目的:掌握巫山淫羊藿基原植物资源分布及形态特征,为巫山淫羊藿物种分类鉴定、资源保护和持续利用提供依据.方法:查阅共享平台数据及其他标本,获取巫山淫羊藿的鉴定和地理分布等信息,于花期开展野外实地观测并比较巫山淫羊藿各居群的形态特征.结果:在检索获取到的 90 号 144 份巫山淫羊藿标本中,仅 15 号(35份)为巫山淫羊藿,其余物种包括金城山淫羊藿、拟巫山淫羊藿、粗毛淫羊藿、镇坪淫羊藿和川鄂淫羊藿,疑似黔岭淫羊藿 1 号,不确定种 17 号.巫山淫羊藿狭域分布于重庆市巫山县和巫溪县,湖北省巴东县、兴山县和神农架林区,集中分布区仅为巫山县和巴东县,同域分布的木鱼坪淫羊藿其形态与巫山淫羊藿最为相似.植株和花的形态特征存在变异,且在居群内和居群间的变异呈现出连续性,但巫山淫羊藿与 6 个形态的相似种仍具有可资鉴别的性状特征.结论:巫山淫羊藿腊叶标本的鉴定错误突出,狭域分布加之过度采收已导致其资源严重破坏,须引起高度重视并应加强保护力度.

目的 对贵州不同产地粗毛淫羊藿样品的遗传多样性和亲缘关系进行分析.方法 利用PopGene 32软件及NTsys2.10e软件分析贵州5个不同产地粗毛淫羊藿的遗传多样性及亲缘关系,并根据UPGMA法,构建亲缘关系树状图.结果 从100个随机引物中筛选出13条多态性稳定、条带清晰的引物,结果表明,共扩增出211个位点,从物种水平上看,共有205个多态性位点,多态性百分率(PPB)为97.16％,Shannon's信息指数(Ⅰ)为0.455 7,Nei's基因多样性指数(He)为0.297 3,有效等位基因数(Ne)为1.490 2,5个居群间总的遗传多样性(Ht)为0.297 3,而居群内的遗传多样性(Hs)为0.207 5,表明粗毛淫羊藿的遗传变异主要存在于群体内,种群内的遗传分化大于种群间.利用UPGMA法构建的居群遗传距离聚类树,表明,5个居群被分为2支,其中来自安顺、花溪、高坡的3个居群聚在一支,来自龙里和雷山的2个居群共同聚为一支.结论 ISSR分子标记技术可以用于贵州不同产地的粗毛淫羊藿植物的遗传多样性和亲缘关系分析.

淫羊藿是我国重要的草本植物,在中药、功能性食品和园林观赏等领域都具有重要用途,受地域差异性影响,淫羊藿属植物的植株形态、花部特征、开花物候和生殖特征各不相同.本研究对四川不同产地野生种群大花类淫羊藿(巫山淫羊藿、粗毛淫羊藿和宝兴淫羊藿)的开花动态、花部特征、访花昆虫与繁殖系统进行了对比研究.结果 表明:(1)3种淫羊藿属植物的开花期较为集中,巫山淫羊藿和粗毛淫羊藿的花期为3月下旬～4月下 旬,单花花期均为3～4 d;宝兴淫羊藿的花期为4月中旬～5月中旬,单花花期5～6 d;(2)膜翅目和双翅目昆虫为3种淫羊藿属植物的有效访花者,有效访花者访花特性与花部特征之间具有明显的相关性;(3)3种淫羊藿属植物的花序、花和果实的数量受所处环境影响较大,自然结实率:巫山淫羊藿＞宝兴淫羊藿＞粗毛淫羊藿;温度和光照是最主要的影响因子.

目的 研究土壤、气候、地理等环境因子对朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷四种有效成分含量的影响,为淫羊藿药材种质资源保护及野生抚育、优良品种培育、GAP规范化种植提供理论依据.方法 通过对不同居群粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿的生长环境进行实地考察,测定四种有效成分含量及土壤养分含量,计算出各有效成分含量与环境因子之间的灰色关联度,评估环境因子对淫羊藿有效成分含量的影响.结果 气候为影响淫羊藿药材品质的主导因子,以无霜期、7月均温、年均降水量、年均日照时数对淫羊藿4种有效成分含量的影响较大;地理位置为次要因子,海拔、经度、纬度对淫羊藿含量测定结果均有较大影响;土壤为非主要因子,其中土壤pH值、水分、速效磷对朝藿定A、朝藿定B、淫羊藿苷含量有一定影响,pH值、铵态氮、有效钾对朝藿定C含量含量有一定影响.结论 气候及地理位置对淫羊藿品质影响较大,在淫羊藿野生抚育及药材栽培等工作上,可作为主要参考因素,选择适宜环境,适当施加所需磷肥、氮肥可提高淫羊藿药材的种质.

