目的:探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法:选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象，其中男3例、女3例，年龄26~49岁、中位年龄33岁，受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本，先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP)；再加入0.08 mmol/L CaCl 2, 37 ℃孵育激活血小板；然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原，获得sPL。培养RA-FLS，分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组，分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度；细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性；流式细胞术测定各组细胞的凋亡率；体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力；Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力；Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。 结果:(1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL，TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL，IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL，组间比较差异均有统计学意义( F＝12.186、11.934、10.709， P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%，细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%，小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个，迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个，侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个，组间比较差异均有统计学意义( F＝8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组，细胞凋亡率均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组，细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组，Bax蛋白相对表达量均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组，而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用，对RA-FLS凋亡具有促进作用，且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。

目的:探讨环磷酰胺（CTX）联合高压氧（HBO）处理对人类风湿关节炎成纤维样滑膜（RA-FLS）细胞凋亡的影响。方法:将培养好的人RA-FLS细胞按照随机数字表法分为4组：对照组、CTX组、HBO组及联合组（CTX+HBO处理），分别予以不作处理、50 μmol/L的CTX处理、0.2 MPa HBO处理、50 μmol/L的CTX联合0.2 MPa HBO处理。CCK-8法检测人RA-FLS细胞的增殖能力；流式细胞术检测人RA-FLS细胞周期和凋亡情况，Western blotting实验检测人RA-FLS细胞凋亡及细胞周期阻滞相关蛋白的表达。结果:CTX组人RA-FLS细胞存活率明显低于HBO组和对照组（ P<0.05），而联合组人RA-FLS细胞存活被进一步抑制，其存活率明显低于CTX组（ P<0.05）。CTX组人RA-FLS细胞凋亡率明显高于HBO组和对照组（ P<0.05），而联合组人RA-FLS细胞凋亡率明显高于CTX组（ P<0.05）。CTX组G2/M期的人RA-FLS细胞数量明显多于HBO组和对照组（ P<0.05），而联合组G2/M期的人RA-FLS细胞数量明显多于CTX组（ P<0.05）。与对照组和HBO组比较，CTX组人RA-FLS细胞内TLR4蛋白、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（ P<0.05）；与CTX组比较，联合组人RA-FLS细胞内TLR4蛋白、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（ P<0.05）。 结论:CTX+HBO处理对人RA-FLS细胞增殖具有明显的抑制作用，其机制是通过调控TLR4/NF-κB信号通路并将人RA-FLS细胞周期阻滞在G2/M期实现的。

目的:探讨C-Fos与丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）相互作用参与调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖、凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应PCR（RT-qPCR）、蛋白质印迹法检测RA-FLS和正常成纤维样滑膜细胞（FLS）细胞C-Fos mRNA和蛋白表达水平。将RA-FLS细胞分为C-Fos过表达组（转染pcDNA3.1-Myc-C-Fos质粒）、过表达对照组（转染pcDNA3.1-Myc空质粒）、C-Fos沉默组（转染siRNA-C-Fos）、沉默对照组（转染siRNA-NC）和空白对照组（未加任何处理）。细胞计数试剂（CCK-8）检测各组细胞增殖能力，流式细胞实验检测各组细胞凋亡的变化，蛋白质印迹法检测各组细胞C-Fos、MAPK14、p-MAPK14、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验检测C-Fos和MAPK14在细胞中的定位关系。免疫共沉淀方法检测C-Fos-MAPK14的相互作用关系。采用GraphPad Prism 5统计学软件进行数据分析，正态分布的数据以 ± s表示，2组间比较采用独立样本 t检验；多组比较采用应采用方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:RA-FLS细胞中C-Fos mRNA（5.37±0.91）相对表达量明显高于FLS细胞（1.46±0.32）（ t=9.94， P<0.001）。C-Fos在RA-FLS蛋白水平（1.12±0.15）均显著高于FLS（0.81±0.07）（ t=3.18， P=0.017）。与空白对照组和过表达对照组相比，过表达C-Fos可显著促进RA-FLS细胞增殖，抑制细胞凋亡率，上调细胞p-MAPK14、ki-67蛋白水平，下调细胞Bax蛋白水平（均 P<0.05）；与空白对照组和沉默对照组相比，沉默C-Fos可显著抑制RA-FLS细胞的增殖，增加细胞凋亡率，下调细胞p-MAPK14、ki-67蛋白水平，上调细胞Bax蛋白表达水平（均 P<0.05）。间接免疫荧光实验结果表明C-Fos与MAPK14均可在RA-FLS细胞核中表达，免疫共沉淀实验验证C-Fos与MAPK14蛋白具有相互作用。 结论:C-Fos与MAPK14相互作用促进磷酸化MAPK14蛋白表达，从而促进RA-FLS增殖，并抑制凋亡。

