin-1 mRNA和蛋白表达、LC3B蛋白水平明显升高.结论 JBT可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活减轻关节炎症,高剂量JBT的治疗效果与MTX、LY294002的治疗效果相当.

目的 观察程氏蠲痹汤(JBT)对TNF-α诱导的滑膜成纤维细胞(FLS)焦亡的抑制作用及其分子机制.方法 以FLS为研究对象,按CCK8实验结果将其分为A:FLS组;B:TNF-α+FLS组;C:TNF-α+FLS+JBT组(最佳程氏蠲痹汤剂量).电镜观察细胞形态,使用乳酸脱氢酶(LDH)释放测定各组质膜孔隙形成的情况,采用RT-qPCR、Western Blot(WB)实验观察各组细胞中细胞标志基因、蛋白的表达,CO-IP检测NLRP3和Caspase-1相互作用.结果 CCK 8实验结果发现JBT冻干粉浓度在0.5 mg/mL,培养48 h效果最佳.透射电镜显示总体病变程度B组＜C组＜A组.与B组相比,C组的LDH漏出率显著降低(P＜0.01),C组和A组相比,LDH漏出率差异无统计学意义(P＞0.05).RT-qPCRAWB结果显示,A组和C组、B组相比,NLRP3、Caspase-l、IL-18、IL-lβmRNA及蛋白表达上调(P＜0.01),与B组相比,C组的NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1βmRNA及蛋白的表达下调(P＜0.01).根据灰度值的读取结果IP组模型与药物的差异程度与Input组内模型与药物的差异程度存在差异性,表明JBT可在一定程度上影响NLRP3和Caspase-1的结合.结论 程氏蠲痹汤通过下调NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路而抑制TNF-α诱导的滑膜成纤维细胞焦亡.

目的 观察新安医家经典名方程氏蠲痹汤的抗炎镇痛作用.方法 利用热板法检测小鼠痛阈,采用二甲苯、角叉菜胶和弗氏完全佐剂分别复制小鼠耳肿胀模型、大鼠急性炎症和慢性炎症模型;观察程氏蠲痹汤对小鼠痛阈、耳肿胀率的影响及其对大鼠足肿胀率、屈关节疼痛的影响.结果 20.40、10.20 g/kg程氏蠲痹汤可显著提高小鼠的痛阈,降低二甲苯引起的耳肿胀度(P<0.05);且10.20、5.10 g/kg程氏蠲痹汤可显著缓解大鼠急性、慢性炎性足肿胀,减轻其屈关节疼痛(P<0.05).结论 程氏蠲痹汤对动物急性、慢性炎症具有较好的抗炎镇痛作用.

目的 探讨程氏蠲痹汤加减方(CJBD)对佐剂性关节炎(AA)大鼠T淋巴细胞中的环腺苷酸(cAMP)水平和CD4+/CD8+T细胞比值的影响.方法 将成年雄性SD大鼠分为正常对照组、AA组、CJBD组和雷公藤多苷片(TGT)组.用吹风冷水和Freund完全佐剂制备大鼠风寒湿痹AA模型,对照组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予对应药品,持续7d.各组大鼠经眼眶取血,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠分选技术分选T淋巴细胞,应用cAMP检测试剂盒检测各组T淋巴细胞的cAMP水平,用流式细胞术检测各组大鼠外周血T细胞中的CD4+和CD8+T细胞数,计算CD4+/CD8+T细胞比值.结果 与正常对照组比较,CJBD组大鼠T淋巴细胞的cAMP表达水平显著降低,TGT组的cAMP含量与正常对照组无显著性差异;CJBD组的CD4 +/CD8+T细胞比值显著降低.结论 CJBD可降低AA大鼠T淋巴细胞cAMP的水平和CD4+/CD8+T细胞比值.

目的:利用佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型,研究中药方剂程氏蠲痹汤(CSJBT)对AA大鼠免疫功能的影响,并探讨其可能机制.方法:将雄性SD大鼠分设6个组:正常组、AA模型组、阳性药雷公藤多苷组、程氏蠲痹汤2.55、5.10、10.20 g/kg剂量组.除正常组外,其余各组大鼠均于左后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(CFA)造模,致炎后第15 d开始灌胃给药,每天1次,连续14 d.实验期间定时检测AA大鼠的原发侧、继发侧足肿胀度以及屈关节疼痛评分,给药结束后,采用MTT法检测程氏蠲痹汤对AA大鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响;流式细胞术观察其对大鼠脾脏T淋巴细胞亚群比例、NK细胞及NKT细胞数量的影响.结果:与模型对照组相比,程氏蠲痹汤2.55、5.10、10.20 g/kg剂量组能明显降低AA大鼠的足肿胀度和屈关节疼痛评分,并降低脾脏CD4+T细胞的比例;程氏蠲痹汤5.10、10.20 g/kg剂量组可显著抑制AA大鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖,降低脾脏Th17细胞的比例,程氏蠲痹汤5.10 g/kg剂量组可降低脾脏NK细胞的比例,升高Treg细胞的比例.结论:程氏蠲痹汤可改善AA大鼠体内异常的免疫功能,其机制可能与其调节CD4+/CD8+、Th17/Treg趋于平衡有关.

