目的 探讨磷酸二酷酶8(phosphodiesterase 8,PDE8)抑制剂PF-04957325对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠学习记忆、焦虑、抑郁的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 选取21只2月龄雄性C57BL/6J小鼠进行实验,随机分为对照组、AD模型组、PDE8抑制剂组(0.1 mg·kg-1).模型组和PDE8抑制剂组小鼠双侧海马定位注射OA(每侧50 ng)诱导AD模型,注射OA2 d后,PDE8抑制剂组给予0.1 mg·kg-1抑制剂,AD模型组和对照组给予等剂量溶剂,共给药21 d.给予抑制剂d 13,对小鼠学习记忆能力及焦虑抑郁行为进行相关行为学检测,HE染色观察小鼠海马DG、CA1、CA3区神经细胞形态,Western blot检测小鼠海马内不同位点磷酸化Tau蛋白水平以及PDE8/cAMP/CREB通路相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,AD模型组Y迷宫轮替比、新物体识别指数、被动回避逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01),水迷宫穿越平台次数及在目标象限停留的时间减少(P＜0.05),表现出学习记忆能力的下降,而给予PF-04957325可明显改善AD小鼠学习记忆能力;AD模型组进入旷场中央区次数及在中央区停留时间明显减少(P＜0.05)、悬尾不动时间明显增加(P＜0.01),提示小鼠有焦虑抑郁情况,给予PF-04957325 后小鼠焦虑行为没有得到改善,对抑郁行为有一定改善;AD模型组小鼠海马DG、CA1、CA3区表现出核仁固缩、神经元排列不整齐,给予PF-04957325可缓解小鼠海马神经细胞的损伤.与对照组相比,AD模型组小鼠海马中Tau蛋白Ser199、Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显升高(P＜0.01)、PDE8A及PDE8B蛋白表达量明显增加(P＜0.01)、p-PKA/PKA和BDNF蛋白表达量降低(P＜0.05),给予PF-04957325后Tau蛋白Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显降低(P＜0.01)、PDE8A和PDE8B蛋白表达量明显降低(P＜0.01)、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 和 BDNF蛋白表达量明显升高(P＜0.01).结论 PDE8抑制剂PF-04957325 能够提高AD小鼠的学习记忆能力、降低认知功能障碍,恢复Tau蛋白功能,减轻AD小鼠海马内神经元细胞的损害,具有改善AD的作用.作用机制可能与激活PDE8/cAMP/CREB通路、抑制Tau蛋白磷酸化有关.

基于转录组分析探讨熊果酸(ursolic acid,UA)抗癫痫和改善癫痫诱导的GABAergic神经元损伤的可能机制.选取对照组(NC组)、癫痫组(SE组)及癫痫UA给药组(UA组)大鼠的海马组织进行全长转录组测序;测序数据利用GO(gene ontology,GO)、KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)及PPI(protein-protein interaction networks,PPI)对差异基因(differential genes,DEGs)进行分析;利用RT-qPCR验证海马组织中关键差异基因的表达量;最后在原代神经元上构建体外癫痫模型,采用RT-qPCR对差异基因的表达量进行验证,并利用免疫荧光、Western blot进一步检测神经元上GABAA受体γ2亚基(GABRG2)的表达量.两两样本表达量相关性热图及DEGs聚类分析结果显示:SE组距离NC组最远,UA治疗后,总体向正常组偏移.SE组与UA组对比,共筛选出 220个差异基因,其中 143个基因上调,77个基因下调.GO富集分析显示:在一级分类中涉及生物过程、细胞成分和分子功能 3个过程.KEGG通路富集分析表明,DEGs涉及cAMP信号通路、钙信号通路等 36条生物学通路.PPI分析表明DEGs与GABA及炎症关系密切.RT-qPCR结果表明UA处理增加了海马组织中GABA受体相关基因(Gng4)、GABA合成相关基因(Camk2a、Vgf和Npy)、炎症相关基因(Timp1和Spp1)的表达量,降低了GABA合成相关基因(Nptx2)、cAMP相关通路基因(Gnas)的表达量;并进一步证实UA处理增加了神经元上Gng4、Camk2a的表达量,降低了Gnas的表达量.免疫荧光与Western blot结果显示,与SE组相比,UA给药后原代神经元上GABRG2的表达量增加.本研究丰富了UA抗癫痫的转录组数据,也为深入研究UA抗癫痫和神经保护奠定理论基础.