目的:探讨IL-1β对RA患者滑膜成纤维细胞（FLS）中乳腺癌耐药蛋白（BCRP/ABCG2）mRNA表达的影响，探索IL-1β对BCRP介导多药耐药性的调控作用。方法:获取RA 3例和OA 3例患者FLS，建立FLS体外培养体系，培养至Ⅴ代；①采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测RA与OA的FLS中BCRP mRNA的表达水平并比较；②评估RA病情活动度与BCRP mRNA的表达水平的相关性；③ RA-FLS分为4组，A组空白对照组，B组、C组、D组分别加入20、50、100 ng/ml的IL-1β，培养24、48、72 h，比较不同组间BCRP mRNA表达水平。定量资料采用 M（ P25， P75）表示，两独立样本比较采用Mann-Whitney U检验，组间比较采用Friedman检验。 结果:① RA-FLS中BCRP mRNA表达水平高于OA组[0.68（0.26，1.16）与0.06（0.05，0.53）； Z=-2.136， P=0.029]。② RA-FLS的BCRP mRNA的表达量与病程、ESR、CRP及DAS28呈正相关趋势，而与发病年龄呈负相关趋势，与性别无相关性。③相同浓度IL-1β刺激不同时间RA-FLS的BCRP mRNA的表达水平比较：IL-1β浓度为0时，48 h和72 h较24 h BCRP mRNA的表达水平均升高（ χ2=6.00， P=0.034）；IL-1β浓度为20 ng/ml（ χ2=8.00， P=0.014）或100 ng/ml （ χ2=6.50， P=0.040）时，72 h组BCRP mRNA的表达水平较24 h组明显升高。④不同浓度IL-1β刺激相同时间RA-FLS的BCRP mRNA的表达水平比较：72 h时，100 ng/ml组较0 ng/ml组BCRP mRNA表达升高（ χ2=12.00， P=0.006）。 结论:RA-FLS存在BCRP介导的耐药性，且可能与病情活动度有关。炎性细胞因子IL-1β参与调控RA-FLS的BCRP mRNA的表达，且存在时间和浓度依赖性。

目的:探讨黄芩素通过调控Sirtuin（Sirt）抑制成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLS）衰老，缓解骨关节炎的机制。方法:提取非骨关节炎患者（3例）及骨关节炎患者（3例）滑膜中的FLS，通过Western blot、β-半乳糖苷酶染色和免疫荧光等方法评估骨关节炎患者FLS的衰老程度，并检测FLS中Sirt家族蛋白和mRNA的变化水平。通过转染Sirt1 siRNA敲低FLS中Sirt1的相对表达水平，分析FLS抗氧化能力及衰老程度。将软骨细胞与FLS共培养，通过Western blot检测软骨细胞功能变化。使用博莱霉素（Bleomycin，BLM）诱导FLS衰老后予以不同浓度黄芩素处理，检测Sirt1、p16、p21蛋白表达水平，并检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）表达水平。敲低FLS中Sirt1的表达水平并予以BLM和黄芩素处理，采用Western blot和ROS检测Sirt1和ROS相对表达量。BLM诱导FLS衰老后加入黄芩素和Compound C，通过Western blot、ROS检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated AMP protein-activated kinase，pAMPK）、核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，NRF2）、p16、p21和ROS相对表达量。结果:骨关节组FLS的p16和p21相对表达量为3.66±0.38和3.55±0.34，高于非骨关节炎组的1.00±0.07、1.00±0.09（ t=11.860， P<0.001； t=12.520， P<0.001）。骨关节炎组FLS中Sirt1和Sirt6的相对表达水平为0.30±0.04和0.16±0.01，小于正常组的1.00±0.03和1.00±0.04（ t=23.840， P<0.001； t=34.130， P<0.001）。黄芩素处理后，BLM组、BLM+Bai组和对照组的ROS相对表达量分别为2.58±0.28、1.65±0.14和1.00±0.24，组间差异有统计学意义（ F=35.700， P<0.001），其中BLM组和BLM+Bai组均大于对照组，BLM+Bai组低于BLM组（ P<0.05）。Compound C+黄芩素处理后，pAMPK及NRF2相对表达为0.28±0.02和0.38±0.09，低于BLM+Bai组的0.56±0.07和0.60±0.08（ P<0.05）。ROS相对表达量由1.75±0.16升高至3.45±0.12（ P<0.001）。BLM+Bai+Compound C组、BLM+Bai组和对照组β-半乳糖苷酶阳性比例分别为47.30%±4.29%、18.18%±3.89%和7.70%±3.53%（ F=109.700， P<0.001），其中BLM+Bai+Compound C组高于BLM+Bai组（ P<0.05）。 结论:骨关节炎患者Sirt1表达下调导致FLS衰老，加速骨关节炎进展。黄芩素可通过激活Sirt1/AMPK/NRF2通路抑制FLS衰老，可能延缓骨关节炎进展，进而改善软骨细胞功能。

