目的 基于遗传、环境因子与丹参Salvia miltiorrhiza品质性状之间的相关性,探究影响丹参品质的主导因子.方法 收集不同产区22个丹参居群(每个居群3个单株)、种植土壤以及气候因子数据.基于简单重复序列间区(inter-simplesequence repeat,ISSR)和目标起始密码子多态性(start codon targeted polymorphism,SCoT)标记分析了丹参不同居群遗传多样性和亲缘关系,利用高效液相色谱法(HPLC)测定了不同产区丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹酚酸B含量.利用原子吸收分光光度法、火焰光度计测定法、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-OES)等技术测定了土壤的理化指标及矿质含量.结果 ISSR和SCoT标记分析结果表明,四川丹参居群单独聚为一类,山东丹参居群分布在不同的聚类组中.经相关性分析,气压、风速与丹参酮类物质的含量呈显著正相关,日降水量≥0.1 mm日数与丹参酮Ⅰ含量以及等位基因数(number of alleles,Na)、有效等位基因数(effective number of alleles,Ne)、Nei氏基因多样性指数(Nei's gene diversity index,H)、香农信息指数(Shannon information index,I)等遗传指数呈显著负相关;水汽压、相对湿度、日降水量≥0.1mm日数等与丹酚酸B含量呈显著正相关,与Na、Ne、H、I显著负相关;日照时数与丹酚酸B含量呈显著负相关,与Na、Ne、H、I显著正相关.隐丹参酮含量与土壤质地、矿质元素Cu、Mg含量显著相关;丹酚酸B含量与土壤有机质、K、碱解N、速效K含量显著相关.结论 遗传与环境因子互相作用影响了丹参的品质.四川丹参居群间遗传变异小,山东丹参遗传变异大,降水、湿度、日照是影响丹参遗传变异以及丹参酮和丹酚酸B积累的主要气候因子.土壤质地能影响隐丹参酮的积累,N肥能促进丹酚酸B积累.

为了解茶树菇(Agrocybe aegerita)种质资源的遗传多样性和筛选优良的茶树菇新品种,采用菌株拮抗试验方法观察了92株茶树菇菌株间拮抗反应及其类型,ISSR-PCR(inter-simple sequence repeat-PCR)分子标记方法对92株茶树菇菌株的遗传多样性进行了综合分析.拮抗试验将92株茶树菇菌株分为27组;筛选出的20条ISSR引物共扩增出317条清晰条带,多态性条带平均比率为82.60％;在遗传相似系数为0.742时,ISSR分子标记分析可将92株茶树菇划分为6大类群,拮抗试验和ISSR分子标记分析的结果基本一致.通过对比农艺性状分析,初步筛选出滇农5、滇农14、茶5-800、白茶、闽农5及滇农8作为工厂化生产茶树菇菌种.结果表明茶树菇的遗传多样性丰富,结合栽培出菇试验可为茶树菇品种选育和杂交育种的亲本选择提供参考.

目的 对不同产区艾Artemisia argyi叶进行遗传多样性分析,为艾叶规范化种植及新品种选育工作奠定基础.方法 采用ISSR分子标记技术对36个不同产区的艾叶样品进行扩增,然后利用POPGENEv1.32软件进行遗传学分析,得出它们的遗传特征系数,用Ntsyspc2.1对艾叶ISSR分子标记结果进行UPGMA聚类分析.结果 筛选出16条引物,共扩增出条带402条,其中多态性条带398条,多态性百分比为99％;在对栽培种和野生种之间遗传距离分析后发现,两者之间的遗传一致度为0.989 1,遗传距离为0.0110;对按纬度划分的4个区域艾资源进行遗传结构与遗传变异分析,4个区域间基因多样性指数(diversity index,Ht)为0.192 7、遗传多样性指数(genetic diversity index,Hs)为0.164 2、遗传变异指数(genetic variation index,Gst)为 0.147 9、基因流(gene flow,Nm)为 2.881 8,NTSYSpc 软件对 4 个区域进行系统聚类分析,可将4个区位划分为2大类,且4区位相邻2个之间均具有一定的遗传相似性.结论 艾叶具有极其丰富的遗传多样性,栽培种和野生种之间亲缘关系接近、遗传背景差异较小.艾叶其遗传特性随着纬度的变化呈现出一种递进式遗传扩散,其中河南南部居群多样性最为丰富,其次为河南中西部和河南中部,北部居群遗传多样性最低.