目的:确定环腺苷酸(cAMP)受体蛋白(CRP)对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)肠杆菌素铁载体相关基因 entC的调控机制。 方法:以CRKP-27野生株构建 crp基因缺失株Δ crp和回补株c-Δ crp。利用铬天青S(CAS)定量试验观察CRP对CRKP铁载体分泌量的影响。RT-qPCR试验和 lacZ报告基因融合试验研究CRP对 entC表达及对其启动子的调控。凝胶阻滞试验(EMSA)确定CRP是否与 entC启动子区结合，DNaseⅠ足迹试验进一步确定结合序列。 结果:成功构建Δ crp和c-Δ crp菌株；在正常条件和缺铁条件下，Δ crp菌株的铁载体分泌量均高于野生株和c-Δ crp菌株，但仅在正常环境中有统计学意义( P<0.05)；正常条件和缺铁条件下，Δ crp菌株中 entC基因的mRNA相对表达量较野生株和c-Δ crp菌株明显降低( P均<0.05)；正常条件和缺铁条件下，Δ crp菌株中 entC基因的启动子活性低于野生株和c-Δ crp菌株( P均<0.05)；EMSA结合试验显示随着CRP蛋白量的增加， entC探针朝正极移动的距离都相应缩短，出现阻滞现象；DNaseⅠ足迹试验进一步检测到 entC启动子区与CRP特异性结合位点为：5′-AAGGTGATAAATGCGTCTCATTTTCAA-3′。 结论:CRKP中CRP能特异地结合到 entC启动子区并直接促进其转录表达。

目的:评价七氟烷致老龄小鼠认知功能减退时组蛋白乙酰化与含2B亚基的NMDA受体(NR2B)-环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的关系。方法:SPF级雄性C57BL/6J小鼠48只，22月龄，体重32～40 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(C组)、七氟烷组(S组)、二甲基亚砜＋七氟烷组(DS组)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺它(SAHA)＋七氟烷组(SS组)。C组吸入100%氧气2 h，S组、DS组、SS组吸入3.0%七氟烷2 h，七氟烷吸入结束后24 h行Morris水迷宫实验(共6 d)。于七氟烷麻醉前2 h以及每天水迷宫实验前2 h，SS组腹腔注射SAHA 50 mg/kg，DS组腹腔注射等容量二甲基亚砜。水迷宫实验后立即处死小鼠取海马组织，采用Western blot法检测胞核乙酰化-H3以及胞浆NR2B、磷酸化CREB(p-CREB)、BDNF的表达水平。采用RT-PCR法检测NR2B和BDNF的mRNA表达水平。 结果:与C组比较，S组、DS组和SS组逃避潜伏期延长，目标象限停留时间百分比降低，乙酰化-H3、NR2B、p-CREB、BDNF、NR2B mRNA和BDNF mRNA表达下调( P<0.05)；与S组或DS组比较，SS组逃避潜伏期缩短，目标象限停留时间百分比升高，乙酰化-H3、NR2B、p-CREB、BDNF、NR2B mRNA和BDNF mRNA表达上调( P<0.05)；S组与DS组上述指标比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:组蛋白乙酰化可通过调控NR2B-CREB-BDNF信号通路表达，参与七氟烷致老龄小鼠认知功能减退的病理生理机制。