目的 探求程氏蠲痹汤治疗类风湿关节炎的作用机制及发挥良效的剂量和时间.方法 以程氏蠲痹汤高、低剂量治疗类风湿关节炎SD大鼠,并与雷公藤多苷片组、模型组、正常组比较,观察治疗第7、14、21天各组血清中白细胞介素(IL)-17和IL-35的含量差异,IL-17、IL-35两者变化的相关性及在3个时间点各组关节、肝肾等的病理改变.结果 治疗第14天,程氏蠲痹汤高剂量组IL-17、IL-35水平与正常组无明显差异(P>0.05),雷公藤多苷片组IL-17、IL-35水平与正常组差异明显(P<0.05);治疗第21天,程氏蠲痹汤高剂量组、雷公藤多苷片组与正常组IL-17、IL-35水平无明显差异(P>0.05);在3个时间点,程氏蠲痹汤低剂量组与模型组无明显差异(P>0.05),模型组与正常组差异显著(P<0.01),各组关节病理改变与血清IL-17、IL-35含量变化一致,程氏蠲痹汤高剂量组、雷公藤多苷片组肝肾病理改变与正常组一致;程氏蠲痹汤高剂量组IL-17、IL-35血清含量第7～14天呈负相关(P<0.05).结论 程氏蠲痹汤高剂量有效提升血清IL-35含量,抑制IL-17释放,从而发挥抑炎疗效,比常用药雷公藤多苷片更早达良效并维持.

目的:观察程氏蠲痹汤加减方(CJBD)对风寒湿型佐剂关节炎(AA)大鼠的体质量、多发性关节炎指数(AI)、双侧足趾容积及血清中白介素-6(IL-6)与白介素-10(IL-10)的影响.方法:除正常组的大鼠,其余均复制成风寒湿型AA大鼠模型,分为模型组,甲氨蝶呤(MTX)组,CJBD高、中、低剂量组.评估CJBD对实验大鼠治疗前后的体质量、多发性关节炎指数、双侧足趾容积的影响,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清中IL-6、IL-10的水平.结果:治疗后发现,模型组的体质量均低于MTX组,CJBD高、中、低剂量组(P＜0.05);CJBD、MTX治疗的大鼠AI评分明显下降(P＜0.05);和模型组相比,MTX组和CJBD高、中、低剂量组的双侧足趾容积明显减小(P＜0.05);与模型组比,MTX组,CJBD高、中、低剂量组的IL-6表达水平明显降低,IL-10明显升高(P＜0.05).结论:不同剂量的CJBD均使风寒湿型AA大鼠的体质量减轻得到缓解,AI评分减小,达到缓解双侧足趾肿胀的作用;抑制血清中IL-6的分泌,上调IL-10的水平,且对剂量有依赖性.

目的 研究程氏蠲痹汤(JBT)通过PI3K/Akt/mTOR信号轴调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)自噬的影响及相关机制.方法 实验分为4组:FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组、FLS+RAPA+JBT组.CCK8检测程氏蠲痹汤抑制RA-FLS的最佳浓度和时间,透射电镜观察细胞自噬小体的变化,自噬双标腺病毒实验观察细胞内自噬体、自噬溶酶体数量,RT-qPCR和Western blot检测相关指标表达水平.结果 CCK8实验筛选结果表明JBT冻干粉浓度在0.5 mg/mL,培养12 h效果最佳.电镜结果与自噬双标腺病毒实验结果趋势相同,FLS组中自噬体少量存在,JBT加入能显著增加自噬体,自噬溶酶体较少.RT-qPCR结果显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt和mTOR的mRNA水平降低更明显(P<0.01).WB分析显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt、mTOR蛋白的水平无明显差异(P>0.05),p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62受到了明显抑制(P<0.05).FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,Beclin-1、LC3B蛋白表达量明显上升(P<0.05).结论 程氏蠲痹汤可抑制RA-FLS的存活率,并可提高细胞自噬水平,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.