粗山羊草分布范围广,遗传变异丰富,被认为是改良普通小麦的重要基因源.为深入了解不同来源粗山羊草种质的遗传多样性和群体结构,该研究利用ISSR分子标记对 56 份粗山羊草种质进行了遗传多样性和群体结构分析.结果表明:(1)16 个ISSR引物共检测 170 条多态性位点,每个ISSR引物多态性位点为3～18 条,平均为10.63 条;多态性信息(PIC)变异范围为0.17～0.85,平均为0.67.(2)粗山羊草4 个群体的遗传多样性比较显示,中亚粗山羊草的群体遗传多样性水平最高(He=0.225 4,I=0.355 7),群体间的基因流较低(Nm=1.638 6).(3)聚类结果在遗传相似系数约 0.67 处,来源于塔吉克斯坦 6 份和土库曼斯坦 2 份粗山羊草种质材料聚成一类(Group 2);其他48 份种质材料形成一大类(Group 1),其中Group 1 可进一步分成 3 个Sub亚类,呈现出来源相同的粗山羊草种质材料倾向聚在一起.(4)群体结构分析将 56 份粗山羊草种质分为 5 个群体,其中,来源于西亚伊朗V群体种质材料遗传背景比较一致,混杂程度相对较低;进一步分析各群体Q值,发现IV群体种质材料亲缘关系的来源相对复杂,遗传多样最为丰富.该研究结果可为粗山羊草种质亲缘关系解析、种质多样性保护提供重要参考依据,为其科学利用以及进化研究奠定基础.

为探究云杉矮槲寄生(A rceuthobium sichuanense)的遗传多样性及其与不同寄主选择压力和地理分布的关系,采用ISSR分子标记方法,对青海、甘肃、四川等地区5种寄主上的100份云杉矮槲寄生样本进行遗传多样性和遗传结构分析.结果表明:(1)10条引物共扩增出130个条带,其中多态性条带129条,多态位点百分率(PPB)为99.23%.(2)物种水平上的Nei's遗传多样性指数(He)和Shannon信息指数(I)分别为0.3139和0.4765,表明云杉矮槲寄生物种水平的遗传多样性较高,但群体间的基因流(Nm=0.5287)较弱,可能会加速群体间的遗传分化(Gst=0.486).(3)UPGMA聚类结果显示,来自甘肃、青海的样本聚为一组,表现出较高的相似性,而四川的样本独立聚类;不同寄主来源的聚类结果显示,寄生于鳞皮云杉(Picea asperata)与川西云杉(P.likiangensis var.bal-fouriana)的样本聚为一类,而寄生于青海云杉(P.crassifolia)、青杄(P.wilsonii)和紫果云杉(P.purpurea)的样本聚为一类,表明地理隔离和寄主选择压力对云杉矮槲寄生的遗传分化起到了重要作用.

目的 优化和建立稳定的金槐ISSR-PCR反应体系并筛选出稳定的ISSR-PCR引物.方法 采用L16(45)正交设计方法,以dNTP、Tap酶、ISSR引物、Mg2+浓度和模版DNA 5个影响因素进行4水平优化试验,并对反应体系进行验证;采用优化所得的最佳反应体系进行引物筛选.结果 确立了金槐的最佳ISSR-PCR反应体系:即在25μl总体积反应体系中包含10×Buffer2.5μl,MgCl2 2.5mmol·L-1,ISSR引物0.6μmol·L-1,dNTPs0.25mmol·L-1,Taq酶1.0U,模板DNA约50ng.通过最佳体系进行引物筛选,获得11条适宜金槐扩增的ISSR引物.结论 经过12份金槐样品的验证,证明所建立的体系稳定可靠,可用于金槐遗传多样性、指纹图谱和标记辅助育种等方面的研究.

