目的 利用粒细胞-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、酪氨酸激酶受体3配体(Flt3L)以及不同浓度细胞因子组合在体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞,比较不同培养条件对细胞分化与成熟的影响.方法 分离BALB/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF、IL-4、Flt3L以及不同浓度细胞因子组合的培养液,培养7 d后荧光抗体标记行流式细胞术,检测DC表面CD11c、MHCⅡ、CD86分子的表达水平.平行组加入脂多糖(LPS)刺激后行流式细胞术检测.结果 Flt3L/GM-CSF/IL-4组可诱导90％骨髓细胞高表达CD11c,此时各细胞因子浓度分别为20 ng/ml、20 ng/ml、10 ng/ml;100 ng/ml Flt3L诱导骨髓细胞表达CD11c达88％.Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组诱导髓源树突状细胞表达MHCⅡ分别为35.4％和36.1％,其中各组Flt3L与GM-CSF浓度均为20 ng/ml.LPS刺激后Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组表达MHCⅡ分子水平分别为58.1％和59.6％,增幅为22.7％和23.5％.GM-CSF/Flt3L/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组树突状细胞CD86表达为7.1％与5.5％.LPS刺激后20 ng/ml Flt3L组与GM-CSF/IL-4组CD86表达增幅达7.1％与6.2％.结论 Flt3L和GM-CSF对髓源树突状细胞的分化与成熟发挥主导作用,故20 ng/ml Flt3L联合20 ng/ml GM-CSF可成为DC基础研究的优选方案.

目的 建立巨细胞病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CMV CTL) 体外扩增的方法.方法 用1μg/mL全长巨细胞病毒pp65 (CMV pp65) 多肽体外多轮刺激由粒细胞-集落刺激因子 (G-CSF) 动员的外周血干细胞采集物中分离的单个核细胞 (PBMC), 同时加入白细胞介素2 (IL-2) 、 IL-15、 IL-21扩增20 d.在培养第7天, 加入丝裂霉素处理的负载CMV pp65抗原肽的自体PBMC, 第10天补充经γ射线辐照处理并负载CMV pp65抗原肽的PBMC和CD3 (OKT3);对照组为未加入抗原肽进行扩增的PBMC组.采用多色流式细胞术分别对扩增前、扩增后的T淋巴细胞表型及细胞内肿瘤坏死因子α (TNF-α) 和γ干扰素 (IFN-γ) 的分泌水平进行分析, ELISA检测供者血清中CMV IgM/IgG抗体滴度水平.结果 培养后可以收集得到 (165.26±6.14) ×106个细胞, 其中CD3+ T细胞占89.21％, CD8+ T细胞占CD3+ T细胞的 (43.54±28.03) ％, CD4+ T细胞占CD3+ T细胞 (34.23±26.18) ％.获得的CD3+ T细胞以效应记忆性T细胞 (TEM) 为主, 且扩增培养后的CD8+和CD4+ TEM比例较培养前显著增高.另外, 培养后干细胞样记忆性T细胞 (TSCM) 和组织原位记忆T细胞 (TRM) 的比例均较培养前显著增加.在功能实验中, 培养后得到的IFN-γ+的分泌型CMV特异性CD8+ T细胞群比例较扩增前明显增加, TNF-α+ CMV特异性CD8+ T细胞比例呈增长趋势;能够分别分泌IFN-γ和TNF-α的CMV特异性CD4+ T细胞群比例与培养前无明显变化.此外, 供者体内CMV IgG水平与供者年龄呈现正相关, 且在该培养体系下, IFN-γ+和TNF-α+ CMV特异性T细胞扩增比例与供者年龄呈负相关.结论 本研究成功建立了在体外有效的培养和扩增CMV CTL的方法.