回顾性分析1例原发于椎管内硬脊膜的黏液型孤立性纤维性肿瘤（SFT）的临床病理学特点、诊断、鉴别诊断及临床预后等。患者女，39岁。右侧背部疼痛、右小腿麻木伴行走不稳3个月；磁共振成像（MRI）提示胸椎椎管内占位，考虑神经鞘瘤可能，手术完整切除病灶。显微镜下于黏液背景中见肿瘤细胞弥漫性生长，瘤细胞体积中等大小，呈短梭形或星芒状，胞质淡染，细胞核轻微不规则；间质内可见薄壁、扩张的血管。免疫组织化学染色肿瘤细胞表达STAT6和CD34，不表达脑膜瘤标志物SSTR2，不表达神经鞘瘤标志物S-100蛋白、SOX10和脊索瘤标志物Brachyury，Ki-67阳性指数约5%。二代测序检测提示其存在NAB2基因的第6号外显子和STAT6基因的第17号外显子融合。术后随访1年无肿瘤复发和转移。中枢神经系统黏液型SFT罕见，预后较好，诊断过程中需注意与黏液样神经鞘瘤、脊索瘤、脊索样脑（脊）膜瘤、原发或者转移性黏液样单相型滑膜肉瘤以及原发或者转移性低度恶性纤维黏液样肉瘤等疾病相鉴别。

RA是一种以慢性滑膜炎、骨质破坏为主要特征的全身性自身免疫性疾病，发病机制尚不明确。环状RNA（circular RNAs，CircRNAs）是一类内源性共价闭环结构的非编码RNA，广泛存在于真核细胞中，具有不易被RNA酶水解、细胞或组织特异性表达、不同物种间的进化保守和结构稳定等特征，在多种疾病的诊断和治疗中发挥着重要作用。本文综述了CircRNA的起源及其生物学功能、CircRNA在RA发病过程中的作用和机制等方面的研究进展，旨在为识别用于早期治疗的新的分子靶点及RA的精准靶向治疗提供新的思路。

目的:探讨长链非编码RNA核受体亚家族2 F组成员2反义RNA 1(lncRNA NR2F2-AS1)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)增殖、迁移侵袭的影响及分子机制。方法:选取郑州大学第一附属医院35例RA患者滑膜组织及正常滑膜组织，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NR2F2-AS1和微小RNA(miR)-588的表达水平；将RASF分为si-NR2F2-AS1组、si-NC组、miR-588组、miR-NC组、si-NR2F2-AS1+anti-miR-588组、si-NR2F2-AS1+anti-miR-NC组；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性；克隆形成实验检测细胞克隆形成数；划痕实验检测细胞划痕愈合率；Transwell检测细胞侵袭数；蛋白质印迹法检测蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测NR2F2-AS1和miR-588的靶向关系。用SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果:RA患者滑膜组织中NR2F2-AS1表达水平高于正常滑膜组织(3.50±0.23比1.00±0.06， t＝62.223， P<0.05)，而miR-588表达水平低于正常滑膜组织(0.29±0.04比1.00±0.09， t＝42.649， P<0.05)。si-NR2F2-AS1组细胞活性低于si-NC组(0.55±0.04比1.03±0.08， t＝16.100， P<0.05)，细胞克隆形成数低于si-NC组[(47.58±5.03)个比(103.93±10.24)个， t＝14.818， P<0.05]、侵袭细胞数[(55.31±5.28)个比(123.37±10.09)个， t＝17.929， P<0.05]低于si-NC组，划痕愈合率低于si-NC组[(23.21±2.47)%比(64.19±5.55)%， t＝20.238， P<0.05]，E钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平高于si-NC组，N钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平低于si-NC组( P<0.05)。过表达miR-588与其作用相同。NR2F2-AS1靶向调控miR-588；下调miR-588表达逆转抑制NR2F2-AS1表达对RASF增殖、迁移侵袭的作用。 结论:抑制lncRNA NR2F2-AS1表达可通过靶向调控miR-588抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖、迁移侵袭。