目的 对同一地区不同生长环境下的锦灯笼种质资源进行遗传多样性分析.方法 通过ISSR标记对千山地区30份锦灯笼种质的遗传多样性和亲缘关系进行分析.结果 所筛选出的14个引物共可检测到相对分子质量在200～2000 bp之间的扩增条带108条,其中多态性条带为66条,占62.72％.不同引物所可扩增出6～10条清楚的条带,平均可扩增出的条带数为7.71,多态性条带在0～6条之间,多态性比率在0 ～ 100％之间,每个引物平均可扩增多态性条带为4.71条.通过聚类分析软件NTsys 2.10e对ISSR-PCR扩增所得的多态性位点进行分析,锦灯笼样品间的GS平均值为0.81,变化范围为().67～0.96.结论 表明千山地区的锦灯笼资源间存在比较丰富的遗传多样性,可为今后锦灯笼种质资源遗传保护、品种鉴定、新品种选育提供基础.

目的 分析当前生药分子鉴定领域的文献特征,总结和归纳该领域的研究现状,探讨生药分子鉴定领域未来的发展方向.方法 以Web of Science中的科学引文索引扩展版数据库(SCI expanded,SCIE)为数据来源,检索2000-2016年生药分子鉴定领域的相关文献,运用文献计量学方法和Gephi软件,从年代、期刊、发文机构、国家/地区及生药分子鉴定的技术方法等方面进行分析.结果 共纳入有效文献5108篇,涉及3720位作者,1695家发文机构,421种期刊,发文国家/地区主要以中国、美国、韩国为主;研究内容以长春花、人参、烟草、小麦、青蒿为主,技术方法以随机扩增多态DNA技术、微卫星法和扩增片段长度多态性为主,研究热点主要集中在生药分子鉴定中的多基源鉴定、产地鉴定及种群遗传学和分子谱系地理学.结论 生药分子鉴定仍处于上升的发展阶段,分子鉴定的技术方法及研究的中药品种在不断扩展和延伸.

目的 筛选最适党参基因组DNA的提取方法及ISSR (inter-simple sequence repeat)引物,为研究党参种植资源遗传多样性及DNA鉴定奠定基础.方法 以党参嫩叶作为材料,采用常规SDS法、改良CTAB法和试剂盒法3种提取方法基因组DNA,用优化的ISSR-PCR反应对100条引物进行筛选.结果 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA,改良CTAB法效果最佳.从公布的100条ISSR引物中筛选出10条引物,能扩增条带清晰、稳定性好、多态性高的DNA条带.结论 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA进行ISSR分子标志研究遗传多样性时应采用改良CTAB法,筛选出合适的引物在ISSR分子标志中很重要.

石斛作为我国传统中药材,具有养阴生津、润肺明目、抗癌防老等显著功效,有着广泛的分布和悠久的应用历史.随着分子生物学技术的发展,石斛属药用资源的研究进展迅速,分子标记技术具有微量、快速、特异性强、准确可靠等特点,为石斛资源的研究提供了新的方法.通过选用RAPD,ISSR,AFLP,SRAP等不同分子标记的结合使用,对石斛不同种类之间的遗传多样性及亲缘关系进行分析,获得的遗传信息,可以为濒危的石斛资源的保护及开发利用提供理论依据.核基因、线粒体基因、叶绿体基因的结合应用,可以有效便捷地鉴定石斛正品,为进一步发展中药材特异性分子鉴定提供科学依据.同时不同基因片段序列的联合运用,可以作为石斛鉴别DNA条形码的分子标记,将为石斛类药材的鉴定提供新的思路和方法,有效提高石斛属植物的鉴定速度和效率.该文从分子鉴定,DNA序列,石斛功能基因等方面进行论述,为石斛属药用植物的进一步开发应用提供理论基础,同时也为石斛属植物的有效保护和可持续开发提供科学依据.