目的:X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,ALD)是一种严重的遗传性疾病,导致神经系统迅速恶化和过早死亡,异基因造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)仍然是唯一能阻止该疾病神经症状的治疗方法.然而,许多患者缺乏合适的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)匹配相关供体,必须依赖替代供体作为干细胞来源,故本研究探讨采用单倍体相合异基因造血干细胞移植治疗肾上腺脑白质营养不良患儿.方法:2014年12月至2018年12月,8例无HLA完全相合供体的ALD儿童接受了单倍体异基因造血干细胞移植治疗.预处理方案主要用药为马利兰(9.6 mg/kg)、环磷酰胺(200 mg/kg)和氟达拉滨(90 mg/m2),预防移植物抗宿主病的药物包括抗人胸腺细胞免疫球蛋白、环孢菌素A、霉酚酸酯和短疗程甲氨蝶呤.结果:8例患儿均接受父亲来源的单倍体异基因造血干细胞移植治疗.患儿中位年龄为8岁(范围5 ～12岁),供者中位年龄为36(32 ～40)岁.干细胞来源采用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,GCSF)动员的骨髓联合动员后的外周血采集物,总有核细胞中位数为10.89 (9.40～12.16)×108/kg,CD34+细胞中位数为7.06(0.74 ～7.80)×106/kg.中性粒细胞植入发生在移植后11d(范围8～13d),血小板植入中位时间为移植后10 d(范围8～12d),所有患儿在植入时均获得完全的供体细胞嵌合.4例患儿患有Ⅱ～Ⅳ级急性移植物抗宿主病,1例患儿患有慢性移植物抗宿主病,均无重度慢性移植物抗宿主病(graft-versus-host disease GVHD)发生.所有患儿中发生2例巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)血症,2例EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)血症.总体来看,7例患儿无严重相关移植合并症发生且均生存,1例患儿移植后125 d癫痫后脑疝死亡.结论:初步观察表明,采用这种新方案的单倍体异基因干细胞移植能成功地实现ALD患者的完全供体嵌合;根据我们的经验,单倍体相合异基因造血干细胞移植治疗肾上腺脑白质营养不良是安全可行的.

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清白介素-4(IL-4)、粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血嗜酸粒细胞(EOS)水平变化与气道炎症的关系.方法 选取2018年3月～2019年3月我院收治的患者106例为COPD组(根据疾病病程分为急性加重期和稳定期两个阶段),选择同期健康体检者45例为对照组.根据指南中肺功能分级将106例患者分为4级,Ⅰ级21例,Ⅱ级35例,Ⅲ级31例,Ⅳ级19例.血常规检测EOS水平,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-4水平,双抗体夹心ELISA法检测MCP-1水平,放射免疫分析法测定GM-CSF浓度,入院第2d检测患者用力肺活量(FVC)、1s用力呼吸容积(FEV1),计算FEV1/FVC,分析上述血液指标与肺功能指标的相关性.结果 COPD组患者急性加重期和稳定期血清IL-4、GM-CSF、MCP-1及血EOS水平均高于对照组(P＜0.05),治疗后稳定期上述血液指标均低于急性加重期(P＜0.05);不同程度分级COPD患者血清IL-4、GM-CSF、MCP-1及血EOS水平比较,Ⅰ级＜Ⅱ级＜Ⅲ级＜Ⅳ级(P＜0.05),FVC、FEV1、FEV1/FVC水平比较,Ⅰ级＞Ⅱ级＞Ⅲ级＞Ⅳ级(P＜0.05);COPD患者血清IL-4、GM-CSF、MCP-1及血EOS水平与FVC、FEV1、FEV1/FVC水平均呈显著负相关(P＜0.05).结论 COPD患者急性加重期和稳定期血清IL-4、GM-CSF、MCP-1及血EOS水平均较健康人群高,且与肺功能有显著相关性,可作为气道炎症损伤的指标.

表皮角朊细胞可以合成一系列的细胞因子,包括白介素1α(IL-1a)、-1β、-3、-6、-8和-10以及粒细胞-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和α肿瘤坏死因子(TNF-α),它们不仅介导调节免疫和炎症反应,而且参与组织的非免疫性反应,包括细胞的增殖分化,伤口的愈合及组织的修复。实验表明,免疫抑制剂环孢素A(CsA)可以刺激毛发的生长。同时一些毛发疾病的发生,如斑秃(AA)也和免疫系统的功能密切相关。

肺泡蛋白沉积症是一种罕见的肺部弥散性疾病,其特征是肺泡腔及终末呼吸性细支气管内肺泡表面活性物质异常沉积,临床上多表现为进行性加重的劳力性呼吸困难、咳嗽和低氧血症,缺乏特异性,容易出现漏诊、误诊和误治.全肺灌洗术是其经典一线疗法,目的是清除蓄积的肺泡表面活性物质,但部分患者仅行全肺灌洗术,治疗效果不佳.本文报道1例经全肺灌洗术联合重组人粒细胞-巨细胞集落刺激因子雾化吸入治疗的自身免疫性肺泡蛋白沉积症患者,并复习相关文献总结其临床表现、影像学改变、病理特征及治疗、预后,以提高临床医师对该病的诊疗水平.