目的:探讨RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）中双特异性磷酸酶8（DUSP8）DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）1之间的相互作用，及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法:培养RA-FLS和正常FLS，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术，构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位，免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:DUSP8在RA-FLS mRNA[（2.4±0.6）和（11.2±0.8）， t=21.63， P<0.001]和蛋白表达[（0.24±0.04）和（0.74±0.08）， t=9.45， P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比，在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6），（92.5±1.8），（56.4±4.4）， F=138.60， P<0.001]，增加细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（12.6±1.3）%和（27.5±3.0）%， F=16.98， P<0.001]，上调细胞的DUSP8'[（0.49±0.05），（0.45±0.04）和（0.73±0.07）]、Bax[（0.39±0.06），（0.36±0.05）和（0.89±0.10）]蛋白表达水平，下调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.16）和（0.70±0.08）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.65±0.07）和（0.39±0.03）]蛋白表达水平（均 P<0.001）；与空白对照组和沉默对照组相比，在RA-FLS细胞转染siRNA-DUSP8可显著促进RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6）和（91.1±2.9）和（128.3±4.6）， F=137.50， P<0.001]，降低细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（13.2±1.2）%和（5.4±0.7）%， F=16.98， P<0.001]，下调细胞中的DUSP8[（0.492±0.048）和（0.432±0.051）和（0.102±0.024）]、Bax[（0.391±0.062）和（0.411±0.058）和（0.090±0.011）]蛋白表达水平，上调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.15）和（1.93±0.22）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.68±0.06）和（0.93±0.11）]蛋白表达水平（均 P<0.05）。间接免疫荧光实验结果表明DUSP8与MAPK1均可在RA-FLS细胞质和细胞核中表达，免疫共沉淀实验验证DUSP8与MAPK1蛋白具有相互作用。 结论:DUSP8通过与MAPK1相互作用调节MAPK1磷酸化，抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖，并促进凋亡。

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）对RA患者成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖及炎性因子mRNA表达的影响。方法:采用组织块贴壁法分离培养RA-FLS，4~6代细胞用于后续实验。不同浓度的人Ox-LDL刺激RA-FLS 24 h，MTS实验检测细胞增殖情况，实时（RT）-PCR法检测炎性因子IL-6、TGF-β、IL-8、TNF-α及清道夫受体CD36、结合磷脂酰丝氨酸和氧化脂蛋白的清道夫受体（SR-PSOX）mRNA表达水平。siRNA特异性敲减SR-PSOX，RT-PCR法检测敲减效果，同时验证SR-PSOX基因敲减后各相关基因的表达。统计学分析采用 t检验， F检验。 结果:不同浓度Ox-LDL（10、25、50 μg/ml）可明显促进RA-FLS的增殖，其吸光度（ A）值（490 nm）分别为：（1.04±0.15）、（1.05±0.14）、（1.00±0.10），均高于对照组（0.81±0.04），差异有统计学意义（ F=4.737， P<0.01）。在炎性因子mRNA表达方面，与对照组相比较，50 μg/ml和100 μg/ml Ox-LDL可显著促进IL-6 mRNA的表达（ F=14.709， P<0.01）；不同浓度Ox-LDL均可抑制RA-FLS中TGF-β mRNA的表达（ F=299.074， P<0.01），而对IL-8、TNF-α mRNA的表达无明显影响。进一步的机制探讨发现Ox-LDL可促进RA-FLS高表达SR-PSOX（ F=68.636， P<0.01），并抑制CD36的表达（ F=18.085， P<0.01）。siRNA特异性敲减SR-PSOX，可显著抑制Ox-LDL刺激RA-FLS表达IL-6 mRNA（ t=3.875， P<0.01），而对TGF-β mRNA表达水平无显著影响（ t=-0.193， P>0.05）。 结论:Ox-LDL可显著促进RA-FLS的增殖，同时Ox-LDL可能通过上调SR-PSOX的表达促进了IL-6 mRNA的表达，提示Ox-LDL可能参与了RA的滑膜增生及炎症持续过程。