目的:分析环腺苷酸反应元件结合蛋白3样蛋白1(CREB3L1)在骨肉瘤中的表达，探究CREB3L1在骨肉瘤中的作用及临床意义。方法:收集2019年9月至2021年12月于郑州大学第一附属医院骨科住院并接受手术治疗的骨肉瘤患者组织5例，采用转录组测序分析差异表达基因；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CREB3L1在另外12对匹配的骨肉瘤和癌旁组织中的表达；IHC验证CREB3L1表达；采用Kaplan-Meier方法分析公共数据中骨肉瘤队列中CREB3L1和患者预后的关系。组间比较采用 t检验。 结果:对临床采集的5对匹配骨肉瘤和正常骨组织进行转录组测序分析。比较分析共发现1 809个差异表达基因(|FC|>1.5， P<0.01)，其中有1 111个基因在骨肉瘤组织中表达升高，697个基因在骨肉瘤组织中表达下调；基因富集分析结果显示，差异表达的基因主要涉及细胞外基质组织、胶原蛋白分解代谢、细胞黏附等信号通路。参与胶原蛋白生物合成、修饰和降解，细胞外基质胶原纤维形成等多个通路的基因在骨肉瘤中显著富集，其中CREB3L1等在骨肉瘤中表达升高明显。RT-qPCR分析匹配的骨肉瘤及对应正常骨组织中CREB3L1的mRNA表达表明( n＝12)，大部分标本中(9/12)CREB3L1在骨肉瘤中的表达明显高于对应的正常骨组织(4.408±3.230比1.000±0.000， t＝2.256， P<0.05)；IHC表明，CREB3L1在骨肉瘤细胞核与细胞质的表达高于正常骨组织(细胞质：2.750±1.290比1.750±0.683， t＝2.739， P<0.05；细胞核：2.125±0.806比1.250±0.775， t＝3.130， P<0.01)；Kaplan-Meier生存分析表明，CREB3L1的表达与骨肉瘤患者的总体生存率、无转移生存率负相关( P<0.01， P<0.001)；通过比较有和无肺转移患者病例中CREB3L1细胞核IHC评分，CREB3L1在有肺部转移肿瘤细胞核内表达量高于非转移者(2.500±0.527比1.700±0.949， t＝2.331， P<0.05)。 结论:CREB3L1在骨肉瘤中表达升高且与患者较差的生存预后密切相关。

目的:评价预输注青年大鼠血浆对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍的影响及细胞外调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路在其中的作用。方法:SPF级健康雄性Wistar大鼠120只，18月龄，体重550~650 g，采用随机数字表法分为4组( n＝30)：对照组(C组)、七氟烷麻醉组(S组)、青年大鼠血浆组(P组)和ERK抑制剂SL327组(SL组)。P组和SL组尾静脉注射经过处理的3月龄青年大鼠血浆100 μl/次，C组和S组尾静脉注射等容量生理盐水，2次/周，共4周。注射完毕后S组、P组和SL组大鼠吸入3%七氟烷麻醉3 h，麻醉前SL组尾静脉注射ERK抑制剂SL327 50 mg/kg。于麻醉前1 d和麻醉后3、7 d行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能；随后处死大鼠分离海马组织，采用Western blot法测定磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化CREB(p-CREB)、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达水平，透射电镜下观察海马神经元超微结构并记录突触数量。 结果:与C组比较，其余3组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调，突触数量减少( P<0.05)。与S组比较，P和SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达上调，突触数量增加( P<0.05)。与P组比较，SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调，突触数量减少( P<0.05)。 结论:预输注青年大鼠血浆减轻可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍，其机制与激活ERK-CREB信号通路，改善海马突触可塑性有关。

目的:探究cAMP反应元件结合蛋白3样蛋白1(CREB3L1)在胃癌中的表达及临床意义。方法:收集2019年1月—2020年12月于兰州大学第二医院行外科手术切除的97例胃癌患者为研究对象，其中男性75例，女性22例，年龄27~78岁，平均年龄(57.95±9.27)岁，中位年龄57岁。采用免疫组化方法检测CREB3L1在胃癌组织和匹配的癌旁组织的表达水平，利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃癌和癌旁组织中CREB3L1表达水平，应用统计学方法分析CREB3L1在胃癌患者癌组织的表达水平与肿瘤细胞分化程度、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期之间的关系，并利用Logistic回归分析研究影响胃癌发生的危险因素，探究CREB3L1表达水平在胃癌中的临床意义。结果:通过免疫组化结果显示，CREB3L1蛋白主要在细胞核中表达。胃癌组织中阳性率为17.5%(17例)，低于配对的癌旁正常组织的阳性率84.5%(82例)，差异有统计学意义( χ2＝87.15， P<0.001)；通过qRT-PCR方法检测胃癌和癌旁组织细胞中CREB3L1表达情况，结果表明CREB3L1在癌旁组织中表达水平显著高于癌细胞中的表达，差异有统计学意义( P<0.05)；胃癌患者的癌组织中CREB3L1的阳性表达率低，其表达水平与胃癌患者肿瘤的分化程度、肿瘤大小、浸润深度及TNM分期相关( P<0.05)，而与Lauren分型、肿瘤位置等无关( P>0.05)；Logistic回归分析结果显示，胃癌患者的癌组织中CREB3L1的阳性表达水平与胃癌患者肿瘤的分化程度具有相关性( P<0.05)。 结论:CREB3L1在胃癌组织中表达减低，并与患者肿瘤组织的分化程度、肿瘤大小、浸润深度及TNM分期有关，对胃癌患者早期诊断具有重要价值。