Acuminatoside是从粗毛淫羊藿(Epimedzum acuminatum Franch)的地上部分中分离得到的黄酮醇四糖苷,即淫羊藿素(icaritin或anhydroicaritin)在C-3位含有O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-a-L-rhamnopyranoside,在C-7位含O-b-D-glucopyranosyl-(1→2)-b-D-glucopyranoside,该化合物具有潜在的治疗前列腺癌作用.但是从植物分离提取该化合物的收率极低(0.00008％-0.075％),这极大地限制了对Acuminatoside的深入研究、开发与综合利用.朝藿定C是大量易得的淫羊藿素三糖苷,在其C-7-葡萄糖基的2-羟基上引入另一分子葡萄糖基,即可得到Acuminatoside.基于糖基转移酶OleD催化O-糖基化的杂泛性,从NCBI数据库中获得该酶的编码基因,通过密码子优化,全基因合成具有3个氨基酸突变(A242V/S132F/P67T)的ASP OleD.将上述合成基因在大肠杆菌中进行可溶性表达,分离、纯化获得ASP OleD.以朝藿定C为底物,尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-GIc)为糖基供体,ASP OleD为催化剂,发现一个新的酶催化反应.该酶催化反应的产物经HPLC-DAD、UPLC-HRMS及NMR数据分析确定为Acuminatoside.本研究实现了基于糖基转移酶OleD催化O-糖基化的杂泛性,在朝藿定C的C-7-葡萄糖基的2-羟基区域选择性地引入另一分子葡萄糖基,得到Acuminatoside,提供了一种绿色环保、操作简单、选择性高的酶催化转化合成Acuminatoside方法.

了解3种淫羊藿内生细菌群落的结构和组成,为淫羊藿内生菌资源的开发及利用提供参考.采用Illumina Miseq高通量测序技术,分析了粗毛淫羊藿、箭叶淫羊藿及巫山淫羊藿新叶和老叶内生细菌群落的结构和组成.3种淫羊藿叶片内生细菌群落组成结果显示,门水平的优势菌群主要包括变形菌门、厚壁菌门和放线菌门,优势菌属主要为甲基杆菌属(Methylobacterium)、鞘氨醇单孢菌属(Sphingomonas)、放线孢菌属(Actinomy-cetospora)、Kroppenstedtia属、泛菌属(Pantoea)及乳杆菌属(Lactobacillus)等.各样品的优势菌属(相对丰度>5％)存在一定差异,如在粗毛淫羊藿样品中甲基杆菌属、鞘氨醇单孢菌属相对丰度较其他样品高(相对丰度不足2％),而Kroppenstedtia属在箭叶淫羊藿样品中的相对丰度较高,乳杆菌属、魏斯式菌属(Weissella)、马赛菌属(Massilia)和泛菌属的相对丰度则在巫山淫羊藿样品中较高;同时,3种淫羊藿新叶和老叶内生细菌群落组成也存在差异,甲基杆菌属、鞘氨醇单孢菌属、Kroppenstedtia属和马赛菌属在老叶中的相对丰度较高,而乳杆菌属、魏斯式菌属和泛菌属在新叶中相对丰度较高,这些结果达到高度一致.优势益生菌的功能主要体现在促进土壤有机物的分解、合成多种次级代谢产物、诱导作物对病原微生物的抗性等方面.不同种淫羊藿叶片内生细菌群落组成不同,同种淫羊藿的新叶和老叶的内生细菌群落结构也存在差异.该研究首次分析了淫羊藿内生细菌的群落结构,为进一步研究淫羊藿内生细菌微生态及功能菌株的开发利用提供参考.

目的 通过阐明箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、天平山淫羊藿和粗毛淫羊藿不同采收期叶片生物量和主要黄酮醇苷类成分,即朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷(合称为淫羊藿多苷,ABCI)的含量变化规律,为淫羊藿药材合理采收和资源利用提供参考和依据.方法 于2019年3月至2020年1月每月月中和月末采集一次叶片样本,称取叶片重量,采用HPLC法测定4种黄酮醇苷类成分的含量,计算小叶平均重量与ABCI含量乘积作为ABCI积累总量.并采用主成分分析法进行判别分析.结果 从叶片生物量积累规律来看,物种间较相似.小叶均重在5月31日(天平山淫羊藿和粗毛淫羊藿)或6月15日(箭叶淫羊藿和柔毛淫羊藿)前呈上升趋势,随后保持平稳波动.从4种黄酮醇苷类成分含量积累规律来看,物种间存在较大差异.箭叶淫羊藿、粗毛淫羊藿、天平山淫羊藿和柔毛淫羊藿分别在3月15日,6月30日,7月31日和9月30日最高.综合ABCI累积总量和判别分析结果,4个物种最佳采收期各不相同.粗毛淫羊藿、箭叶淫羊藿、天平山淫羊藿和柔毛淫羊藿最佳采收期分别为5月底、6月中旬、8月底和9月中旬.结论 淫羊藿叶片生物量和黄酮醇苷类成分含量积累均受采收期影响较大.基于叶片生物量、有效成分含量及有效成分积累总量三个层次的变化规律和整合分析,为确定药材适宜采收期提供了更新颖、更丰富的信息和参考.