目的:观察不同碘营养水平哺乳期大鼠乳腺组织促甲状腺激素受体（TSHR）、蛋白激酶A（PKA）、钠碘转运体（NIS）mRNA和蛋白的表达，探讨促甲状腺激素（TSH）-THSR-环磷酸腺苷（cAMP）-PKA信号通路在哺乳期乳腺摄碘过程中的作用。方法:采用成组设计，按体质量（80~100 g）采用随机数字表法将110只雌性Wistar大鼠分为适碘（NI）组、重度低碘（SID）组、中度低碘（MID）组、中度高碘（MIE）组、重度高碘（SIE）组，每组22只。另选取22只雄性Wistar大鼠，喂养情况与NI组一致。饲养3个月时，收集雌鼠24 h尿样，并将雌鼠与雄鼠合笼（5 ∶ 1），交配后，每只雌鼠单独喂养，在生育10 d时，处死哺乳期大鼠取甲状腺、乳腺组织。采用砷铈催化分光光度法测定尿碘；HE染色观察甲状腺和乳腺组织形态学改变；实时荧光定量PCR（real-time PCR）法检测甲状腺和乳腺组织TSHR、PKA及NIS mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测乳腺组织TSHR、PKA、磷酸化PKA（p-PKA）及NIS蛋白表达水平。结果:与NI组比较（162.59 μg/L），SID、MID组雌鼠尿碘中位数（3.16、6.36 μg/L）均较低，MIE、SIE组雌鼠尿碘中位数（2 356.27、11 507.29 μg/L）均较高（ P均< 0.01）。HE染色可见，不同摄碘水平对甲状腺滤泡产生不同的影响：NI组多为均匀的圆形或椭圆形滤泡；MID组小滤泡增多，上皮细胞呈单层柱状或立方，滤泡腔变小，胶质减少；SID组滤泡变小，上皮细胞呈柱状或高柱状，滤泡腔内胶质减少或缺如；SIE、MIE组甲状腺滤泡出现多形性变化，既有部分滤泡明显增大，又有部分小滤泡增生。不同摄碘水平对乳腺大导管也产生不同的影响：与NI组相比，SID、MID组乳腺大导管周围的结缔组织呈明显的纤维化，而MIE、SIE组纤维化明显减轻。real-time PCR结果显示，不同碘营养水平哺乳期大鼠甲状腺组织TSHR、PKA、NIS mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 10.73、92.37、115.75， P均< 0.01）；乳腺组织TSHR、PKA、NIS mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 40.25、39.63、14.92， P均< 0.05）。Western blot结果显示，不同碘营养水平哺乳期大鼠乳腺组织TSHR、PKA、p-PKA、NIS蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 4.14、6.73、8.48、4.51， P均< 0.05），其中MIE、SIE组TSHR蛋白表达水平均低于NI组（ P均< 0.05）；SID、MID组PKA蛋白表达水平均高于NI组（ P均< 0.05）；SID组p-PKA蛋白表达水平高于NI组，但SIE组低于NI组（ P均< 0.05）；SID组NIS蛋白表达水平高于NI组（ P < 0.05）。 结论:哺乳期大鼠高碘摄入时乳腺组织TSHR mRNA、蛋白表达水平均降低，低碘摄入时PKA、NIS mRNA和蛋白表达水平均升高。哺乳期大鼠乳腺组织可能通过TSH-TSHR-cAMP-PKA信号通路参与调控碘的摄入，从而对自身及子代产生保护作用。

目的:观察缺氧缺糖条件下谷氨酸(AMPA)受体相互作用蛋白(GRIPs)表达的变化及对少突胶质前体细胞(OPCs)凋亡的影响，探讨GRIPs在AMPA受体兴奋性毒性中的作用。方法:OPCs分为对照组、缺氧缺糖60 min组和缺氧缺糖120 min组，通过实时荧光定量PCR及蛋白印迹法(Western blot)检测缺氧缺糖条件下GRIP1、GRIP2 mRNA和蛋白的表达情况；再次将OPCs分为空白对照组、OPCs＋缺氧缺糖组、OPCs＋环磷酸腺苷(cAMP)＋缺氧缺糖组、OPCs＋cAMP＋缺氧缺糖＋GRIP1小干扰RNA(siRNA)组、OPCs＋cAMP＋缺氧缺糖＋GRIP1 siRNA阴性对照组、OPCs＋cAMP＋缺氧缺糖＋GRIP2 siRNA组、OPCs＋cAMP＋缺氧缺糖＋GRIP2 siRNA阴性对照组，TUNEL试剂盒检测各组细胞凋亡情况，Fluo-4荧光探针观察胞内游离钙变化。结果:缺氧缺糖引起OPCs损伤，光学显微镜下显示细胞轮廓不清晰，胞体回缩。缺氧缺糖60 min后GRIP1(1.233±0.060比1.003±0.079， P<0.05)和GRIP2(1.396±0.069比1.001±0.037， P<0.05)表达明显高于对照组，且缺氧缺糖时间越长，GRIP1(1.416±0.064比1.233±0.060， P<0.01)和GRIP2(1.680±0.018比1.396±0.069， P<0.01)表达水平越高。RNAi分别下调GRIP1和GRIP2，细胞内游离钙离子水平降低(0.054±0.003比0.074±0.003， P<0.01；0.060±0.003比0.074±0.003， P<0.01)，细胞凋亡率下降[(20.703±3.882)%比(11.470±1.679)%， P<0.05；(19.070±1.106)%比(14.448±0.849)%， P<0.01]。 结论:GRIP1和GRIP2参与缺氧缺糖引起的OPCs损伤，其可能通过调节Ca 2＋通透性触发AMPA受体介导的兴奋性毒性发挥作用。

Background::Anterior thalamic nuclei (ATN) deep brain stimulation (DBS) is an effective method of controlling epilepsy, especially temporal lobe epilepsy. Mossy fiber sprouting (MFS) plays an indispensable role in the pathogenesis and progression of epilepsy, but the effect of ATN-DBS on MFS in the chronic stage of epilepsy and the potential underlying mechanisms are unknown. This study aimed to investigate the effect of ATN-DBS on MFS, as well as potential signaling pathways by a kainic acid (KA)-induced epileptic model.Methods::Twenty-four rhesus monkeys were randomly assigned to control, epilepsy (EP), EP-sham-DBS, and EP-DBS groups. KA was injected to establish the chronic epileptic model. The left ATN was implanted with a DBS lead and stimulated for 8 weeks. Enzyme-linked immunosorbent assay, Western blotting, and immunofluorescence staining were used to evaluate MFS and levels of potential molecular mediators in the hippocampus. One-way analysis of variance, followed by the Tukey post hoc correction, was used to analyze the statistical significance of differences among multiple groups. Results::ATN-DBS is found to significantly reduce seizure frequency in the chronic stage of epilepsy. The number of ectopic granule cells was reduced in monkeys that received ATN stimulation ( P < 0.0001). Levels of 3′,5′-cyclic adenosine monophosphate (cAMP) and protein kinase A (PKA) in the hippocampus, together with Akt phosphorylation, were noticeably reduced in monkeys that received ATN stimulation ( P = 0.0030 and P = 0.0001, respectively). ATN-DBS also significantly reduced MFS scores in the hippocampal dentate gyrus and CA3 sub-regions (all P < 0.0001). Conclusion::ATN-DBS is shown to down-regulate the cAMP/PKA signaling pathway and Akt phosphorylation and to reduce the number of ectopic granule cells, which may be associated with the reduced MFS in chronic epilepsy. The study provides further insights into the mechanism by which ATN-DBS reduces epileptic seizures.